HBV DNA PreC/C和BCP片段基因多态性及临床意义

目的 :分析乙肝患者 HBV DNA前 C/ C区和基本核心启动子区部分 DNA片断突变。方法 :PCR扩增HBV DNA nt1735～ 196 5片段 ,将产物进行 HBV DNA测序。结果 :在 6 8例乙肝患者中 ,突变阳性率 4 8.5 % ,点突变16 8个 ,频率前 10位的是 nt176 4、176 2、1799、176 6、1896、175 4、1899、176 8、1814及 1913,还检出鲜见报道的 192 3、192 2、190 7等点突变。慢性肝炎 5 4例和肝炎肝硬化 10例 HBV DNA nt1896、176 4、176 2点突变阳性数分别为 9、19、19和 3、19、19,两者差异有极显著性 (P<0 .0 1)。结论 :前 C/ C区与基本 C区启动子区基因突变可能与肝实质纤维化相关 ,HBV DNA突变发生率较高 ,且位点众多 ,基因测序对芯片探针设计有着十分重要的指导价值和临床意义     

视网膜色素变性视紫红质部分基因序列检测

建立了重盐、异丙醇提取视紫红质 ( RHO)基因 DNA序列检测方法。结果显示正常人 RHO第 5外显子基因所选 2 77碱基排列与 Nathans- Hogness报道的基因密码一致。RHO基因直接提取法不能用于序列测定。该法与酚提取法相比 ,时间缩短数个小时 ,成本降低 50 %     

实时荧光定量测定人B细胞激活因子受体基因表达水平

目的：建立实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ-PCR）检测人B细胞激活因子受体（BAFF-R）含量的方法，及探讨其在外周血单个核细胞（PBMC）中BAFF-RmRNA表达的检测价值。方法：在BAFF-R基因高保守区设计特异性引物和荧光探针，用逆转录（RT-PCR）扩增目的片段实时检测产物的荧光强度，根据标准品建立标准曲线，由软件自动计算出待测样本中BAFF-RmRNA含量，并以BAFF-RmRNA和132MmRNA含量的比值进行BAFF-R表达水平评价。结果：RFQ-PCR检测BAFF-R含量的线性范围为10^∧9～10^∧1pg／ml，低浓度样本批内和批间变异系数（CV）分别为12．5％和11．9％，高浓度样本批内和批间CV分别为8．3％和9．3％。30名健康献血员样本的PBMC中，83％（25／30）有BAFF-RmRNA表达，范围为0．14-1．03。结论：RFQ-PCR检测BAFF-mRNA含量的方法，具有较好的检测灵敏度和重复性。     

心肝宝胶囊与心律平治疗频发室性早搏63例对比观察

应用动态心电图对比观察心肝宝胶囊和心律平对６３例频发室早的治疗效果，随机选择３８例为心肝宝治疗组，有效率７９％；非随机选取２５例为心律平对照组，有效率为８４％，两组有效率无显著差异（Ｐ＞０．０５）。初步认为心肝宝胶囊对室性早博有良好效果。     

端粒重复序列扩增法检测胃癌组织中端粒酶活性研究

目的：研究胃癌组织,癌旁及远端正常胃组织中的端粒酶活性,探讨其作为胃癌肿瘤标记物的可能性。方法：采用ＴＲＡＰ－ＥＬＩＳＡ法检测了５１例胃癌组织,癌旁及远端正常胃组织的端粒酶活笥表达。结果：５１例胃癌组织中端粒酶阳性表达４８例（９４．１％）,癌旁组织为１７例（３３．３％）,远端正常胃组织未检测出端粒酶活性。结论：端粒酶是特异较强的恶性肿瘤其因标志,有可能成为胃癌早期诊断和治疗的理想标记物。     

南通地区慢性丙型肝炎患者的HCV基因分型

目的 :了解南通地区慢性丙型肝炎患者的HCV基因型分布情况。方法 :将 5 3例抗HCV阳性的血清标本用RT -PCR法检测HCV -RNA ,然后采用膜显色结果判读的基因芯片对 3 2例HCV -RNA阳性者进行基因分型研究。结果 :南通地区HCV感染检出 1b、1a、2a、1b + 1a、1b + 1a + 2a共 5种单一基因型和混合基因型 ,其中以 1b型为主 ,占 5 3 .1%。结论 :南通地区 1b型为优势株 ,2a和 1b + 1a型居次 ;1b + 1a型高于全国其他地区。     

HBV DNA PreC/C和BCP片段基因多态性研究

目的　研究乙肝患者HBVDNA核苷酸 (nt) 1735～ 196 5片段突变及其临床意义。方法　PCR扩增HBVDNAnt 1735～ 196 5片段 ,将产物进行HBVDNA测序。结果　在 6 8例乙肝患者中 ,nt 1735～ 196 5突变阳性率为 4 8 5 % ,检出点突变总数 16 8个 ,频率前 10位的是nt 176 4 (5 8.8% )、176 2 (44.1% )、1799(2 0.6 % )、176.6 (14.7% )、1896 (13.2 % )、175.4 (8.8% )、1899(8.8% )、176 8(7.4 % )、1814 (7.4 % )及 1913(7 4 % )。同时 ,首次检出nt 190 7、192 2、192 3位点突变。 5 4例慢性肝炎和 10例肝炎肝硬化患者HBVDNAnt 1896、176 4、176 2位点突变阳性率分别为 16.7%、35.2 %、35.2 %和 30.0 %、6 0.0 %、6 0. 0 % ,两者差异有统计学意义 (P <0.0 1)。结论　该研究提示 :(1)PreC C与BCP区基因突变可能与肝实质纤维化相关 ;(2 )HBVDNA突变发生率较高 ,且位点众多 ,基因测序对芯片探针设计有着十分重要的指导价值和临床意义     

荧光素和地高辛标记探针在聚合酶链反应-微孔板杂交检测TTV DNA中应用比较

目前聚合酶链反应 ( PCR)扩增产物常规检测采用琼脂糖凝胶电泳法 ,其敏感度、特异性均不能满足临床要求。对PCR产物进行限制性内切酶酶切片段长度多态性 ( PCR-RFLP)分析、变性梯度凝胶电泳 ( PCR-DGGE或 PCR-SS-CP)及 PCR产物直接测序 ,虽可特异性检测 PCR产物 ,但因操作繁杂 ,且需特殊试剂和仪器 ,无法在临床普遍开展。利用特异性探针与扩增产物杂交 ,引用微孔板杂交酶呈色技术 ,由于其特异性和敏感度高而被应用于临床。我们采用荧光素和地高辛分别标记探针 ,建立荧光素 -抗荧光素、地高辛 -抗地高辛酶偶联系统微孔板杂交酶…     

实时荧光定量PCR检测人APRILmRNA的标准品构建

目的:构建增殖诱导配体(APRIL)基因的重组质粒的标准品。方法:从肺癌的组织标本中抽提总RNA逆转录合成cDNA,以cDNA为模板扩增目的片段,从胶中回收目的片段,再将回收的目的片段与pGEM-TEasy载体连接并转化宿主菌DH-5α,分别用菌落PCR及测序两种方法证实目的片段已成功转染细菌。抽提重组质粒DNA用核酸分析仪测浓度后换算成copies/ml。结果:成功构建了APRIL实时荧光定量标准品的线性范围105～1012copies/ml,批内与批间CV分别为1.34%～3.07%和7.24%～11.41%。结论:该法制备的质粒标准品具有较好的灵敏度和重复性,满足实时荧光定量实验要求。     

增殖诱导配体及其受体在肿瘤组织中的表达与意义

目的分析增殖诱导配体（APRIL）及其受体在不同肿瘤组织及肿瘤发展不同阶段的表达水平,探讨其与肿瘤发生的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ-PCR）检测了临床上常见肿瘤组织中APRIL及其受体mRNA的准确含量,并以靶基因和内参mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果肿瘤组织中APRIL表达水平显著高于交界组织（P〈0．05）和正常组织（P〈0．05）;B细胞成熟抗原（BCMA）和穿膜蛋白活化物（TACI）表达水平在大多数肿瘤组织中与正常组织差异无统计学意义（P〉0．05）;APRIL在肠上皮化生、异型增生和胃癌组织中表达水平显著高于正常黏膜（P〈0．05）,APRIL在胃癌组织中表达水平显著高于肠上皮化生和异型增生（P〈0．05）,而其受体BCMA和TACI在各组胃黏膜病变之间表达水平无统计学意义（P〉0．05）。结论成功建立RFQ-PCR检测APRIL及其受体mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性;APRIL在肿瘤发生、发展过程中可能起了重要作用;除了BCMA和TACI外,肿瘤细胞可能还存在APRIL未知受体;APRIL在某些类型肿瘤有可能主要是通过受体BCMA而不是TACI发挥作用。