大鼠血栓调节蛋白基因的克隆及在原核细胞中的表达

目的研究大鼠血栓调节蛋白基因的扩增、克隆及在原核细胞中的表达。方法以大鼠基因组DNA为模板,进行PCR扩增,用pMD18-Tsimple vector进行T克隆并测序。经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切,将目的基因克隆到pET-28a(+)表达载体质粒中,转化E.coliBL21(DE3)表达重组蛋白,通过SDS-PAGE分析表达产物。结果含有大鼠血栓调节蛋白基因的PCR产物约为1850bp。重组pMD18-Tsimple vector质粒和重组pET-28a(+)质粒经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切后,有相应大小的目的片段,测序结果正确。经IPTG诱导,重组pET-28a(+)质粒在E.coliBL21(DE3)中有相对分子质量约为72000的融合蛋白表达。结论成功克隆了大鼠血栓调节蛋白基因,并成功表达了该基因编码的蛋白。     

5′-核苷酸磷酸二酯酶同工酶鉴别良恶性腹水的诊断价值

对37例恶性腹水和35例良性腹水测定5′-NPD同工酶,结果表明:恶性腹水中5′-NPI)-Ⅴ和Ⅵ的阳性率明显高于良性腹水(P<0.01)。特异性分别为80%和74.3%;腹水5′-NPD-Ⅴ与血清相关性γ=0.7804(P>0.05)。提示:腹水5′-NPD同工酶检测有助于良恶性腹水鉴别诊断。在疑恶性腹水时有必要进行腹水5′-NPD同工酶检测。     

《周易·损益》与中医治法

《周易·损益》与中医治法荣成市人民医院（２６４３００）张岐山于水莲荣成市妇幼保健院（２６４３００）李淑钊关键词周易损益中医治法《周易》对几千年的中国社会文化意识起了极大作用，也为中医学提供了立论的基础和框架，使中医学产生了有异于西医的独特的医疗理论体...     

肾柱肥大的声象图

尿路造影和血管造影中,肾柱肥大表现为假性肾肿瘤,文献中屡有报道。超声检查可表现如假性肾肿瘤。然而,作者认为其声象图特征,被注意太少。为提高用超声诊断肾柱肥大的信心,作者拟通过11例回顾性研究建立其声象图的标准。     

中西医结合治疗肺心病88例

自１９９４年９月～１９９８年８月,笔者采用中西医结合治疗肺心病８８例,疗效较好,现报告如下。一般资料全部病例均为住院病人,符合１９７７年全国第二次肺心病专题会议规定的诊断标准。１６８例患者随机分为治疗组８８例及对照组８０例。治疗组８８例中男性４７例,...     

敲减AKR1A1基因对H2O2及4-羟基壬烯醛诱导的1321N1脑星形细胞瘤细胞损伤的影响

目的 初步探讨星形胶质细胞瘤细胞中的醛酮还原酶1A1(AKRIA1)在抗氧化应激和有毒醛代谢中的作用.方法 通过LipofectamineTM RNAiMax以siRNA转染1321N1细胞,用Western blot法和qRT-PCR检测1321N1细胞中AKR1A1基因抑制水平.siRNA转染后的细胞经H2O2和4-羟基壬烯醛处理后使用MTT法检测细胞成活率;采用2 ',7’-二氯二氢荧光黄双乙酸酯(DCFH-DA)标记法检测敲减AKR1A1基因对H2O2诱导的1321N1细胞内活性氧(ROS)水平的影响.结果 Western blot法和qRT-PCR结果显示1321N1细胞经特异性siRNA转染后,AKR1A1基因的表达受到明显抑制(70％).MTT法检测结果显示,siRNA-AKR1A1转染后的1321N1细胞在H2O2或4-羟基壬烯醛压力下的细胞成活率显著降低,而且敲减AKR1A1的1321细胞内H2O2诱导的ROS水平显著高于对照细胞.结论 使用的特异性siRNA能有效抑制AKR1 A1基因在1321N1星形细胞瘤细胞中表达,AKR1A1参与1321N1脑星形细胞瘤细胞中的4-羟基壬烯醛代谢,并且很可能参与调节脑细胞的抗氧化应激机制.     

Mg^2＋和Ca^2＋对兔心肌单离腺苷酸环化酶的调节机制

用兔心肌可溶性肌纤维膜和层析分离的腺苷酸环化酶(AC)组分制备人工蛋白脂质体,并观察Mg~(2 )和Ca~(2 )对上述两种蛋白脂质体中AC的影响。结果表明,Mg~(2 )激活AC在可溶性肌纤维膜的蛋白脂质体中有两种不同的亲和常数,分别为0.14mmol/L和1.1mmol/L。其中高亲和常数在AC组分的调节部位,低亲和常数是Mg~(2 )和GTP结合蛋白质的结合部位。Ca~(2 )抑制AC的活性,它的抑制常数为30μmol/L。Mg~(2 )和Ca~(2 )对AC的作用是竞争性的。     

醛酮还原酶AKR7A5蛋白的纯化及其对萘醌类化合物的底物特异性研究

目的:探讨小鼠醛酮还原酶AKR7A5蛋白对萘醌及其衍生物的底物特异性。方法:IPTG(异丙基硫代半乳糖糖苷)诱导BL21pLysS大肠杆菌中His标签的AKR7A5融合蛋白大量表达,利用FPLC系统通过HiTrap亲和柱纯化His-AKR7A5融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot法鉴定纯化的AKR7A5蛋白。使用AKR酶活性实验检测纯化的重组AKR7A5蛋白对萘醌类化合物的底物特异性。结果:经SDS-PAGE和Western blot验证,成功纯化了His标签的AKR7A5融合蛋白;AKR酶活性实验结果显示,重组AKR7A5蛋白对散沫花醌有中等亲和力,对胡桃醌和维生素K3有较低的亲和力,对1,4-萘醌无亲和力。结论:成功纯化了重组AKR7A5蛋白,并检测了其对萘醌类化合物的底物特异性,结果表明醛酮还原酶很可能选择性地参与萘醌类化合物的代谢。     

过表达醛酮还原酶AKR7A1对巴豆醛致畸作用的影响

目的:探讨过表达大鼠醛酮还原酶AKR7A1蛋白对巴豆醛致畸作用的影响。方法:使用Western blot法和醛酮还原酶(AKR)酶活性技术检测并鉴定外源性AKR7A1在V79-4细胞中的表达水平和催化活性,使用HGPRT基因突变实验检测在V79-4细胞中过表达AKR7A1对巴豆醛致畸作用的影响。结果:Western blot检测显示V79-4细胞中表达高水平的AKR7A1蛋白;AKR酶活性实验结果显示过表达的AKR7A1蛋白具有催化活性;HGPRT基因突变实验结果显示过表达AKR7A1的V79-4细胞对巴豆醛致畸作用的抵抗力明显高于对照细胞。结论:过表达大鼠AKR7A1能显著提高V79-4细胞对巴豆醛致畸作用的抵抗力。     

肾结构异常——肾占位误诊的陷井

肾脏异常有多种形式,包括数目上的异常,如单肾,额外肾。体积上的异常,如肾发育不良。位置上的异常,如游走肾,异位肾、盆腔肾、胸腔肾。形态与结构上的异常,如S形肾,乙状肾,块状肾和马蹄肾。上述各种因常伴有明显的形态上的变化或明显的位置改变,诊断易于明确。但是单纯肾结构异常,尤其是对肾脏外形影响不大的情况下,常常使超声检查者在确定是否为肿瘤等占位病变时感到困惑。