柚寄生抗炎活性部位筛选的实验研究

目的:筛选柚寄生抗炎作用的活性部位。方法:采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀及冰醋酸致小鼠毛细血管扩张法对柚寄生萃取部位进行抗炎作用研究,筛选出其抗炎作用的活性部位。结果:柚寄生乙酸乙酯萃取部位及正丁醇萃取部位均对小鼠耳廓肿胀以及腹腔毛细血管通透性有显著抑制作用(P<0.01或P<0.05)。结论:柚寄生的乙酸乙酯萃取部位和正丁醇萃取部位是其抗炎作用的活性部位。     

窒息早产儿血糖水平测定

新生儿窒息后早期的血糖变化日益受到儿科医生的关注。无论是低血糖或高血糖，均可加重脑损害。本文对20例窒息早产儿生后进行血糖监测，旨在探讨窒息后早产儿血糖水平变化及其临床意义。     

社区糖尿病病人饮食干预的策略分析

[目的] 探讨社区糖尿病饮食干预的策略。[方法] 选取上海某社区的糖尿病病人160例，以社区为基础分为干预组89例和对照组71例。干预组饮食干预采用食品交换法，干预内容为4步操作，干预管理为病人自我管理，干预期为3个月。同时排除运动等因素的干扰。[结果] 干预组干预后1个月、3个月与干预前果糖胺之间的差异具有统计学意义，而对照组的改变无统计学意义。[结论] 社区糖尿病饮食干预策略的内容可采用食品交换法4步操作，形式可采用自我管理。     

XAF1基因重组腺病毒载体的构建及其在人肝癌细胞体内外的表达

目的利用携带35型腺病毒纤毛的嵌合型5型腺病毒载体系统Ad5/F35构建XAF1基因重组腺病毒,体内外感染人肝癌细胞SMMC7721并使XAF1基因有效表达。方法将真核表达质粒pcDNA3.1-XAF1和穿梭质粒pDC316用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切、筛选、测序获得重组穿梭质粒pDC316-XAF1。将测序正确的pDC316-XAF1和骨架质粒pBHG-fiber5/F35用Lipofectamine2000共转染HEK293细胞,进行细胞内同源重组,得到重组腺病毒Ad5/F35-XAF1。予终点稀释法测定重组腺病毒的感染滴度。用同样的方法得到携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的报告病毒Ad5/F35-EGFP。建立人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤模型,将Ad5/F35-XAF1和Ad5/F35-EGFP重组腺病毒分别感染人肝癌细胞株SMMC7721和瘤内注射;荧光显微镜观察EGFP在细胞和移植瘤冰冻切片中的表达;RT-PCR和Westrenblot法检测XAF1的mRNA和蛋白在细胞和移植瘤组织的表达。结果重组腺病毒Ad5/F35-EGFP感染肝癌细胞和瘤内注射后,予荧光显微镜均可见细胞和冰冻切片中呈现绿色荧光;Ad5/F35-XAF1感染肝癌细胞和瘤内注射后,XAF1mRNA和蛋白表达均显著高于对照组和报告病毒组。结论成功构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1和Ad5/F35-EGFP。该腺病毒载体可携带目的基因在人肝癌细胞株SMMC7721体内和体外进行有效表达。     

生存素基因突变体诱导胃癌细胞有丝分裂障碍的实验研究

目的 观察生存素基因突变体质粒(Cys84Ala)对胃癌细胞有丝分裂过程中细胞动力学行为的影响。方法 应用基因重组技术构建Cys 84 Ala，以脂质体转染的方法将质粒DNA转入胃癌细胞株，应用免疫组化法检测胃癌组织中生存素基因表达，流式细胞仪检测胃癌细胞凋亡及细胞周期，Western blot检测胃癌细胞中多聚ADP核糖聚合酶(PARP)和细胞色素C蛋白的表达，免疫荧光染色检测有丝分裂危象情况。结果 Cys84Ala可通过抑制野生型生存素基因的功能诱导胃癌细胞凋亡，增加caspase-3活性，促进PARP裂解和细胞色素C的释放，亦可导致胃癌细胞发生有丝分裂障碍而死亡。结论 cys84Ala能通过不同的途径诱导胃癌细胞凋亡和有丝分裂危象，并有可能成为胃癌治疗的一个候选基因。     

CD4+CD25+调节性T细胞与克罗恩病发病关系

目的研究克罗恩病（CD）患者外周血白细胞介素（IL）-6水平与外周CD4＋CD25^＋调节性T细胞（Treg细胞）频率及体外抑制功能的变化在CD发病中的作用。方法应用流式细胞术检测CD患者与正常对照者外周CD4^＋CD25^＋Treg细胞的频率及表型以及特征性标志叉状头／翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）的表达，同时通过MACS缓冲液分选出外周血CD4^＋CD25^＋T细胞和CD4＋CD25^-T细胞，应用[^3H]-胸腺嘧啶渗入法研究CD4^＋CD25^＋T细胞对自体CD4^＋CD25^-效应T细胞增殖的抑制能力。酶联免疫吸附法（ELISA）检测外周血IL-6水平。结果活动性CD患者外周血IL-6水平显著高于非活动性患者及正常对照者。活动性CD患者外周CD4^＋T细胞中CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞的频率显著低于非活动性CD患者，差异有统计学意义。体外抑制功能试验同样提示活动性CD患者的CD4^＋CD25^＋Treg细胞抑制功能减弱。结论CD4^＋CD25^＋Treg细胞抑制功能减弱与CD发病可能有关，可初步解释CD患者出现的免疫耐受缺失现象。     

抗氧化剂对大鼠重症急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡的影响

目的探讨四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯（PDTC）对重症急性胰腺炎（SAP）胰腺腺泡细胞凋亡的影响。方法SD大鼠72只，随机分为：假手术组（sham operation，SO）、SAP组和PDTC组。SAP模型采用5％牛磺胆酸钠1ml/kg胰胆管逆行穿刺注射建立，PDTC组在造模前1h给予腹腔注射PDTC（1130mg/kg），术后分4个时段（1、3、6、12h）分批进行腹主动脉采血后处死，取胰腺组织作病理切片与液氮冻存。胰腺腺泡细胞的凋亡检测应用TUNEL法、电镜以及免疫组化法检测胰腺组织Caspase-3的表达；核因子（NF）-κB活化的检测应用免疫组化法。同时观察各组血清淀粉酶、脂肪酶水平及胰腺组织病理学评分。结果SAP组各时间点血清淀粉酶及脂肪酶水平及胰腺组织病理组织学评分较SO组显著增高（P〈0．05）。PDTC治疗组血清淀粉酶、脂肪酶水平较SAP组明显降低；胰腺组织病理组织学评分明显改善。PDTC治疗后3、6、12h胰腺组织Caspase-3的表达显著高于SAP组（P〈0．01），而在1h无统计学差异；各时间点胰腺腺泡细胞凋广指数显著高于SAP组（P〈0．01）；NF—κB的活化显著低于SAP组（P〈0．01）。结论SAP时，PDTC可能通过抑制NF—κB的活化，从而抑制NF—κB介导胰腺细胞的抗凋亡效应，减少胰腺腺泡细胞坏死。     

大黄素诱导急性胰腺炎胰腺细胞凋亡机制的实验研究

目的从凋亡信号传导的角度探讨中药大黄素治疗大鼠急性胰腺炎的分子生物学机制.方法将44只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、非治疗组、大黄素组.以腹腔注射雨蛙肽的方法诱导大鼠急性胰腺炎模型,并于大黄素治疗后6、24、48、72、96小时处死大鼠.应用HE染色比较胰腺组织病理学改变,应用Tunel法检测胰腺细胞凋亡指数,应用RT-PCR技术检测治疗前后凋亡调控基因Bak 和Bax mRNA表达.结果大黄素干预治疗急性胰腺炎后96小时淀粉酶值显著低于未治疗组,胰腺细胞凋亡指数显著高于未治疗组,凋亡调控基因Bak mRNA 的表达与未治疗组之间无显著性差异,而Bax mRNA的表达显著高于未治疗组.结论大黄素治疗实验性急性胰腺炎的机制可能与干预凋亡调控基因有关,诱导凋亡调控基因Bax表达增强可能是干预凋亡信号传导的重要机制,而与Bak 基因表达无关.     

血清miR-146a／b实时荧光定量分析及其作为分子标志物的初步评价

目的：以特异性调节Toll样受体信号通路的miR-146a／b为检测靶标,建立血清miRNAs分子荧光定量检测方法,并对其作为血清炎症分子标志物的潜在价值进行初步评价。方法：采集正常体质量儿童血清20例（对照组）、超重儿童血清20例（超重组）、肥胖儿童血清20例（肥胖组）及健康成年人血清50例（健康成人组）,酚-氯仿法提取血清总RNAs,SYBRGreen实时荧光定量技术定量检测血清中miR-146a／b拷贝数,GraphpadPrism5．0软件进行统计分析并绘图。结果：对照组血清中miR-146a的拷贝数显著低于超重组（P=-0．0061）和肥胖组（P=-0．0262）,超重组和肥胖组之间差异无统计学意义（P=0．0656）。miR-146a表达量的受试者工作特征曲线下面积（AUC）分析显示：对照组vs超重组AUC=O．8475,P=-0．0002;对照组vs肥胖组AUC=0．6050,P=-0．2560;超重组vs肥胖组AUC=0．5475,P=0．6073。miR-146b与miR-146a呈不同表达趋势,超重组儿童血清miR-146b拷贝数显著高于对照组（P=-0．0090）和肥胖组儿童（P=0．0023）,肥胖组儿童血清中miR-146b的拷贝数均值虽略低于对照组,但差异无统计学意义（P=-0．1556）。miR-146b表达量的AUC分析显示：正常组vs超重组AUC=0．7425,P=O．0087;正常组vs肥胖组AUC=0．6325,P=0．1517;超重组vs肥胖组AUC=0．7825,P=0．0023。miR．146a／b拷贝数值变异系数（CV）大：对照组、超重组和肥胖组儿童血清中miR。146a拷贝数的cv值分别为80．94％、110．94％、175．88％;miR-146b拷贝数的cV值分别为164．11％、189．72％、152．00％。在健康成人血清中miR-146a／b呈现相近表达模式,miR-146a和miR-146b的cV值分别是37．86％、74．82％。结论：miR-146a在对照组、超重组和肥胖组的表达量变化显示其与儿童肥胖具有-定相关性,可以从整体水平说明miR-146a与体内炎症水平呈正相关关系,但是由于其在血清中拷贝数值变异较大且各组问无明确分界,不能确定其参考值范围。因此,血清miR-146a／b拷贝数差异不足以用于临床个体化诊断,血清miR-146a／b作为炎症相关分子标志物的价值尚需进一步探讨。     

血浆D-二聚体及纤维蛋白（原）降解产物检测的临床意义

目的 探讨血浆D-二聚体和纤维蛋白（原）降解产物在临床不同血栓性疾病的诊断、疗效观察和预后判断中的应用价值.方法 选取2013年6-11月兰州大学第一医院住院病人257例作为疾病组,健康对照组34例,用酶联免疫荧光法、胶乳免疫比浊法对不同疾病患者的血浆D-二聚体和纤维蛋白（原）降解产物进行检测.结果 过敏性紫癜、脑梗死、肝硬化、原发性肝癌、急性粒细胞白血病、肺栓塞、静脉血栓形成等疾病患者血浆D-二聚体和纤维蛋白（原）降解产物增高,与健康对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 D-二聚体、纤维蛋白（原）降解产物检测有助于临床对患者高凝和纤溶状态的判断与治疗.