解整合素-金属蛋白酶1 2基因在骨巨细胞瘤组织中的表达及意义

目的 检测解整合素-金属蛋白酶12（ADAM12）基因在骨巨细胞瘤组织中的表达和定位,探讨其对骨巨细胞瘤中多核巨细胞形成的作用。方法 用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测18例、用RNA原位杂交检测12例骨巨细胞瘤患者的瘤组织、6倍体外培养骨巨细胞瘤瘤细胞、2例胚胎横纹肌和5例成人横纹肌组织的ADAM12mRNA。结果 RT-PCR显示,18例骨巨细胞瘤组织中,12例（67%）有ADAM12mRNA表达;RNA原位杂交则显示12例骨巨细胞瘤组织全部呈ADAM12阳性反应,并且位于几乎所有的多核巨细胞和单核基质细胞质中。随着骨巨细胞瘤培养细胞传代次数的增多和多核巨细胞的消失,ADAM12mRNA的表达也逐渐消失。结论 骨巨细胞瘤中的多核巨细胞可能是由单核基质细胞融合而成,ADAM12基因参与这一融合过程。     

α_1(Ⅰ)型前胶原基因反义重组质粒对成纤维细胞的影响

目的　研究反义RNA对成纤维细胞胶原蛋白的调控作用 ,探讨基因治疗增生性瘢痕的可能性。方法　将α1 (Ⅰ )型前胶原基因片段反向克隆至非整合型哺乳动物表达载体pREP9的多克隆位点中 ,以构建α1 (Ⅰ )型前胶原基因反义RNA表达载体pREP9 AScoll,并籍脂质体 lipofectamine将其导入人胚肺HLF细胞中 ,运用MTT试验、电镜、3H 脯氨酸掺入法检测反义RNA表达载体对HLF细胞的影响。结果　外源重组体pREP9 AScoll对胶原蛋白的合成有明显抑制作用 ,但对细胞增殖无任何影响。结论　α1 (Ⅰ )型前胶原基因反义重组质粒能有效调控胶原蛋白的合成 ,从而有在基因水平防治瘢痕的前景。     

骨肿瘤增殖细胞核抗原免疫组化研究

应用增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）单克隆抗体免疫组化方法检测４０例骨肿瘤切片。结果表明，各亚型和各组织学分级的骨肉瘤和骨巨细胞瘤ＰＣＮＡ阳性率无统计学意义。骨巨细胞瘤组织中的单核基质细胞和多核巨细胞中的部分细胞核呈ＰＣＮＡ阳性，提示单核基质细胞是肿瘤性细胞，而部分多核巨细胞是由这些肿瘤性单核基质细胞融合而来。软骨肉瘤ＰＣＮＡ阳性率明显低于骨肉瘤的软骨母细胞型。     

ZHX2-GST融合蛋白原核表达载体的构建和鉴定

目的:构建编码ZHX2-GST融合基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并对融合蛋白(ZHX2-GST)进行鉴定。方法:RT-PCR提取正常肝组织的RNA,然后扩增出ZHX2基因cDNA全长,克隆至含有GST标签的原核表达载体PGEX-4-1中,转化到Ecoli.BL21(DE3),IPTG诱导大肠杆菌表达ZHX2-GST蛋白,电泳分离鉴定。结果:测序结果显示克隆的ZHX2cDNA序列正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量118ku,与ZHX2-GST分子量相符。结论:成功构建了编码ZHX2基因的ZHX2-GST原核表达载体,融合蛋白可用于临床及实验研究。     

热休克蛋白与肿瘤免疫

热休克蛋白作为免疫佐剂和抗原肽载体参与机体抗肿瘤免疫 ,热休克蛋白 肽复合物可以通过多条抗原递呈途径激活特异性CD8+ CTL ,这一过程同时还伴有其他免疫细胞或分子的协同参与 ,从而通过多种机制共同发挥抗肿瘤免疫作用。热休克蛋白 肽复合物抗肿瘤疫苗已证实具有良好的应用前景。     

NY-ESO-1和热休克蛋白70融合基因的构建和原核表达

目的 构建热休克蛋白(HSP)70和肿瘤睾丸抗原NY-ESO-1融合基因,并在大肠杆菌中诱导表达. 方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从人肝癌细胞株HepG2扩增HSP70基因,测序后插入pGEX-ESO1质粒中,构建NY-ESO-1与HSP70的N端融合基因原核表达质粒pGEX-ESO1-HSP70,IPTG诱导含有该质粒的大肠杆菌BL21(DE3)表达目的蛋白,Western blot 鉴定蛋白的特异性. 结果 扩增得到长度为1 917 bp的人HSP70全长基因,测序结果表明与GenBank公布的序列一致;获得pGEX-ESO1-HSP70融合基因原核表达质粒,经IPTG诱导,在BL21(DE3)中表达分子量约106 kD的融合蛋白(包括GST 26 kD,NY-ESO1 10 kD,HSP70 70 kD),Western blot检测该蛋白可与HSP70特异性结合. 结论 成功构建pGEX-ESO1-HSP70重组表达质粒,并获得高效表达的ESO1-HSP70融合蛋白,为HSP70-多肽疫苗在肿瘤免疫治疗中的作用奠定基础.     

TGF-β1和 EGFP 体外电转染兔骨髓间充质干细胞的实验研究

目的：通过电转染介导转化生长因子β1(TGF-β1)转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察Ⅱ型胶原表达的情况。方法用全骨髓细胞贴壁培养法分离、培养兔 BMSCs;诱导14 d 后,免疫组化和 Western blot 法检测Ⅱ型胶原表达。结果 BMSCs CD90表达阳性,CD31表达阴性;成功转染 TGF-β1至 BMSCs;通过免疫组化及 Western blot 法检测TGF-β1组细胞内Ⅱ型胶原有较强的表达,与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)组和空白对照组相比差异有统计学意义(P<0．05)。结论电转 TGF-β1质粒至兔 BMSCs,可以促进Ⅱ型胶原表达。