细胞凋亡相关基因APG诱导肝癌细胞凋亡实验研究

ＰＧ基因是Ｂｃｌ 2家族中一员 ,与Ｂｃｌ 2家族的广泛氨基酸同源性主要表现在高度保守的ＢＨ1和ＢＨ2 结构域。ＡＰＧ过表达能够对抗Ｂｃｌ 2抑制细胞凋亡的活性 ,在促凋亡因素的刺激下Ｂｃｌ 2 /ＡＰＧ的比值将决定细胞的生与死。本研究旨在研究ＡＰＧ基因转染ＨＣＣ 92 0 4细胞能否诱导该细胞发生凋亡 ,从而探讨ＡＰＧ基因成为肿瘤基因治疗靶基因的潜在可能性。1　材料与方法1 1　细胞系和细胞培养 :人肝癌细胞系ＨＣＣ 92 0 4为启东肝癌研究所建立。在 5 0ｍｌ/Ｌ胎牛血清的Ｅａｇｌｅ’ｓ培养液中培养 ,ＨＣＣ 92 0 4细胞系的ｐ5 3基因…     

应用染色体荧光原位杂交技术分辨精液中的脱落细胞

用间期核染色体荧光原位杂交技术（简称ＦＩＳＨ），对精液中最常见的细胞进行了检测。结果表明，根据杂交后荧光点的数目、位置的不同，结合细胞核特有的形态，可以对精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞、精子及淋巴细胞、中性粒细胞进行辨别。     

被动吸烟对雌性小鼠生殖功能的影响

为了探索被动吸烟对生殖功能的影响。采用体内实验和卵母细胞体外培养、体外受精的方法 ,研究被动吸烟对小鼠生殖力的影响。结果 :被动吸烟可以显著降低小鼠的妊娠率 ,抑制胚胎发育和卵母细胞的体内成熟 ,降低第一极体的释放率和卵母细胞的体外受精率 ,使卵母细胞的质量和存活率显著降低 ,影响卵巢与体重比例 ,但对生发泡破裂无影响。实验结果还显示 ,停止被动吸烟和将卵母细胞以及受精卵培养在正常培养液中 ,小鼠的生殖能力又能基本恢复 ,卵母细胞的第一极体的释放率以及体外受精率都明显提高。结论 :被动吸烟可以抑制卵母细胞的成熟 ,降低小鼠的生殖能力 ,香烟烟雾中的某些成分被育龄妇女吸收后 ,会导致生殖能力下降 ,甚至导致不孕 ,但香烟烟雾的这种毒性作用可能是短暂的、可逆的。     

核干细胞因子基因在人肝癌组织及细胞中转录特征及临床意义

目的 研究核干细胞因子(nucleostemin,NS)基因在肝癌组织和细胞中的表达特性,探讨其在肝癌发生中的意义.方法 用PCR方法从人肝癌cDNA中分别进行NS片段和全长基因的扩增,并将扩增产物连接到pMD18-T载体进行测序验证;在40例肝癌和癌旁组织,以及3种肝癌细胞系cDNA中进行NS片段的PCR扩增及分析.结果 分别从肝癌cDNA克隆到了NS基因的部分片段(450 bp)及全长(1 650 bp);发现在肝癌组织中NS的表达高于癌旁组织,临床病例分析表明3期和4期病例NS基因上调表达显著高于下调表达;肝癌细胞株分析结果提示,NS基因随肝癌细胞转移能力的增加表达量增加.结论 NS基因参与肝癌细胞的增殖过程,对肝癌的发生起促进作用.     

凝集素(E-PHA)对肿瘤细胞膜糖链的识别

本文采用免疫荧光技术研究了E-PHA(菜豆红细胞凝集素)在6个肿瘤细胞系中的分布。结果表明,E-PHA在Hep-2,Hela,SGC,GLC,1172细胞均呈阳性荧光反应,而K_562呈阴性或弱阳性。此外,E-PHA在各种细胞中的分布特点也有所不同。结果提示,E-PHA能识别不同结构的糖链,对肿瘤细胞的诊断可能有一定意义。     

RTN4C裸基因抑制人肝癌细胞生长及转移的体内实验研究

目的:研究RTN4C裸基因直接注射抗肝癌生长及转移复发作用.方法:将RTN4C装入逆转录病毒载体,扩增提取RTN4C裸基因,以LacZ为对照组.将不同裸基因和生理盐水与LCI-D20裸鼠人肝癌同时皮下接种或待LCI-D20肝癌成瘤后注射,观察对肿瘤成瘤和生长影响.LCI-D20肿瘤裸鼠皮下接种后10天,分别瘤内注射不同裸基因,观察其对肿瘤生长转移影响.LCI-D20肿瘤肝内接种,接种后22天行肝癌切除术,术中经切缘或脾内注射不同裸基因,观察其对术后转移复发的影响.结果:不同裸基因与LCI-D20肝癌同时皮下接种对照组、LacZ组、RTN 4C组,肿瘤直径分别为(1.81±0.12)cm,(1.61±0.27)cm、(0.43±0.04)cm.裸基因肿瘤内注射对照组、LacZ组、RTN4C组,瘤径(cm)分别为0.91±0.09,0.90±0.06,0.25±0.04;肝癌切除术应用裸基因转移灶累及部位数、切缘复发瘤直径、肝内转移灶数目,转移灶累及肝叶数在对照组、LacZ组与RTN4C组间存在显著差异.脾内注射效果优于肝切缘组注射.结论:RTN4C裸基因注射具有抑制LCI-D20肝癌生长及防治肝癌切除术后转移复发作用.     

胚胎骨髓间质干细胞分离纯化及基本生物学特性

目的　分离纯化胚胎骨髓间质干细胞 (MSCs) ,研究其基本生物学特性。　方法　采用 1 0 73g LFicoll淋巴细胞分离液分离胚胎骨髓MSCs,体外扩增并观察生长特性 ,流式细胞仪检测细胞表面抗原表达和细胞周期 ,染色体技术分析其遗传特性。　结果　胚胎骨髓MSCs培养 3d后呈针尖状的贴壁细胞 ,7～ 10d后细胞融合呈纤维状 ,体外扩增 10代可获得 1× 10 1 2 ～ 5× 10 1 2 个细胞 ;CD13、CD2 9、CD4 4、CD71表达阳性 ,CD3、CD14、CD33、CD34、CD38、CD4 5、HLA DR表达为阴性 ;染色体核型正常 ;G0 G1 期 :84 6 % ,G2 M期 :2 99% ,S期 :12 35 %。　结论　胚胎骨髓MSCs体外具有较好的增殖更新能力 ,在组织工程中可有广阔的应用前景。     

人白细胞硫氧还蛋白还原酶的分子克隆和序列分析

目的：克隆人白细胞硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase,TR)编码区的cDNA并进行序列分析。方法：采用RT－PCR方法获得TR基因cDNA，选择阳性克隆并测序。结果：通过分子克隆和序列分析，发现TR基因长1554bp,ORF为1494bp，编码498个氨基酸，结论：确定了中国人白细胞TR的cDNA序列，并据此推导出相应的氨基酸序列。     

肝癌发生中RTN4C基因突变研究

为研究肝癌发生过程中RTN4C基因突变，利用直接序列分析、PCR—SSCP等研究了肝癌(HCC)中RTN4C突变与杂合性缺失(LOH)。HCC中，RTN4CP突变为62．9％，LOH为68．4％。90％LOH的肝癌中RTN4C发生突变。RTN4C突变相关的肝癌发生中LOH起重要作用。     

肝癌细胞中γ-谷氨酰转肽酶基因甲基化研究

目的:研究肝癌细胞中γ-谷氨酰转肽酶(GGT)甲基化的改变。方法:纯化人肝癌及癌旁组织中总GGT及RNA,观察总GGT、膜结合和可溶性GGT的表达,并以逆转录巢式PCR扩增GGT非编码区基因片段,分析M_3位点的甲基化状态。结果:肝癌、癌旁和远癌组总RNA浓度呈明显的梯度升而趋势(P<0.05);癌组织总GGT、膜结合和可溶性GGT均高于癌周又远癌组织(P<0.05);在癌、癌旁及远癌组织中,特定基因片段的扩增检出率分别为100％、85％、75％,M_3位点低甲基化频率分别为75％、55％、50％。结论:肝癌组织中GGT呈异常表达与基因低甲基化状态有关。