流式细胞术检测非小细胞肺癌外周血循环内皮细胞方法初探

目的探索流式细胞术单种CD分子（CD146）标记法和三种CD分子（CD45CD31CD146）标记法对非小细胞肺癌外周血循环内皮细胞（circulating endothelial cells,CECs）检测效果的影响。方法采用流式细胞术单种CD146和三种CD分子标记法检测60例非小细胞肺癌患者及20例健康人外周血CECs。结果流式细胞术单种CD146和三种CD分子标记法对非小细胞肺癌患者和健康人外周血循环内皮细胞检测成功,两种方法显示肺癌患者外周血CECs均高于健康对照,差异有统计学意义（P〈0.05）。两种方法测定CECs的结果呈正相关,有统计学意义（r=0.834,P〈0.01）。精密度试验显示三种CD分子标记循环内皮细胞法优于单种CD146标记法。结论单种CD146和三种CD分子标记非小细胞肺癌患者和健康人外周血细胞均可经流式细胞术用于测定CECs,三种CD分子标记循环内皮细胞法优于单种CD146标记法。     

hnRNP A2/B1基因的蛋白表达初步探讨

目的：克隆hnRNPA2／B1基因并构建全长cDNA的原核表达载体，在大肠杆菌中进行表达。方法：以RT-PCR法从人平滑肌肌细胞总RNA中克隆hnRNPA2／B1eDNA，连接至pGEX-4T—1载体，构建重组表达质粒，转化感受态E．coli BL21进行诱导表达。结果：克隆hnRNPA2／Bl基因全长eDNA序列，经DNA测序证明与GenBank一致。进而构建重组表达载体PCEX—A2／B1，在E．coli中表达出相对分子量约63kD的融合蛋白，免疫分析证实为hnRNPA2／B1蛋白。结论：成功克隆hnRNPA2／B1基因。在E.coli获得融合表达，为进一步研究其功能及应用提供基础。     

抗hnRNP A2/B1多克隆抗体制备及其在非小细胞肺癌中的应用

目的:探讨自主制备抗hnRNP A2/B1多克隆抗体,对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的诊断、与病理特征的关系及其在预后中的价值。方法:IPTG诱导表达hnRNP A2/B1蛋白,制备兔抗人hnRNP A2/B1多克隆抗体,在45例NSCLC和16例肺炎性假瘤术后蜡块组织中,采用免疫组化的方法进行检测,并且与国外商品化的抗hnRNP A2/B1单克隆抗体进行比较,以观察自主制备的多抗在临床中的应用价值。结果:成功制备兔抗人hnRNP A2/B1多克隆抗体;应用该多抗在NSCLC组中免疫组化的表达阳性率为62.2%显著高于癌旁组织的40.0%(P=0.035)及炎性假瘤组的31.3%(P=0.033)。与临床病理特征的关系研究中发现,该蛋白高表达与年龄、吸烟呈正相关,与分化程度呈负相关;在预后中2组生存时间有差别,多抗阳性组的生存时间比阴性组的生存时间明显要短(P=0.048)。结论:获得抗hnRNP A2/B1的多克隆抗体,应用该多抗对NSCLC的诊断,病情预后具有一定的临床价值。     

安徽省非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因的突变

目的 探讨安徽省地区非小细胞肺癌(NSCLC)患者中表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的情况,比较特异引物双扩增系统(ADxARMS)和直接测序检测EGFR基因突变的敏感性.方法 对甲醛溶液固定石蜡包埋的手术标本用显微切割技术获取肿瘤组织细胞,采用QIAamp DNA提取试剂盒提取基因组DNA,通过ADx-ARMS及DNA直接测序技术分析NSCLC患者中EGFR基因突变情况.结果 45例NSCLC中,ADx-ARMS检测有29例存在EGFR基因突变,突变检出率为64.4％,其中22例为外显子19的缺失突变,6例为外显子21点突变,1例为外显子19和21的共同突变.直接测序检测出12例EGFR基因突变与ADx-ARMS检测结果一致.非鳞癌EGFR基因突变率84.8％( 28/33)高于鳞癌患者8.3％(1/12),两者之间的差异具有统计学意(P=0.000);女性患者的突变率为83.3％( 20/24)高于男性患者42.9％(9/21),两者之间的差异具统计学意义(P=0.005).结论 在安徽地区NSCLC中,EGFR基因的突变以外显子19的缺失突变和外显子21的点突变为主,突变率以非鳞癌和女性较高.ADx-ARMS法能快速、准确检测EGFR基因突变.     

以肺部多发结节影就诊的Wegener肉芽肿临床分析

目的提高临床医师对Wegener肉芽肿的临床表现、诊断及治疗方法的认识。方法通过l例以肺部多发结节待查收治的Wegener肉芽肿病例资料回顾分析,结合近十年该病的相关文献对比研究。结果 Wegener肉芽肿病临床表现多种多样,可致多系统损害,影像学表现各异,病理上主要表现为中、小血管坏死性血管炎,治疗以糖皮质激素和免疫抑制剂为主。结论关注其影像学特征结合ANCA及病理对Wegener肉芽肿准确诊断具有重要意义。     

分子标志物早期诊断肺癌的进展

目前肺癌已成为大城市男性恶性肿瘤发病率及死亡率的首位,早期诊断及早期治疗是遏制肺癌危害的最好方法。分子生物学的进展为肺癌早期诊断带来了希望,本文就肺癌发生的早期分子标志物的研究进展进行探讨。p16基因p16基因定位于9p21,外显子编码翻译的产物即P16蛋白能够抑制细胞的增殖,其启动子区5-CpG岛的异常甲基化是导致该基因表达失活的一个重要途径。Belinsky于1998年第一次提出p16基因异常甲基化是肺癌发生的一个早期事件,是一个新的肿瘤分子标志物,这种甲基化在肿瘤发生过程中的组织增生和化生阶段就已经出现,且甲基化的水平与吸烟、…