MDS—RAEBT与急性单核细胞白血病临床疗效区别及其与端粒酶活性的关系

目的：探讨难治性贫血伴原始细胞增多转变型（MDS-RAEBT）与急性单核细胞白血病（AML-M5）临床疗效的区别及其与端粒酶活性的关系。方法：用常规方法提取MDS-RAEBT和AML-M5初诊病人的单个核细胞（mononuclear cell,MNC)并用TRAP（telomeric repeat amplification protocol,TRAP)法检测两组病人的端粒酶的活性。同时观察以DAE或HAE为基本方案化疗的上述两组病人的临床疗效。结果：MDS-RAEBT组端粒酶的活性表达高于AML-M5组，而完全缓解率（completeremession,CR)却低于AML-M5组。两组之间端粒酶的活性、CR比较均有显差异。结论：MDS-RAEBT与AML-M5两之间明显的临床疗效差别可能与端粒酶活性存在一定关系。     

参芪扶正注射液对失眠小鼠免疫功能低下的治疗作用

目的:了解失眠对免疫功能的影响及探讨参芪扶正注射液对失眠动物模型免疫功能低下的治疗作用。方法:对小鼠进行每天8 h(过夜)、连续7天慢性束缚应激,制备失眠动物模型。治疗组每天腹腔注射参芪扶正注射液40 m l/kg,模型组给予等剂量的生理盐水。记录每天体重变化,观察戊巴比妥钠阈剂量小鼠睡眠时间,检测胸腺、脾脏指数,脾淋巴细胞中T细胞亚群、B淋巴细胞、脾淋巴细胞膜IL-2R(即活化T淋巴细胞CD3 CD25 )百分率及脾淋巴细胞转化能力。结果:与正常组比较,模型组小鼠体重明显下降,戊巴比妥钠睡眠时间明显缩短,免疫器官重量、脾CD3 、CD3 CD4 CD8-、CD3 CD4 CD8-/CD3 CD4-CD8 (即CD4 /CD8 )、CD3 CD25 百分率及ConA诱导的脾淋巴细胞转化能力均明显下降(P<0.05)。经用参芪扶正注射液治疗后,治疗组小鼠体重下降程度明显减轻,免疫器官重量、脾CD3 、CD3 CD4 CD8-、CD4 /CD8 、CD3 CD25 百分率及ConA诱导的脾淋巴细胞转化能力均明显升高(P<0.05),且均接近正常水平(P>0.05)。结论:失眠可导致小鼠细胞免疫功能紊乱;参芪扶正注射液可有效恢复失眠动物模型的细胞免疫功能。     

丙戊酸协同伊马替尼诱导K562细胞凋亡并下调Bcr/Abl mRNA和磷酸化蛋白激酶B的表达

 目的：探讨丙戊酸联合伊马替尼对慢性粒细胞白血病细胞株K562凋亡的影响,同时探索其可能的作用机制。方法：K562细胞分别用丙戊酸、伊马替尼以及两药联合处理。检测各组细胞在药物处理后的细胞周期、细胞凋亡、Bcr/Abl mRNA 水平、总蛋白激酶B（PKB）以及磷酸化PKB （p-PKB）水平。结果：丙戊酸组、伊马替尼组和两药联用组K562细胞凋亡率分别为(11.47±0.25)％、(28.43±1.70)％和(57.73±4.38)% (P<0.05),对于细胞周期各指标,两药联用组与单药组无明显差异。Bcr/Abl mRNA以及p-PKB在丙戊酸组、伊马替尼组和两药联用组的水平分别为(0.00±0.00)、(64.17±12.27)和(0.00±0.00)×10 9 copies/(g total mRNA)以及0.25±002、0.17±0.01和0.08±0.01(均P<0.05),总PKB 3组细胞间无明显差异。结论：丙戊酸能协同伊马替尼促进K562细胞凋亡,其作用机制可能与降低Bcr/Abl mRNA和p-PKB水平有关。     

情感性障碍58例皮纹分析

皮纹的形态结构在很大程度上是由遗传决定的,属于多基因遗传。因此,对于临床上与多基因遗传有关的疾病进行皮纹分析,探讨有关皮纹遗传的特征,尤其显得重要,关于情感性障碍的皮纹特征的报道,目前国内极少。本文对确诊为情感性障碍的58例住院病人的皮纹进行分析,报导如下。     

AFT024-SCF细胞系的构建及其生物学功能鉴定

 目的: 构建AFT024-SCF和HPC-Lhx2细胞系,并用HPC-Lhx2细胞系鉴定AFT024-SCF细胞系的生物学功能。方法: 采用逆转录病毒感染法构建干细胞因子(stem cell factor,SCF)依赖的永生化造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cell,HPC)-Lhx2细胞系和小鼠胎肝基质细胞系AFT024-SCF及其不含目的基因的对照组细胞系AFT024-GFP。采用real-time PCR法及Western blot法鉴定此AFT024-SCF细胞系中SCF的表达。ELISA法鉴定AFT024-SCF上清液中SCF的表达。收集AFT024-SCF及AFT024-GFP细胞培养上清液并以1:10与IMDM基础培养基混合备用。以AFT024-SCF组上清液为实验组,AFT024-GFP组上清液为内源性阴性对照组,无任何添加的IMDM基础培养基为外源性阴性对照组,添加重组SCF的IMDM培养基为阳性对照组,分别与HPC-Lhx2细胞系共培养72 h。MTT法检测各组HPC-Lhx2细胞增殖活性,集落形成实验鉴定HPC-Lhx2细胞系扩增后的细胞干性。结果: 构建的AFT024-SCF细胞系表达SCF;HPC-Lhx2细胞系体外培养72 h后,外源性及内源性阴性对照组未能维持HPC-Lhx2细胞增殖;而阳性对照组及实验组均可促进HPC-Lhx2细胞增殖;阳性对照组及实验组细胞均有集落形成单位,且差异无统计学意义,阴性对照组无集落形成单位。结论: 成功构建表达SCF的AFT024-SCF细胞系,其培养上清液能够替代重组SCF用于HPC-Lhx2细胞系的体外扩增。     

血管通路方式的选择对健康供者外周血造血干细胞单采产量影响的研究

目的 探讨不同的血管通路方式对健康供者外周血造血干细胞(peripheral blood stem cell,PBSC)单采产量的影响.方法 对2000年1月-2007年12月进行PBSC单采的118例健康供者根据2条血管通路方式组合不同分为4组.观察各组PBSC采集的产量,包括单个核细胞数(MNC)及CD34+细胞数. 结果 每例PBSC的产量分别为:肘静脉-肘静脉组MNC(5.31±2.29)×108/kg,CD34+细胞数(4.78±2.06)×106/kg;肘静脉-前臂静脉组MNC(5.11±2.34)×108/kg,CD34+细胞数(4.34±1.99)×106/kg;前臂静脉-前臂静脉组MNC(5.61±1.73)×108/kg,CD34+细胞数(4.60±1.42)×106/kg;肘静脉-桡静脉组MNC(4.60±×1.70)×108/kg,CD34+细胞数(4.05±1.50)×106/kg.4组的PBSC产量差异无统计学意义(P>0.05).结论 不同的血管通路方式不影响PBSC单采的产量.     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β1诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为心肌细胞的作用比较

目的:对比观察碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β1促进大鼠骨髓间质干细胞分化为心肌细胞的作用。方法:实验于2005-12/2006-07在中山大学干细胞与组织工程中心实验室进行。实验材料:清洁级大鼠由中山大学实验动物中心提供(SCXR(粤)2004-0011,粤监证字2004A089),三四周,大约50g。实验方法:①分离培养大鼠骨髓间质干细胞,并采用流式细胞仪鉴定。②取第3代骨髓间质干细胞,以1×107L-1接种于24孔培养板和六孔板中,24h后换液并分组:对照组:仅仅更换培养液;5-氮胞苷诱导组:10μmol/L5-氮胞苷孵育24h后更换新鲜培养液;5-氮胞苷 碱性成纤维生长因子诱导组:10μmol/L5-氮胞苷孵育24h后更换含10μg/L碱性成纤维生长因子的新鲜培养液;5-氮胞苷 转化生长因子β1诱导组:10μmol/L5-氮胞苷孵育24h后更换含10μg/L转化生长因子β1的新鲜培养液。以后每3d换液1次,前2组换完全培养基,后2组分别换含10μg/L碱性成纤维生长因子和10μg/L转化生长因子β1的完全培养基。③30d后应用RT-PCR法检测心肌细胞转录因子GATA-4、结蛋白表达,免疫细胞化学染色法检测细胞心肌肌钙蛋白,并在倒置显微镜下观察细胞跳动情况。结果:①骨髓间质干细胞的生长特性及鉴定:原代培养大鼠骨髓质干细胞3d后镜下可见有细胞贴壁,形成克隆,七八天长满,随着换液和传代,细胞逐渐纯化,第3代细胞形成均一的长梭形,流式细胞仪检测发现CD44、CD29表达阳性,CD45、CD11b表达阴性。②骨髓间质干细胞向心肌细胞的分化:大鼠骨髓间质干细胞经5-氮胞苷、5-氮胞苷 碱性成纤维生长因子或5-氮胞苷 转化生长因子β1诱导30d后,有部分细胞心肌肌钙蛋白表达阳性,GATA-4和结蛋白表达明显增强。镜下观察5-氮胞苷 碱性成纤维生长因子诱导组所诱导细胞变细、胞体伸长,呈心肌样细胞跳动,并较其他两组明显,心肌肌钙蛋白阳性细胞的比率较高(P<0.05)。结论:碱性成纤维生长因子在体外有协同5-氮胞苷促进大鼠骨髓间质干细胞分化为心肌细胞的作用,而转化生长因子β1无此作用。     

雷帕霉素治疗难治性广泛性慢性移植物抗宿主病

背景：难治性广泛性慢性移植物抗宿主病是异基因造血干细胞移植晚期的主要并发症,目前一线治疗药物为糖皮质激素,但对于糖皮质激素治疗无效或激素依赖的患者临床上尚缺乏有效且长期使用毒副作用较小的治疗方法。 目的：观察雷帕霉素在治疗糖皮质激素无效或激素依赖的难治性广泛性慢性移植物抗宿主病中的临床疗效及毒副作用。 方法：从1998年1月至2012年6月在中山大学附属第三医院血液科增加72例接受异基因造血干细胞移植患者中发现5例经糖皮质激素治疗无效或激素依赖的难治性广泛性慢性移植物抗宿主病的患者给予雷帕霉素口服,观察治疗效果及使用过程中出现的毒副作用。 结果与结论：使用雷帕霉素后5例患者中1例症状获得完全缓解,3例明显改善,1例病情稳定。服用雷帕霉素最长时间为14个月,中位时间为9.4个月(4-14个月)。随访中位时间为18个月,随访期间5例患者均存活。使用过程中毒副作用轻,1例患者出现高脂血症,1例出现轻度贫血,未出现肝功能损害及高血糖。说明雷帕霉素在糖皮质激素治疗无效或激素依赖的难治性广泛性慢性移植物抗宿主病的治疗上有较好的疗效,且血液学毒性、肝功能损害、高血脂等不良反应较轻,多数患者能耐受。     

携带人肝细胞生长因子腺病毒重组体的构建

目的构建一种同时携带人肝细胞生长因子(hHGF)及绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒重组体,为hHGF的基因治疗提供实验基础。方法对重组质粒pcDNA3-hHGF进行酶切鉴定及测序正确后,酶切获得hHGF,亚克隆至带有GFP标记的穿梭质粒pAdTrack-CMV上。选取hHGF正向插入的重组穿梭质粒经PmeⅠ充分线性化后,与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组,挑取阳性克隆行PCR及酶切鉴定。重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后,脂质体转染HEK293细胞进行包装并扩增获取重组病毒上清,RT-PCR及WesternBlot方法检测hHGF的表达。结果目的基因的测序结果与Genebank上的hHGF序列一致。hHGF基因插入重组腺病毒载体的预期位置,感染Ad-hHGF的HEK293细胞中可检测到hHGFmRNA和蛋白的表达。结论成功构建了同时携带hHGF和GFP的重组腺病毒表达载体Ad-hHGF,为进一步探讨hHGF的生物学功能提供了实验依据。