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目的 构建北海道型汉坦病毒(HOKV)核蛋白(NP)基因的重组杆状病毒表达载体,在昆虫细胞中表达出具有免疫原性的抗原,用于HOKV的检测及诊断.方法 应用RT-PCR方法扩增HOKVFusong-Cr-247株的NP基因,并将该基因片段克隆到PCR[R]2.1TA载体,转化到One ShortTM TOP10感受态细胞构建TA克隆载体,并与pFastBacTM1转座质粒载体分别用Kpn I和Not I双酶切,用T4连接酶连接,构建pFast PUUV-S重组转座质粒,经双酶切、PCR扩增及插入序列方向鉴定后.转化到DH10BacTM E.coli 感受态细胞,经三抗培养基筛选和PCR扩增鉴定后获得重组Bacmid质粒,将重组Baemid质粒转染Sf9昆虫细胞制备重组杆状病毒毒液,并继续扩增重组杆状病毒,以第三代毒液感染Sf9昆虫细胞,96h后收获细胞.用间接免疫荧光(IFA)、SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定和分析.结果 实验应用Bac-to-BacTM杆状病毒表达系统,成功构建了含普马拉类汉坦病毒核蛋白基因的重组杆状病毒表达载体.并在昆虫细胞中获得表达.IFA结果显示,感染细胞的胞浆中有亮绿色荧光颗粒,SDS-PAGE和Western blot检测细胞表达产物的50×103(M)的蛋白条带,证实重组病毒感染昆虫细胞后表达了相应的重组核蛋白,与预计的结果相符.并能与抗汉坦病毒抗体结合.结论 成功表达具有HOKV免疫原性及反应性的重组核蛋白,为研制HOKV的诊断试剂奠定了基础. 相似文献
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目的 调查浙江省龙泉市肾综合征出血热(HFRS)疫源地小动物中汉坦病毒(HV)的自然感染情况及其流行的基因型.方法 用鼠笼在龙泉市查田镇、小梅镇、小梅镇黄南村捕鼠.捕获的小动物进行分类鉴定并解剖取肺脏,用间接免疫荧光法(IFA)检测肺组织中HV抗原,用RT-PCR对HV抗原阳性的样本扩增部分S片段核苷酸序列并测序,构建系统发生树进行基因分型.结果 共捕获小动物319只,其中野外312只,室内7只.黑线姬鼠和东方田鼠为野外优势鼠种.肺组织标本中共检测到9份抗原阳性,带病毒率为4.97%,用部分S片段(620~999nt)的核苷酸序列构建系统发生树,结果表明均为汉滩病毒(HTNV),并与Z251分离株的亲缘关系最近.结论 龙泉市野外主要存在以黑线姬鼠为宿主的HTNV感染,且携带率较高.Abstract: Objective To investigate the situation of the natural infection of hantaviruses (HV) in small mammals and to provide evidence for the control and prevention of hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) in Longquan area,Zhejiang province. Methods Small mammals were captured by night trap, and lung tissue samples were collected and stored in liquid nitrogen. HV antigens were detected by indirect immuno-fluorescence assay (IFA). The partial S genome segment sequences were amplified by RT-PCR. DNAStar program was used for editing and comparing the sequences. Phylogeny was analyzed through PAUP*4.0 software. Results 319 small animals were collected in Longquan, and 9 hantavirus antigen-positive samples were identified. The positive rate of hantavirus in Apodemus agrarius was 4.97% . Phylogenetic tree constructed by partial S segment (620-999 nt) showed that the 9 strains carried by A agrarius from Longquan all belonged to HTNV,and had a closer evolutionary relationship with isolate Z251 from Zhejiang province. Conclusion Our results indicated that the main host was A. agrarius and the infection rate of HTNV was high in Longquan area. 相似文献
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张永振 周敦金 熊衍文 陈小萍 贺永文 孙强正 余滨 李娟 代永安 田俊华 草新程 金东 崔志刚 罗雪莲 李伟 卢珊 王文 彭劲松 郭文平 李明慧 李振军 张少敏 陈晨 王艳 MennoD.deJon 徐建国 《中华流行病学杂志》2011,32(3):209-220
研究背景 2009-2010年4月至7月,我国淮阳山地区农民中出现不明原因的严重出血热样病例.方法 采集疑似病例的临床标本(血液、尿液、粪便和咽拭子),在患者所在地采集蚊和蜱.从2例患者的血液样本中分离到2株病毒,并进行全基因组测序分析.采用病毒特异的RT-PCR对其他病例及节肢动物进行病毒检测,对RT-PCR阳性病例... 相似文献
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目的研究湖南省啮齿动物中汉坦病毒(HV)流行情况及病毒型别。方法采用IFA法检测鼠肺中HV抗原;用RT-PCR法扩增阳性标本中HV的部分S和M片段;构建系统发生树进行系统发生分析及分型。结果在湖南省HV流行的地区共捕获啮齿动物344只,其中6份标本HV抗原阳性,病毒携带率为1.74%。对扩增出的部分S与M片段的核苷酸序列分析表明,5份标本中的病毒为汉城型HV(SEOV),1份为汉滩型HV(HTNV)。用S(620~990 nt)与M片段G2区(2001~2301 nt)核苷酸序列所构建的系统进化树显示,湘乡褐家鼠、黄胸鼠及黄毛鼠携带的病毒均为SEOV的S4亚型;宁远褐家鼠携带的病毒为SEOV的一个新亚型;石门小家鼠携带的病毒为HTNV的H4亚型。结论湖南省为混合型HV疫区,以汉城病毒为主,并具有宿主多样性。 相似文献
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中国狂犬病的流行病学特征及防制建议 总被引:13,自引:0,他引:13
狂犬病是一种由狂犬病毒引起的人兽共患传染病。几乎所有的温血动物对狂犬病毒易感,但犬类是本病的主要宿主,在携带和传播狂犬病过程中起主要作用。人狂犬病通常由患病动物咬伤或黏膜接触后唾液中的狂犬病毒侵入体内而发生感染。狂犬病是迄今为止人类病死率最高的急性传染病,一旦发病,死亡率高达100%。全世界每年约有35000~50000人死于狂犬病,主要分布在亚洲、非洲和拉丁美洲等发展中国家。 相似文献
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内蒙古自治区1955-2006年肾综合征出血热流行特征分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的阐明内蒙古地区肾综合征出血热(HFRS)的流行特征。方法对内蒙古地区52年来的疫情资料及监测情况进行统计分析,对重点疫区宿主动物分布及其汉坦病毒感染率进行流行病学调查。结果1955—2006年全自治区共报告HFRS 8310例,分布在9个盟(市)的61个旗(县、市、区)。呼伦贝尔市是全自治区HFRS流行最严重的地区,共报告病例7369例,占全区发病例数的88.68%。20世纪90年代前,疫情主要发生在内蒙古的东部地区;90年代后,疫情在中西部地区陆续出现。位于西部的巴彦淖尔市于1999年首次报告HFRS病例,随后发病例数逐年增多,2005年报告95例。在啮齿动物中,现已查明黑线姬鼠、褐家鼠、小家鼠、黑线仓鼠、子午沙鼠、莫氏田鼠、红背肝、大林姬鼠、小毛足鼠、三趾跳鼠、五趾跳鼠11种鼠携带汉坦病毒。结论内蒙古自治区HFRS疫区有可能还将扩大,疫情也会在一段时间内维持在较高水平。 相似文献
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目的 分析2004年2月8日至5月1日在贵州省安龙县发生的21例狂犬病患者,探讨局部地区爆发性流行的因素。方法 对21例狂犬病患者进行个案调查,用间接免疫荧光法检测犬脑组织中的狂犬病毒抗原。结果 在近3个月的时间内,安龙县共发生21例狂犬病,发病率为5.12/10万。在21例狂犬病患者中有20例被犬所伤,1例为猫所伤;全部病例平均潜伏期为36.52天,但潜伏期<15天的病例有6例;21例病例中17例未进行正确的伤口处理,9例接种疫苗,其中仅3例为及时接种。所有21例没有注射抗狂犬病毒血清或人抗狂犬病毒免疫球蛋白。在疫点周围采集的73只犬脑组织中,9只犬脑组织狂犬病病毒抗原为阳性,阳性率13.33%。结论 犬饲养量大,犬的病毒携带率高,伤后处理不及时不规范,疫苗接种率低可能是安龙县狂犬病发病爆发性流行的主要原因。 相似文献
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目的 总结和分析近30年中国肾综合征出血热(HFRS)的流行情况、疫区分布、类型及其流行特点。方法 收集30年来中国HFRS的发病死亡情况、疫区分布、类型及其流行强度进行总结和分析。结果 30年间HFRS的流行出现两个快速上升期(1970~1975年、1979~1986年),使HFRS的发病数由1970年的3295例增加到1986年115 804例。20世纪90年代中国HFRS的年发病数稳定在4万~6万例。血清学方法检测证实全国各省(市)自治区均存在有汉坦病毒的疫源地,除青海与新疆两省区外,其他省(市)区均有发病。近年来,不但大中城市HFRS流行强度上升明显,而且疫情的季节分布发生变化。结论 中国HFRS的流行已出现新的流行特征。因此,应加强监测,采取综合防制措施预防控制汉坦病毒的传播。 相似文献