化疗对肝癌患者T淋巴细胞内IL-2、IFN-γ的影响

目的探讨化疗对肝癌患者T淋巴细胞内的白细胞介素2(IL-2)、干扰素γ(IFN-γ)的影响.方法应用单克隆抗体和流式细胞术(FCM)分析31例肝癌患者化疗前后T淋巴细胞内IL-2、IFN-γ水平的变化.结果肝癌患者化疗后T淋巴细跑内IL-2和IFN-γ均较化疗前降低(P＜0.05);静脉化疗组与介入化疗组化疗前后T淋巴细胞内IL-2及IFN-γ改变差值均无显著性差异(P＞0.05);不同临床分期化疗前后IL-2及IFN-γ改变差值均无显著性差异(P＞0.05).结论化疗药物可通过降低T淋巴细胞内的IL-2、IFN-γ水平而影响细胞免疫功能,导致机体免疫功能降低.     

卵巢癌细胞株 SKOV3/ADM的多药耐药性逆转研究

目的：研究糖脂合成酶抑制剂杠基棕榈酰胺吗啡丙醇（DL－threo-1-phenyl-2-palmitoylamino-3-morpholino-1-propanol,PPMP)对卵巢癌多药耐药细胞株SKOV3／ADM的中性鞘糖脂成分－单己糖神经酰胺（monohexosylceramide,CMH)含量的影响,探讨PPMP对SKOV3／ADM多药耐药性的逆转作用。方法：收集SKOV3细胞和PPMP处理前后的SKOV3／ADM细胞,采用改良的Hakamort's方法提取中性鞘糖脂,用高效薄层层析技术（HPTLC）分析CMH含量变化,用体外细胞毒实验技术（MTT）检测PPMP对SKOV3／ADM耐药性的逆转作用。结果：耐药株SKOV3／ADM与其敏感株SKOV3相比,CMH含量明显增高,25μmol/L PPMP作用SKOV3／ADM细胞48h可完全抑制其CMH的合成;PPMP可增加SKOV3／ADM细胞对阿霉素、长春新碱的敏感性,但PPMP浓度不同时这种作用没有显著性差异。结论：糖脂合成酶抑制剂PPMP可有效抑制多药耐药卵巢癌细胞的中性鞘糖脂成分CMH的合成,并对卵巢癌细胞多药耐药性有逆转作用。     

单核细胞条件培养基对体外培养人血液树突状细胞的促成熟作用

树突状细胞 (dendritic cell,DC)为基础的新型肿瘤疫苗正在临床试验中。目前的多种制备方法中,以动员人外周造血祖细胞为主要细胞来源,用血细胞分离机分离、体外加入 GM-CSF和 IL-4培养扩增制备树突状细胞是一种新的制备技术,具有获得的细胞数量多、均质性好等优点 [1]。但是,在 GM-CSF和 IL-4中培养 2周得到的仍是未成熟的树突状细胞。未成熟树突状细胞具有很强的摄取和加工处理抗原的功能,但它们刺激处女型 T细胞的能力则很弱,因此在瘤苗制备步骤中,用肿瘤抗原冲击致敏树突状细胞后,必须先加入促成熟因子使之进入成熟期,然后才能回输给患者 [2]。单核细胞条件培养基（ monocyte condictioned medium, MCM）和脂多糖（ lipopolysaccharide, LPS）是两种较好的促成熟因子 [3～ 5],本实验研究了这两种因子应用于人外周造血祖细胞来源的树突状细胞后细胞形态和共刺激分子和 MHC分子表达的变化,为制备新型瘤苗筛选合适的技术途径。     

抗HPV16E6核酶增加宫颈癌CaSKi细胞对顺铂敏感性的研究

目的：研究抗HPV16E6核酶（Ribozyme)导入宫颈癌CaSKi细胞对顺铂（DDP）敏感性的影响。方法：以脂质体法将抗HPV16E6－Ribozyme,空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R,CaSKi-P细胞,点穴交检测核酶在细胞中的表达,Northern杂交检测3种细胞中E6基因的表达,检测3种细胞的细胞生长曲线和克隆形成实验,MTT法检测3种细胞对DDP的敏感性,Annexine/PI双标法检测细胞凋亡率,流式细胞术检测Bcl-2,P53,Bax蛋白表达,结果：点杂交证实核酶能在CaS-Ki-R细胞中稳定表达,Northern杂交证实CaSKi-R中表达E6较CaSKi-P,CaSKi明显降低,与CaSKi-P和CaSKi细胞比较,CaSKi-R细胞的生长速率明显减慢和克隆形成率下降,对DDP的敏感性明显增加（P＜0．01）,凋亡率明显增加（P＜0．01）P53,Bax蛋白表达明显增加,Bcl-2蛋白表达明显减少（P＜0．01）,CaSKi-P和CaSKi细胞比较无差异（P＞0．05）,结论：抗HPV16E6－Ribozyme抑制了CaSKi-R细胞的生长和克隆形成率,CaSKi-R细胞对顺铂的敏感性增加。     

HLA、HPV感染与宫颈癌相关性研究进展

人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)是人类主要组织相容性抗原系统.90年代以来,先后发现多种HLA等位基因和单体型与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染、子宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和宫颈癌相关联.本文就近年来HLA与HPV、CIN和宫颈癌的研究进展作一综述.     

肺癌膜蛋白识别分子诱导肺癌细胞凋亡的机制

目的:探讨肺癌患者血清中癌抗原识别分子及其抗肿瘤机制。方法:免疫亲合层析法分离纯化肺癌患者外周血中肺癌膜蛋白识别分子,SDS-PAGE电泳法分析其相对分子质量。MTT法测定细胞增殖情况;Annexin V/PI双标法检测细胞凋亡率,并通过流式细胞仪检测p53、Bcl-2蛋白表达水平。结果:肺癌患者外周血中存在肺癌膜蛋白识别分子,相对分子质量分别约为70×103、66×103和15.2×103。不同浓度膜蛋白识别分子(10、20和40mg/L)具有抑制肺癌细胞株(GLC-82)生长和促进细胞凋亡作用。肺癌细胞株与肺癌膜蛋白识别分子共培养6h后,Bcl-2蛋白表达水平明显降低,P=0.008;而p53水平明显增加,P=0.000。结论:肺癌患者外周血中存在肺癌膜蛋白识别分子,并具有抑制肺癌细胞增殖和促进凋亡作用,其机制与p53和Bcl-2表达改变有关。     

辅酶NADH抑制人肝细胞株L02化疗凋亡损伤的作用

为研究辅酶NADH对顺铂（DDP）诱导的肝细胞凋亡的抑制作用及其分子机制，采用透射和扫描电镜检测肝细胞超微结构改变，碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞凋亡，RT－PCR检测p53和bcl-2基因表达变化，并用紫外分光光度法测定凋亡分子caspase-3和caspase－8活性水平的改变。结果显示，与DDP组比较，NADH／DDP组典型凋亡超微形态改变不明显，细胞凋亡明显下降，p53基因表达下降，bcl-2基因表达上升，caspase-3和caspase-8活性维持在低水平。提示NADH具有明显抑制DDP诱导肝细胞凋亡的作用。     

NADH对昆明小鼠辐照后造血系统的影响

目的探讨NADH对小鼠辐照后造血系统的影响。方法昆明小鼠60只,随机分为3组,每组20只,实验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别为正常对照组、辐照前注入生理盐水组和辐照前注射NADH药物组。生理盐水和NADH药物均采用腹腔注射,2次/d,照射前3 d给药。辐照采用6.0 Gy 60Co一次性辐照小鼠。尾静脉采血计数连续观察辐射后不同时期对外周血白细胞总数的影响;辐照后24 h,取股骨骨髓涂片,显微镜下计算骨髓有核细胞数和其分裂指数;通过DNA琼脂糖凝胶电泳观察昆明小鼠辐照后24、48 h骨髓细胞凋亡的改变。结果NADH能够抑制受照后小鼠外周血白细胞减小,增加骨髓有核细胞数及分裂指数,但并不能抑制DNA凋亡片段形成。结论NADH能够明显抑制辐射诱导的造血系统损伤,但并不通过抑制骨髓细胞凋亡途径。     

脂质体介导a1,4-Gal T反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞系SWO-38的作用

目的研究α1,4半乳糖糖基转移酶(α1,4Gal T)基因反义寡核苷酸(antisense oligonuc1eotide,ASO)对脑胶质瘤细胞系SWO-38细胞的增值与凋亡的影响和与Fas表达的关系.方法采用脂质体介导的基因转染方法将α1,4Gal T基因ASO转入SWO-38细胞中.应用RT-PCR检测对α1,4Gal T mRNA表达的影响,克隆形成试验检测对细胞增值的作用,流式细胞术(FCM)和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡的发生,FACS检测凋亡相关蛋白Fas表达的变化.结果脂质体介导的ASO转染后,经RT-PCR检测证实α1,4GalTmRNA基因的表达下降;克隆形成试验显示细胞生长明显受到抑制(P＜0.01);DNA电泳图像呈凋亡表现;FCM检测表明,导入α1,4Gal T基因ASO的SWO-38细胞的凋亡明显增加(P＜0.01);Fas蛋白表达水平明显下降(P＜0.01).结论α1,4GalT基因ASO可诱导脑胶质瘤细胞系SWO-38细胞凋亡发生,其机制可能与fas基因调控有关.     

氧化型辅酶NAD+对辐射损伤小鼠造血功能影响

目的探讨NAD+对辐射所致小鼠造血功能损伤的影响。方法将30只小鼠随机分为正常对照组、照射对照组、NAD+照射组3个实验组,以6GyX线照射小鼠建立辐射损伤模型,检测小鼠外周血白细胞数、股骨骨髓有核细胞数、骨髓细胞凋亡率、骨髓细胞Caspase-3的活性、存活率。结果NAD+照射组小鼠的外周血白细胞数、股骨骨髓有核细胞数均高于照射对照组,差异有统计学意义(P0.05)。骨髓细胞凋亡率、骨髓细胞Caspase-3的活性,NAD+照射组较照射对照组低,差异有统计学意义(P0.05)。结论NAD+对辐射所致小鼠造血功能损伤有保护和修复作用。