真核表达4-1BBL调节淋巴细胞功能活性及抗肿瘤效应的研究

目的：在非免疫非肿瘤细胞中转染表达4-1BBL，并研究4-1BBL在调节淋巴细胞功能活性及抗肿瘤方面的作用和机制。方法：构建含有4-1BBL全长eDNA序列的表达质粒p4-1BBL，脂质体介导体外转染BHK细胞，G418筛选出阳性克隆，RT-PCR、免疫细胞化学染色及免疫印迹检测4-1BBL的表达，检测BHK细胞表达的4-1BBL对脾淋巴细胞增殖和杀伤活性的影响；建立小鼠H22肝细胞癌移植瘤模型，裸DNA肌肉注射法体内转染表达4-1BBL进行肿瘤治疗，检测肿瘤生长速度；另外，利用免疫组化染色法分析瘤周组织中CD8^＋T淋巴细胞。结果：BHK细胞转染表达的4-1BBL能够显著增强肿瘤抗原肽激活的脾淋巴细胞增殖和杀瘤活性（P〈0．01），并显著提高IL-2和IFN-γ表达水平（P〈0．01），同时增强非特异性免疫杀伤活性。肿瘤接种部位转染表达4-1BBL，瘤周组织中CD8^＋T淋巴细胞数量显著增加（P〈0．01），肿瘤生长速率显著低于生理盐水对照组和空载体对照组（P〈0．01）。结论：在肿瘤微环境中的正常细胞转染表达4-1BBL，能够有效促进T细胞增殖及杀伤等功能活性，可望成为肿瘤免疫生物治疗的一种新的手段。     

人巨细胞病毒蛋白pp65诱导特异性免疫应答的研究

目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)蛋白pp65(HCMV pp65)蛋白对特异性免疫应答的诱导作用。方法采用T细胞体外激活试验检测重组HCMVpp65蛋白对人外周血单个核细胞(perpheral blood mononuclear cells,PBMC)的刺激作用,并对激活的淋巴细胞进行传代培养,观察细胞的增殖;收集传代增殖的淋巴细胞,检测其对受HCMV感染的人胚肺成纤维细胞(human embryo lung fibro-blasts,HEL)的杀伤作用和对受感染后不同时段的HEL的杀伤功能。结果重组HCMV pp65蛋白在体外能激活PBMC,并使激活的细胞增殖;增殖的淋巴细胞可特异性地杀伤受HCMV感染的HEL细胞,但对未受感染的HEL细胞无杀伤作用,且其对受染2h后的HEL即有杀伤作用。结论重组HCMV pp65蛋白可诱导CD8 T细胞的激活与增殖,对受HCMV感染细胞产生特异性的杀伤作用,此作用不需要病毒转录和蛋白合成,对于HCMV的免疫治疗将有重要的作用。     

Hsp70-肿瘤抗原肽复合物防治小鼠黑色素瘤B16肺转移的作用

目的:探讨热休克蛋白70-肿瘤抗原肽复合物(Hsp70-antigen peptide complexes)对小鼠黑色素瘤B16转移的防治作用.方法:分别从小鼠腿部接种的B16实体瘤及小鼠肺B16转移灶提取混合抗原肽,体外与Hsp70结合制得复合物,此复合物免疫小鼠后用于预防或治疗经尾静脉接种转移至肺的B16黑色素瘤,观察其对肿瘤转移的防治作用.结果:Hsp70-肿瘤抗原肽复合物免疫后肺转移灶节结数显著减少(P＜0.01),体外脾细胞表现出对B16较高的杀伤率(P＜0.01);并对肺转移灶有显著的治疗作用(P＜0.01),而从B16实体瘤提取的混合抗原肽制得的复合物比从肺转移灶提取的混合抗原肽制得复合物有更好的治疗效果(P＜0.01),表现出体外脾细胞对B16更高的杀伤率(0.01＜P＜0.05).结论:Hsp70-肿瘤抗原肽复合物对肿瘤的转移有明显的防治作用,而从实体瘤提取的混合抗原肽比从转移灶提取的混合抗原肽更为有效.     

重组可溶性PD-1免疫抑制性受体增强抗小鼠H22肝癌的免疫效应

目的:探讨真核表达PD-1的重组可溶性分子(sPD-1)增强肿瘤局部免疫效应的作用机制.方法:采用半定量RT-PCR方法检测PD-1的配体PD-L1和PD-L2在小鼠H22肝癌细胞和癌组织中的表达水平,流式细胞仪检测其在激活T细胞表面的表达;体外细胞杀伤实验检测sPD-1作用于肿瘤细胞或脾细胞对Hsp70-H22抗原肽复合物激活的脾细胞杀伤H22肝癌细胞的影响;体内抑瘤实验评价局部转染表达sPD-1的抗瘤作用.结果:H22肿瘤细胞本身表达PD-L1基因,PD-L1和PD-L2基因在癌组织中的表达高于正常肌肉组织和单纯癌细胞;PD-L1亦表达于激活的T细胞表面;sPD-1可增强抗原特异性激活的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤效应;在肿瘤接种部位肌注转染表达sPD-1可显著抑制H22肿瘤生长.结论:在肿瘤局部表达可溶性受体sPD-1阻抑PD-L/PD-1通路,既可作用于免疫细胞来提高其正向免疫力,同时也可拮抗H22细胞通过PD-L对免疫细胞的抑制作用,可望成为提高肿瘤基因治疗疗效的一种新手段.     

急性胰腺炎的超声改变与病理联系

目的探讨急性胰腺炎的超声改变与病理联系。急性胰腺炎是一种较为常见的急腹症,其病情进展快,危险性大,多发生于成年人,男女发病率大致相等。本病病因虽不十分清楚,但胆系结石,胆胰管梗阻,胆汁返流,细菌感染或酒精中毒是引起急性胰腺炎的主要原因。从病理角度根据病理改变不同分为急性水肿性和出血坏死性胰腺炎两型。超声检查不但可以及早诊断急性胰腺炎,还可以观察胰腺的变化。早期诊断能为早期的治疗争取时间,前者可用非手术治疗法,后者则需尽快手术处理,故明确的诊断至关重要。     

阿霉素在人白血病敏感细胞株HL-60和多药耐药细胞株HL-60／ADR的分布和积聚变化

目的 了解化疗药物阿霉素(ADR)在人白血病敏感细胞株HL-60和多药耐药细胞株HL-60／ADR细胞内的分布和积聚变化及其与耐药的关系。方法 应用共聚焦激光扫描显微镜和流式细胞术研究ADR在细胞内的分布和积聚，以及维拉帕米、BSO、布雷菲尔得菌素、氯喹对细胞内ADR异常分布的影响。以3种特异染色线粒体、高尔基体和溶酶体的荧光物质Rhodaminel23、NBD-ceramide和中性红作为探针，鉴定分隔储留ADR的细胞器。结果 与ADR在HL-60细胞核、胞浆均匀分布不同，在HL60／ADR，ADR呈点棘状分布于细胞浆，核内ADR荧光很少。这种分布方式与NBD-ceramide荧光在该细胞的分布极为相似。BSO和布雷菲尔得菌素可逆转ADR在HL-60／ADR的异常分布和积聚，而维拉帕米和氯喹无此作用。结论 ADR在耐药细胞的异常分布和积聚与肿瘤细胞耐药的形成有关。     

浅谈视听教育在中专教学中的作用

本文论述了视听教育在巧妙运用教学经费,培养实用型人才方面的作用。提示人们,开发和运用视听教育,有着广阔的前景。     

食管癌和贲门癌术后患者呼吸道护理

<正>呼吸道护理能明显降低食管癌、贲门癌术后肺部并发症的发生。2000-10～2005-01笔者护理食管癌、贲门癌手术患者408例,无1例呼吸道并发症发生。现将护理体会报告如下。     

糖尿病足的健康教育及护理对策

糖尿病足又称为糖尿病肢端坏疽,是糖尿病最严重、最常见的并发症之一,也是糖尿病患者致残、致死的重要原因。据统计,在我国糖尿病足患病率为0.9%~14.5%[1]。糖尿病足截肢给患者带来严重的损害并影响其生活质量。因此,如何有效地预防和减少糖尿病足的发生,降低截肢率,是临床上急     

^99mTc—MIBI门控心肌灌注断层显像检测冠心病的准确性

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