2017-2018年广东省深圳市疱疹性咽峡炎患者肠道病毒分子流行病学研究

目的 了解广东省深圳市疱疹性咽峡炎（HA）病原组成与病原体的分子特征,为HA的预防与控制提供科学依据。方法 2017—2018年收集了157例HA患者的314份临床样本,其中粪便样本和咽拭子各157份。使用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和基于半巢式RT-PCR扩增的测序方法对肠道病毒（EV）进行检测与分型。使用生物信息学软件对病毒VP1基因进行序列分析。结果 在126例（80.30%, 126/157）EV阳性的患者中,共检出10种EV,检出率最高的是柯萨奇病毒A组10型（CVA10）(19.70%, 31/157),其次是CVA4(17.80%, 28/157)、CVA6(15.30%, 24/157)和CVA2 (10.80%, 17/157),其他病原体包括CVA5(4.50%, 7/157)、CVA16(3.20%, 5/157)、EV-A71(1.30%, 2/157)、CVA8(0.60%, 1/157)、CVB5(0.60%,1/157)和埃可病毒11(E11)(0.60%, 1/157),1例为CVA4与CVA10的混合感染（0.60%, 1/157）。2...     

新型冠状病毒经多系统排毒研究进展

新型冠状病毒肺炎是一种由新型冠状病毒引起的传染性极强,影响范围极大的新发突发传染病.自病原体明确以来,了解其感染性和传播途径已成为关注重点.本文总结了患者多器官系统中病毒排毒相关的文献,讨论了其在呼吸道、消化道及尿液、眼泪等体液和组织中排毒的规律,发现新型冠状病毒可以经呼吸道、消化道排出感染性病毒颗粒,还有感染眼部、肾...     

深圳市重点人群肝吸虫病感染状况分析

目的了解深圳市重点人群肝吸虫病感染状况并探讨感染危险因素,为制定肝吸虫病防治对策提供依据。方法对2008年5月～2009年5月来诊的肝吸虫病症状可疑、血液嗜酸性粒细胞增高、有生食淡水鱼虾习惯的重点人群进行肝吸虫病血清学检测和相关知识行为学调查。结果共调查1382名6～65岁重点人群,检出肝吸虫IgG抗体阳性373人（26．98％）。男性的感染率为27．89％（260／932）,女性感染率为25．11％（113／240）,男女性别间比较无统计学差异。不同年龄组人群感染率不同,最高感染率的年龄组分布在31～40岁．知识行为学调查显示,59％的被调查者不了解肝吸虫病及其传播途径,68％的被调查者每月至少吃1次淡水生鱼,11％的家庭生熟刀具未严格区分。结论深圳市重点人群肝吸虫病感染阳性率高于一般人群,加强重点人群的监测和干预对于肝吸虫病的预防和控制有着重要的意义。     

双重荧光定量RT-PCR快速检测N_1、N_2亚型流感病毒的研究

目的利用荧光定量RT-PCR技术建立快速检测流感病毒N1、N2亚型的方法。方法根据N1、N2亚型流感病毒NA基因的相对保守序列,设计两对引物及其相应的Taqman探针,利用一步法RT-PCR试剂盒建立、优化反应体系后,采用十倍稀释体外转录RNA检验建立体系的灵敏度和重复性并建立相对定量标准曲线;利用多种流感病毒和具有相似临床症状的呼吸道病毒检验建立体系的特异性。结果 N1、N2亚型流感病毒的检测灵敏度为10拷贝/μl,扩增效率分别为102.21%和101.78%,标准曲线相关系数大于99%,重复性良好,特异度实验未发现有非特异性扩增。结论双重荧光定量RT-PCR技术可以快速、准确的检测N1、N2亚型流感病毒。     

严重急性呼吸综合征冠状病毒S蛋白部分序列1的纯化及免疫活性分析

目的表达和纯化严重急性呼吸综合征（SARS）冠状病毒S蛋白部分序列1（S1）,分析其诱导的免疫应答.方法大量诱导表达SARS冠状病毒S1蛋白,经超声裂解细菌后,取上清液进行亲和层析以纯化S1蛋白,并冻干浓缩;用纯化的S1蛋白免疫小鼠3次,间接酶联免疫吸附法（ELISA）检测产生的抗体IgG及其亚类的滴度,分析S1蛋白诱导的免疫应答.结果表达的S1蛋白主要存在于包涵体中,裂解上清液中存在少量S1蛋白;亲和层析纯化获得了能被SARS患者混合血清识别的S1蛋白,融合蛋白免疫小鼠3次后诱导产生了高滴度的IgG抗体和Th1/Th2型的免疫应答.结论纯化的S1蛋白具有良好的免疫学活性.     

弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究

目的用pVACGRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护作用。方法大量制备pVACGRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠3次,以pVAC空质粒及不经任何处理的空白组为对照。于末次免疫4周后作免疫指标测定(包括MTT法测定小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性、间接免疫荧光法测定T淋巴细胞亚群数目、双夹心ELISA法测定细胞因子IFNγ及IL4含量、间接ELISA法测定IgG抗体滴度),并观察攻毒试验后小鼠存活情况。结果脾淋巴细胞增殖各组间差异无显著性(P>0.05);pVACGRA4组CD4+T细胞百分率无明显变化(P>0.05),CD8+T细胞百分率明显增加(与pVAC对照组比较P<0.05,与空白对照组比较P<0.01),CD4+/CD8+比值也较空白对照组明显降低(P<0.01);pVACGRA4免疫组IFNγA值比对照组略高,但差异无显著性(P>0.05),IL4A值各组间无明显变化(P>0.05);pVACGRA4组可诱导产生特异性IgG抗体,但滴度不高;pVACGRA4免疫组小鼠存活率显著高于两对照组,死亡小鼠的平均存活时间延长(与空白对照组比较P<0.05)。结论用pVACGRA4重组质粒DNA免疫小鼠,可诱导产生以细胞免疫为主的免疫应答及对弓形虫攻击感染的部分保护作用。     

应用rDNA-ITS2诊断性序列现场对3种重要蚊媒的鉴定

目的 建立利用核糖体DNA第二内转录间隔区(rDNA-ITS2)诊断性序列鉴别蚊媒的分子生物学方法. 方法 根据淡色库蚊、白纹伊蚊、嗜人按蚊rDNA-ITS2基因两侧的5.8S和28S保守区设计诊断性引物,进行3种蚊虫的rDNA-ITS2克隆鉴定,并利用其rDNA-ITS2特征进行现场蚊虫的鉴别. 结果 诊断性引物对于淡色库蚊、白纹伊蚊、嗜人按蚊DNA模板的扩增产物分别为440、514和558 bp,3种蚊虫阳性克隆的测序结果与GenBank-blast相应蚊种rDNA-ITS2序列的同源性均为99%.用Biosept、DNAstar等软件分别分析发现各蚊虫克隆的个体间存在一定程度的单核苷酸多态性(SNP).将现场采集的蚊虫诊断性引物扩增产物进行阳性克隆进行序列测定和分析,显示与淡色库蚊阳性对照的一致性为99%;与GenBank中淡色库蚊rDNA-ITS2基因的同源性为99%. 结论 通过对淡色库蚊、白纹伊蚊、嗜人按蚊核糖体DNA第二内转录间隔区(rDNA-ITS2)基因的序列分析,表明3种蚊媒的rDNA-ITS2基因具有可鉴别的种属特异性.利用同一体系的共享引物扩增,可以建立适用于3种蚊媒的现场鉴定方法.     

间日疟原虫MSP1 C端编码基因的克隆及序列分析

目的 克隆间日疟原虫MSPl C端编码基因，并进行序列测定和分析。方法 根据间日疟原虫MSPl C端编码基因设计1对引物，采用PCR技术从深圳间日疟患者血样(编号为PvSZl)的核酸提取物中扩增出MSPl C端编码基因，回收纯化后，与T载体连接构建重组子pMD／MSPl，并转化大肠杆菌JMl09。阳性克隆以限制性酶切分析与PCR法鉴定后，双脱氧链末端终止法双向测定序列并分析。结果 从间日疟血样提取的DNA中扩增出1119bp的基因片段，所构建的pMD／MSPl阳性克隆重组子经双酶切和PCR鉴定与预期结果一致。所测定的间日疟原虫PvSZl C端基因序列与国外Sal-1株比较，碱基数相同，未发现碱基缺失，相同的核苷酸占96．7％，序列中第542位碱基变化为同义突变(GTC→GTT，均编码缬氨酸)，第375～542区间的碱基变化数占整个序列变化碱基总数的92．9％(34／37)。所推测的氨基酸序列与Sal-1株比较，同源性为92．5％。结论 成功克隆了间日疟原虫PvSZl株MSP1 C端编码基因，该基因存不同间日疟原虫地弹株间相对保守，所克隆基因序列的第375～542核苷酸区域为高频变化区。     

2株间日疟原虫18SrDNA的克隆及其同源性分析

目的克隆间日疟原虫河南分离株与湖北分离株红内期18SrDNA,并进行同源性分析。方法采用PCR方法从间日疟患者血样DNA中扩增间日疟原虫18SrDNA,纯化后与pGEM．Teasy质粒连接,转化大肠埃希氏菌JMl09;阳性克隆质粒经双酶切鉴定后,进行序列测定,采用BLAST和MEGA4生物软件分析同源性。结果间日疟原虫18SrDNA扩增片段大小为998bp：阳性克隆重组质粒经双酶切鉴定,与预期结果相符;序列测定结果显示,河南、湖北2分离株间日疟原虫18SrDNA序列完全相同．与GenBank中报道的12株间日疟原虫相同序列进行比对,其同源性均大于99％：用邻位连接法（neigh—bor-joining,NJ）和非加权组平均法（UPGMA）2种方法构建系统发生树发现,河南分离株、湖北分离株与间日疟原虫X13926．1株遗传距离小．同属一个分支。结论克隆了间日疟原虫河南与湖北分离株红内期18SrDNA,该基因序列在不同地理株间遗传稳定。