CYP4G19基因在德国小蠊对菊酯类杀虫剂耐药中作用研究

目的通过CYP4G19基因调控表达探讨CYP4G19在德国小蠊对菊酯类杀虫剂耐药中的作用。方法广口瓶内采用药膜接触法测定野生株和敏感株德国小蠊的耐药指数,RT-PCR比较野生株和敏感株德国小蠊CYP4G19基因表达,免疫组织化学法测定CYP4G19蛋白表达。结果深圳市现场采集野生型德国小蠊,用广口瓶药膜法测得其抗性指数为3.88,提示野生品系对菊酯类杀虫剂具有抗药性;RT-PCR检测野生株CYP4G19 mRNA表达水平对比敏感株显著上调（t=4.185,P〈0.01）;野生株CYP4G19基因沉默后CYP4G19蛋白表达明显下降但仍然具有一定的抗药性。结论深圳市野生株德国小蠊已对菊酯类杀虫剂＂家虫清＂产生抗药性,对菊酯类杀虫剂产生抗药性的德国小蠊体CYP4G19基因的转录、翻译表达水平均有上调;野生株CYP4G19基因沉默后仍然表现一定的抗药性暗示德国小蠊抗药性可能涉及到多基因的调控表达。     

指数平滑模型在流感样病例预测中的应用

目的建立指数平滑模型预测流感样病例率的变化趋势。方法利用深圳市2006～2008年流感监测的ILI周数据建立指数平滑模型,拟合ILI%的变化趋势,对2009年的流感样病例率进行预测。结果 2006～2008年深圳市的ILI%呈季节性周期变化,Holt-Winters指数平滑模型为最优模型,预测值与实际值的平均相对误差为9.8%。对2009年流感样病例率的预测结果为,2009年上半年的平均相对误差为11.0%,下半年的平均相对误差为39.5%。结论指数平滑模型可对ILI%进行很好的拟合,建模后的中短期预测效果较好。     

2010年深圳市流感流行病学分析

目的 对2010年深圳市流感监测结果进行分析,了解流感的流行趋势,为流感防治提供科学依据.方法 收集全市31家监测单位的流感样病例数据、病原学检测结果和暴发疫情资料进行分析.结果 2010年深圳市的流感样病例百分比(ILI％)为5.43％.2010年全市共采集日常监测ILI咽拭标本4 031份,分离出445株流感病毒,阳性率为11.0％,其中14株季节性H1N1亚型(3.1％),42株季节性H3N2亚型(9.4％),171株甲型H1N1亚型(38.4％),213株B(Victoria,47.9％)亚型,5株B(Yamagata,1.1％)亚型.2010年全市报告了89起ILI暴发疫情,发病总人数741人,流感PCR检测阳性79起,其中季节性甲型6起(6.8％),乙型67起(75.3％),甲型H1N1流感6起(6.8％).结论 2010年深圳市流感活动较低,未出现明显的高峰.     

深圳市首例基孔肯雅病毒的形态学及分子遗传特征分析

目的 对深圳市首发基孔肯雅病毒(CHIKV)进行分离、增殖培养、浓缩、形态学观察及构建系统发生树分析,为后续基因组信息解析、蛋白组分析、单克隆抗体制备及疫苗研发等应用性研究提供实验基础.方法 利用C6/36细胞从病人血清中分离CHIKV,采用BHK-21细胞对CHIKV进行大量的增殖培养,经7％PEG8000浓缩,超薄切片和负染观察CHIKV显微结构;对分离得到的CHIKV株进行全基因组测序和构建系统发生树,结合流行病学资料对其分子遗传特征进行分析.结果 CHIKV被成功分离并浓缩;在透射电镜下观察CHIKV的直径约为70 nm,圆形有包膜,表面有纤突;CHIKV(SZ-20101028)基因组长为12 377bp,属于E1-A226突变株;该病毒是最近10年来在印度洋岛屿爆发流行的新亚型,与流行病学调查资料相吻合.结论 以现有的条件建立了一种稳定、快速培养浓缩CHIKV的方法,并初步对CHIKV进行了形态观察和溯源性分析.     

深圳市戊型肝炎血清流行病学调查

目的 了解深圳市戊型肝炎抗-HEV IgG抗体水平,为制定预防控制措施以及戊肝疫苗免疫策略提供依据.方法 采用多阶段分层随机抽样法,全市按行政级别由高到低分为区、街道办事处、工作站3层,每层均采取随机抽样的原则进行抽样,对深圳市8个区1～59岁3 771名居民戊型肝炎抗体水平进行调查研究,采用酶联免疫吸附试验检测戊型肝炎IgG抗体.结果 本次调查共检测3 771人,男性1 834人,抗体阳性率为23.72％,女性1 937人,抗体阳性率为23.64％.其中深圳户籍人口1 389人,抗体阳性率为19.08％;非深圳户籍人口2 382人,抗体阳性率为26.36％.不同年龄组人群抗体阳性率差异有统计学意义,且随着年龄的增长抗体阳性率呈增长趋势.不同文化程度人群抗体阳性率差异有统计学意义,且文化程度高的人群抗体阳性率最低,为28.50％.结论 深圳市人群中抗-HEV IgG流行率与年龄、居住地类型、文化程度有关,而与性别无关.深圳市戊肝的流行趋势不容忽视,应加强对戊肝的监测.     

金黄色葡萄球菌SEB基因的克隆及其系统发生分析

目的克隆和测定金黄色葡萄球菌深圳分离株S4070肠毒素B（SEB）基因序列,并作系统发生分析。方法采用PCR法从金黄色葡萄球菌S4070基因组中扩增出SEB基因片段,纯化后与pMD-18T载体连接构建重组子pMD-18T-SEB,并转化E.coli DH5α;阳性克隆质粒经双酶切法鉴定后,采用双脱氧末端终止法作序列测定,并以BLAST和MEGA4软件分析其分子特征。结果从金黄色葡萄球菌基因组DNA中扩增出约704bp的基因片段,阳性克隆质粒鉴定结果与预期一致;序列测定结果显示,所克隆的SEB基因片段含704个碱基,与GenBank中17株金黄色葡萄球菌SEB基因序列比对,无碱基的插入或缺失,同源性均为98%以上;基于SEB基因序列,采用邻位连接法（Neigh bor-joining）构建系统发生树,深圳S4070株与日本分离株NN35、NN37、NN41-F1D、NN41-F1F和NN41-F1G以及印度分离株DQ535901、DQ535902的遗传距离小,同处在一个分支群上。结论实验成功克隆了金葡菌深圳株S4070 SEB基因,不同分离株间SEB基因序列相对保守,本分离株与日本和印度分离株遗传关系较近。     

2009H1N1流感病毒对A549细胞和BEAS-2B细胞作用的初步研究

目的 探求2009H1N1流感病毒对A549细胞和BEAS-2B细胞作用,为研究2009H1N1流感病毒的致病机理提供线索。方法 不同来源(死亡、重症、普通病例分离)的2009H1N1流感病毒和季节性H1N1流感病毒分别感染A549和BEAS-2B细胞12、24、48、72 h后用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果 感染A549细胞12和24 h,普通病例分离的2009H1N1流感病毒组的细胞凋亡率最高(P<0.05),重症组的细胞凋亡率最低(P<0.05);48 h和72 h,死亡组细胞凋亡率最高(P<0.05)。感染BEAS-2B细胞12 h,重症组细胞凋亡率最高(P<0.05);48 h,死亡组和重症组细胞凋亡率高(P<0.05);72 h,死亡组和普通组细胞凋亡率高(P<0.05)。4株病毒主要将A549细胞阻滞在S期,将BEAS-2B细胞阻滞在G0/G1期。结论 在细胞凋亡和细胞周期的细胞学观察水平上2009H1N1流感病毒和季节性H1N1流感病毒之间存在差异,不同来源的2009H1N1流感病毒之间也存在差异。     

弓形虫RH株微线体蛋白MIC3基因的克隆与表达

目的 克隆和表达弓形虫微线体蛋白MIC3基因。方法 从弓形虫RH株分离总的RNA,反转成cDNA.根据MIC3基因序列,设计合成一对引物,用聚合酶链式反应(PCR)方法从弓形虫cDNA中扩增MIC3基因片段,插入pGEM-T载体,并转化大肠杆菌Top10,经PCR、双酶切、测序验证后,将MIC3基因片段定向亚克隆到载体pET-28a中构建原核表达重组质粒pET-28a-MIC3,重组子在E.coli BL21中经IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果 从弓形虫RH株cDNA中扩增出792bp大小的MIC3基因片段并诱导表达27 300 Mr的重组MIC3蛋白。结论 成功构建和表达了弓形虫pET-28a-MIC3重组质粒,为弓形虫病诊断抗原和疫苗的研究莫定了基础。     

深圳市疟疾预防与控制综合措施分析

目的 研究深圳控制疟疾爆发流行的预防、控制措施及蚊的种群分布.方法 分析深圳控制疟疾综合防治的措施,对疟疾高度流行区的人群使用氟氯氰菊酯缓释剂型防蚊蚊帐预防疟疾感染,利用金标层析试纸条快速筛查来自疟疾流行区人群,筛选传播疟疾蚊媒遗传标志并建立传疟蚊媒分子诊断技术:利用多基因遗传分析系统监测蚊媒耐药基因的表达.结果 深圳市疟疾的年发病率从1981年的1 097.89/10万下降到2005年的1/10万以内,在1985-1990年疟疾高度流行期间制作防蚊蚊帐148万顶,保护了60多万暴露在疟疾感染下的人群,金标层析试纸条检测与镜检结果的符合率为1 00%,筛选了ITS2基因用于快速鉴别不同蚊媒的种类.结论 疟疾控制必须采取积极预防、早期诊断和治疗、媒介监测和健康教育等综合防治措施.     

应用12D5和21B7单克隆抗体检测广州管圆线虫循环抗原的研究

目的 研制快速诊断广州管圆线虫感染的金标层析检测试剂.方法 双抗体(12D5和21B7)夹心ELISA检测实验感染广州管圆线虫的大鼠、广州管圆线虫感染病例血清循环抗原(CAg),同时将12D5和21B7单抗点样于固相的硝酸纤维膜上,以胶体金-protein A为标记物制备金标免疫层析试剂快速检测实验感染广州管圆线虫的大鼠、广州管圆线虫感染病例血清循环抗原.结果经鉴定单抗12D5为IgG1,21B7为IgM,两株单抗同时识别广州管圆线虫成虫相对分子质量55×10~3的蛋白,12D5和21B7双抗体夹心ELISA和金标层析法对实验感染广州管圆线虫的大鼠血清中CAg检出率为100%(48/48),广州管圆线虫感染病例血清CAg检出率为100%(32/32),与日本血吸虫、肝吸虫、肺吸虫、旋毛虫、蛔虫、包虫病例血清无交叉反应,与健康人血清无反应.结论 12D5、21B7双抗体夹心ELISA和金标层析法对感染广州管圆线虫人和动物血清中CAg检测的特异性强,金标层析法操作简便、快速,结果判读容易,不需特殊设备,且敏感性高,能够确定现症感染.