人类疱疹病毒7型糖蛋白(gL)的研究

克隆人类疱疹病毒7型（HHV-7）糖蛋白gL，分别连接入酵母双杂交载体pAS2—1、pACT2。通过双杂交技术，分析gL基因表达蛋白与gH、CD4的相互作用。发现含gL、gH基因的重组酵母菌Y190具有β-半乳糖苷酶活性，而含gL、CD4基因的重组Y190未检测到相应活性。结果表明，gL表达蛋白在酵母双杂交系统中能够与另一HHV-7糖蛋白gH结合，而与HHV-7已知受体CD4无相互作用。     

逆转录病毒介导乙型肝炎病毒C基因在树突状细胞中的转移

目的：探讨逆转录病毒介导乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因在骨髓来源的树突状细胞(DC)的转移效率，以及对DC成熟和功能的影响。方法：用含有HBV C基因的重组逆转录病毒载体，感染处于分裂期的小鼠骨髓祖细胞，感染后的骨髓细胞在GM—CSF和IL—4存在的条件下继续培养获得成熟的DC，用PCR、RT—PCR，分析目的基因的整合与转录；用Western blot和流式细胞仪，分析HBcAg的表达及基因转移效率，以及检测感染前后DC CD80和MHC—Ⅱ类分子的表达以及分泌IL—12能力的变化；通过将基因转移后的DC与淋巴细胞进行混合培养，检测其体外诱导CTL的能力。结果：逆转录病毒感染后并不影响骨髓来源的DC成熟，对其表面分子CD80和MHC-Ⅱ类分子的表达和分泌IL-12的能力没有影响。目的基因能整合到DC的基因组DNA中，并能转录和翻译。约28％的DC能表达HBcAg，感染后的DC体外能诱导T细胞应答。结论：逆转录病毒能有效地将HBV C基因转移到骨髓来源的DC中，对DC的成熟和功能无明显影响，并能诱导CTL应答，这将有助于开展以DC为基础的慢性乙肝的免疫治疗。     

人硫氧还蛋白还原酶cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的：克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体，获得TR蛋白。方法：采用反转录聚合酶链式反应(RT—PCR)技术，从人胚脑组织中扩增出TRcDNA片段，克隆至pGEM—T载体并转化大肠杆菌DH5α，获得重组质粒pGEM—TR；经序列分析证实后，提取pGEM—TR重组体，由双酶切得到目的片段，并插入pET9c原核表达质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)，获得重组质粒pET—rhTR。异丙基硫代—β—D—半乳糖苷(IPTG)诱导pET—rhTR在BL21中表达，用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)分析重组蛋白。结果：克隆的TRcDNA与人胎盘组织TRcDNA同源性为99％；pET—rhTR在大肠杆菌中高效表达，目的蛋白占菌体总蛋白量的36％，其分子质量为55ku。TRcDNA序列被GenBank收录，登录号为AF208018。结论：成功克隆了人脑组织来源的TR基因，该基因在大肠杆菌中得到高表达，为进一步研究其功能奠定基础。     

Epstein—Barr病毒潜伏膜蛋白2A重组痘苗病毒转染DC及特异性CTL的体外诱导

通过ＥＢ病毒ＬＭＰ２Ａ重组痘苗病毒转染的ＤＣＳ体外诱导ＬＭＰ２Ａ特异性ＣＴＬ,并通过ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４和ＴＮＦ－ａ培养体系,我们诱导出了人外周血单核细胞来源的ＤＣ。同时选用在鼻咽癌患者中表达的ＥＢ病毒潜伏蛋白之一ＬＭＰ２Ａ作为靶基因,利用重组痘苗病毒转染诱导的ＤＣＳ。ＤＣＳ与自体ＰＢＭＣＳ混合培养,在ＩＬ－２的刺激作用下获得特异性ＣＴＬ。结果如下：１．人外周血单核细胞经ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＴＮＦ－ａ的混合培养,１０天可获得成熟的功能性ＤＣＳ。ＦＡＣＳ检测显示ＤＣ表面相对特异性标志ＣＤ８３…     

爱泼斯坦-巴尔病毒潜伏期膜蛋白2A cDNA的克隆及序列分析

目的：克隆爱泼斯坦－巴尔病毒（EBV）潜伏期膜蛋白2A（LMP2A）基因，研究其基因工程疫苗，方法：用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）扩增出EBV B95．8株LMP2A全部编码蛋白的基因，并克隆至载体pGEM-T中，通过α－插入失活，PCR及EcoRⅠ、SmaⅠ限制性内切酶双酶切等鉴定重组质粒，采用Sanger双脱氧终止法测定cDNA片段的核苷酸 序列。结果：克隆出LMP2A第1个外显子到第8个外显子的全部编码蛋白的cDNA，测序结果与EB病毒B95．8原型株LMP2AcDNA作同源比较，完全一致，结论：本实验克隆了LMP2A基因的全部编码蛋白的cDNA全长片段。     

氯化物硫氰酸汞比色法测定的若干问题

氯化物硫氰酸汞比色法测定的若干问题彭光勇，刘文虎（解放军第八一医院生化科，南京２１０００２）目前一些实验室多采用硫氰酸汞比色法测定血清氯。本文就该法测定过程中常碰到的一些问题，如Ｈｇ（ＮＯ３）２用量的选择、温度对显色的影响、标准管与标准曲线的选择及稳...     

诱导特异性CTL为基础的EBV相关肿瘤免疫治疗策略

Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒（ＥＢＶ）属于γ－疱疹病毒家族，在人群中感染非常普遍，在体内以潜伏和增殖状态存在。它是传染性单核细胞增多症（ＩＭ）的病原，同时也能引起Ｂ淋巴细胞增生性疾病。ＥＢＶ也是重要的肿瘤ＤＮＡ病毒，目前发现其与非洲儿童Ｂｕｒｋｉｔｔ＇ｓ淋巴瘤（ＢＬ）和鼻咽癌（ＮＰＣ）、何杰金氏淋巴瘤（ＨＤ）、成人Ｔ细胞淋巴瘤及各种免疫抑制剂治疗病人和器官移植病人的淋巴细胞增生紊乱引起的淋巴瘤等密切相关。ＥＢＶ感染在体内能激发强烈的特异性杀伤性Ｔ细胞（ＣＴＬ），其能控制病毒的潜伏、增殖、维持及转…     

腺病毒载体介导EB病毒潜伏期膜蛋白2A基因转染树突状细胞对其功能的影响

目的 探讨腺病毒载体介导EB病毒（EBV）潜伏期膜蛋白2A（LMP2A）基因转染树突状细胞（DC）对其功能的影响。方法 通过同源重组法构建带有EBV－LMP2A基因的重组腺病毒Ad5-LMP2A，用不同感染滴度（MOI）的Ad5-LMP2A转染成熟的DC，用流式细胞术（FACS）检测DC的LPM 2A蛋白表达细胞百分率及用台盼蓝染色计数DC死亡百分率，选择最佳MOI；用最佳MOI的Ad5-LMP2A转染成熟的DC，FACS检测转染前后DC表面分子CD1a、CD83、CD40、CD80及HLA－DR的变化；并用^3H-TdR掺入法检测转染前后DC刺激同种淋巴细胞增殖能力及荧光定量PCR检测表达IL－12 P40 mRNA等功能的改变。结果 MOI 200为Ad5-LMP2A转染DC的最佳滴度，此时约80％的DC表达LMP2S蛋白及92％以上细胞为活细胞。Ad5-LMP2A转染成熟DC前后对细胞表面共刺激分子及特征性表面标志无影响；转染后的DC仍具有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖能力和表达IL－12 P40 mRNA的功能。结论 腺病毒载体能高效介导EBV LMP2A基因在DC中表达，Ad5-LMP2A转染成熟DC对其功能无明显影响，便于进一步用于EBV相关肿瘤的免疫治疗。     

雷公藤多甙和白细胞介素-1 0对人树突状细胞表面人类白细胞抗原-DR和CD80表达及白细胞介素-12 p40转录和分泌的影响

目的：研究雷公藤多甙和IL－10对人树突状细胞（DC）表面人类白细胞抗原－DR（HLA－DR）和CD80表达及IL－12p40转发洋和分泌的影响。方法：通过粒细胞－巨噬细胞型集落刺激因子（GM－CSF）、IL－4和肿瘤坏死因子α（TNF-α）体外培养体系,从人外周血单个核细胞中获得DC,细胞表面HLA－DR和CD80表达采用流式细胞仪分析,IL－12p40转录和分泌分别采用逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）技术和ELISA法。结果：雷公藤多甙（5－20ug/ml）、IL－10（50－200ng/ml）能下调DC表面HLA－DR和CD80的表达,同时雷公藤多甙、IL－10能抑制DC内IL－2p40mRNA的转录和分泌。结论：雷公藤多甙、IL－10能通过抑制表面分子的表达和细胞因子的合成而干扰DC的成熟和功能。