增殖诱导配体基因的克隆、表达及生物学活性分析

目的克隆人增殖诱导配体(APRIL)基因,分析APRIL蛋白的生物学活性。方法采用RT2PCR技术,从肿瘤细胞株总RNA中克隆了APRIL全长编码基因;构建了APRIL胞外可溶性片段(sAPRIL)的原核表达载体,对表达的蛋白初步纯化后进行生物学活性检测;构建了APRIL编码区的真核表达载体,经脂质体转染转化细胞株,流式细胞仪和MTT法分析表达产物对细胞周期及细胞生长的影响。结果sAPRIL原核表达载体经IPTG诱导后,发现在相对分子质量(Mr)20×103处有一明显的表达条带,纯化蛋白进行初步活性测定显示其可以剂量依赖方式促进细胞的生长;细胞转染实验证实APRIL能促进多种转化细胞的增殖,但对细胞周期无明显影响。结论成功克隆了人APRIL基因,并将其可溶性胞外区片段在大肠杆菌进行了表达;构建了APRIL真核表达载体,初步分析了APRIL的生物学活性,提示APRIL在肿瘤细胞增殖过程中可能起了重要作用,为进一步进行APRIL基因的功能研究及其临床应用奠定了实验基础。     

干扰素γ对人脐带间充质干细胞生物学特性及免疫调节功能的影响

本研究旨在探讨IFN-γ对人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)生物学特性及免疫调节功能的影响。应用流式细胞术检测hUC-MSC表面分子表达,CCK-8检测其增殖能力,诱导hUC-MSC成脂、成骨分化并染色,ELISA检测PGE-2的分泌量,实时定量PCR方法检测hUC-MSC细胞中COX-2,IDO-1和IDO-2的表达情况,同时将IFN-γ刺激后的hUC-MSC与人外周血单个核细胞(hPBMC)共培养,检测hPBMC的增殖情况。IFN-γ组hUC-MSC以IFN-γ10ng/ml刺激24 h,同时以未刺激的hUC-MSC作为对照。结果显示:IFN-γ刺激后hUC-MSC表面SSEA-4表达量与对照组相比显著下降〔(8.15±2.94)%vs(16.42±8.5)%,P<0.05〕,CD54表达升高〔(96.64±3.29)%vs(84.12±10.73)%,P=0.051〕。IFN-γ可以增强hUC-MSC对活化的hPBMC的增殖抑制能力(P<0.05),具有浓度依赖性。IFN-γ刺激24 h后,hUC-MSC分泌PGE-2明显降低(P<0.01),COX-2表达变化与对照组相比无统计学意义,但具有降低趋势;IDO-1的表达与对照组相比显著增高(P<0.01),IDO-2表达无明显变化。结论:IFN-γ刺激影响hUC-MSC表面分子表达及分化等基本生物学特性,并增强hUC-MSC的免疫调节功能。     

鸟苷酰环化酶C质粒标准品的构建

目的:制备人鸟苷酰环化酶C(GC-C)质粒标准品,为实时荧光定量PCR检测GC-C含量,探讨大肠癌患者外周血单个核细胞(PBMC)GC-C mRNA表达水平及临床意义奠定基础。方法:在鸟苷酰环化酶C(GC-C)基因高保守区设计特异性的引物和探针,RT-PCR扩增目的片段并连接于pGEM-T载体,以得到GC-C质粒标准品。结果:经过蓝白斑筛选,PCR或EcoR I酶切初步鉴定,阳性克隆测序分析确定GC-C质粒标准品正确性。结论:正确构建GC-C质粒标准品为RFQ-PCR标准曲线的绘制及GC-C的定量检测奠定了基础。     

地戈辛加小剂量硫氮唑酮治疗老年心衰伴快心室率房颤

单用地戈辛控制老年充血性心力衰竭（CHF）伴快心室率房颤,有些病例心率减慢不明显,影响疗效,往往很难掌握剂量,容易造成中毒或剂量不足。本组研究以小剂量硫氮叹酮（Diltiazem）加地戈辛治疗此类疾病,取得满意效果。现报告如下。1对象与方法收集经过病史、体检、心电图、X线和超声心动图检查,明确诊断为心衰伴决心室率房颤患者82例。按硬币法则分为2组。sl例为地戈辛加硫氮哩酮治疗组,其中男41例,女10例;年龄问～82岁（平均674岁）。病因：风心瓣膜病28例,冠心病11例,高心病8例,心肌病4例,同时口服地戈辛0．25mg则和硫氮吐…     

实时荧光定量酶联免疫吸附试验检测HBV-DNA的临床意义

目的:探讨实时荧光定量PCR检测HBV- DNA在乙型肝炎的诊断、治疗及判断病情、预防等方面的临床应用价值。方法:运用实时荧光定量PCR和EL ISA法同时检测了乙型肝炎180例和正常献血员5 6例血清中HBV - DNA的含量及其免疫标志物,并对结果进行对比分析。结果:乙肝大三阳95例HBV - DNA阳性达95例(10 0 .0 0 % ) ,显著高于其它各组(P<0 .0 5 ) ,HBV- DNA含量为4 .8×10 7copies·ml- 1 ;小三阳患者HBV- DNA阳性率低于大三阳组(P<0 .0 5 ) ,但平均病毒含量与大三阳组差异无显著性(P>0 .0 5 ) ,高达2 .1×10 7copies·ml- 1 ;单独HBs Ag阳性和单独HBs Ab阳性组HBV- DNA阳性率分别为5 3.85 %、33.33% ,平均病毒含量分别为5 .6×10 5copies·ml- 1、3.8×10 4 copies·ml- 1 ;献血员5 6例血清HBV- DNA阳性3例,其病毒含量低于其它组。结论:实时荧光定量PCR检测HBV- DNA含量比EL ISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HBV在体内的复制情况,这对临床上抗病毒药物的选择和判断疾病的预后意义重大。     

卡托普利治疗心衰伴室性心律失常疗效的初步观察

本文旨在初步探讨非抗心律失常药物卡托普利对充血性心衰（CHF）病人的抗心律失常治疗作用和应用前景。资料和方法一、一般资料观察病例为住院及门诊患者，心功能（NYHA）为贝～IV级。入选96例，随机单育分为两组；治疗组52例，其中男36例，女16例，年龄36～78岁，平均50．2岁；病因为冠心病16例，高血压心脏病9例，风心瓣膜病21例，心肌病6例。对照组44例，冠心病15例，高心病6例，风心瓣膜病ZO例，心肌病3例；年龄41～75岁，平均53．1岁。两组病人在室早Lown分级方面无统计学差异（见表u一0·1717，P＞0·05）。全部病人治疗前用美…     

警惕心力衰竭纠正后的猝死--附14例临床分析

近来我们遇到这种情况,即通过多方面治疗,心力衰竭已经或基本纠正,其临床症状和体征明显改善,但病人却突然猝死。本文就此问题结合有关文献分析如下。     

芯片检测HBV DNA多态性的临床意义

目的：DNA芯片检测乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)基因前C／C区、C基因区启动子(BCP)和P区等多个位点多态性。方法：将多条寡核苷酸探针固定于芯片的特定位置，与PCR扩增的HBV基因相应区段杂交，酶呈色，根据特定位置上的杂交信号判定基因突变的类型。结果：HBeAg( )和抗HBe抗体( )两组患者中前C／C区变异的不同频率分别为慢性乙型肝炎患者(Chronic hepatitis B，CHB)25％和61％，HBV无症状携带者(Asymptomatic carrier，ASC)12％和55％，重症乙型肝炎(Severe hepatitis B，SHB)50％和58％；BCP区变异的不同频率分别为CHB20％和48％，ASC11％和45%，SH75％和75％。3例服用lamivudine的患者半年后有2例发生P区变异(YMDD→YIDD)。结论：DNA芯片检测HBV基因多态性具有较好的灵敏度和重复性，操作简便，易于临床推广应用；前C／C区和BCP区变异可能是HBeAg(—)患者HBV感染的两大主要原因，且与肝炎慢性化、重症化有密切关系。     

枕叶出血3例误诊原因分析

枕叶出血在临床中较少见 ,笔者在临床实践中发现 3例 ,在应用ＣＴ检查前均被误诊 ,现报道如下。1　病例介绍例 1,男性 ,5 5岁 ,退休工人 ,于行走途中突然头痛伴恶心半小时入院。头痛以枕部为著 ,无呕吐 ,有高血压病史五年 ,一年前有“蛛网膜下腔出血”病史。查体 :血压 2 8/ 16ｋＰａ,神清 ,问答切题 ,心肺 (- ) ,神经系统无重要阳性发现。腰椎穿刺检查 :洗肉水样脑脊液 ,镜下红细胞计数 0 .98× 10 9/Ｌ ,测脑压 2 30ｍｍＨ2 Ｏ。初步诊断 :再发性蛛网膜下腔出血 ,经止血、脱水、控制血压及其它对症治疗 ,症状明显好转 ,入院第五天颅ＣＴ检…