人成骨肉瘤细胞系（OS－732）对骨质破坏吸收的病理

用人成骨肉瘤ＯＳ－７３２细胞系与人胎骨粒共培养，观察瘤细胞浸润及溶解吸收骨质的过程。可见（１）瘤细胞突侵入骨质浅层，包绕骨基质致呈小块状分离，然后吸收；（２）瘤细胞分泌水解酶，直接溶解及吸收骨基质，致骨质表层陷窝状凹陷。故认为瘤细胞能直接浸润及溶解骨质，而不需要破骨细胞的参与。作者尚应用￣（４５）Ｃａ标记新生小鼠颅骨与人成骨肉瘤细胞系共培养，以及加入骨质溶解促进剂（ＥＧＦ）及抑制剂（二磷酸盐）后，通过液闪计数仪检测以及￣（４５）Ｃａ释出的数据，加以比较及分析。结果说明ＥＧＦ能使骨质溶解增强；小剂量二磷酸盐可抑制骨质的溶解，但大剂量二磷酸盐则有加速骨肉瘤细胞溶解骨质的作用。     

肿瘤-睾丸抗原LAGE-1基因的原核表达纯化和抗血清制备

目的:构建人肿瘤-睾丸抗原LAGE-1的原核表达质粒,表达、纯化LAGE-1融合蛋白并制备GST-LAGE-1多克隆抗体。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增人肝癌组织LAGE-1基因3′端片段,连入原核表达载体pGEX-4T-1( ),构建原核表达质粒pGEX-LAGE-1并测序。将该质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,经包涵体透析复性和谷胱甘肽巯基转移酶纯化系统分离纯化目的蛋白。用纯化的融合蛋白GST-LAGE-1免疫新西兰大白兔,间接ELISA法测定抗体效价,饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体,并采用Western blot检测GST-LAGE-1多克隆抗体特异性。结果:RT-PCR扩增得到LAGE-1基因3′端264bp片段,测序结果与GenBank公布序列一致;成功构建pGEX-LAGE-1原核表达质粒,含有该质粒的大肠埃希菌经IPTG诱导后表达相对分子质量约为36×103的蛋白,经包涵体复性和GST融合蛋白纯化系统纯化,得到重组蛋白GST-LAGE-1,纯度达90%;制备兔抗GST-LAGE-1抗体,纯化的抗体经Western blot证实可与目的蛋白特异性结合。结论:获得了纯化的肿瘤-睾丸抗原LAGE-1重组蛋白及其特异性多克隆抗体,为进一步研究LAGE-1抗原在肿瘤免疫治疗中的作用奠定基础。