分子信标探针荧光芯片检测结核分支杆菌的实验研究

目的研究运用分子信标探针荧光芯片检测结核杆菌的一种新方法并优化杂交条件。方法设计出针对结核杆菌检测的特异性分子信标探针并运用于荧光芯片,提高杂交效率部分优化包括分子信标探针浓度及纯度;杂交温度、杂交时间、杂交液配方;4种分子对分子信标荧光信号比较。结果Mg2+终浓度为5 mmol/L时,PCR扩增效率最高,分子信标荧光强度最强;单侧延长臂分子信标采用淬灭分子中间标记,能很好的结合在芯片上;3种杂交液的杂交结果比较:0.15%SDS效果好于0.2%SDS,10×SSC效果好于5×SSC;Cy3-BDH分子信标探针浓度约15μmol/L、FAM-DABCLYE探针浓度约9μmol/L时,杂交反应达到7 h可检测到较强信号;Cy3-BDH组成分子信标荧光-淬灭效率较Cy3-DABCLYE高。结论单侧延长臂分子信标探针设计较巧妙地把分子信标高特异性、高敏感性的优势自然运用到芯片技术上,结核杆菌分子信标荧光芯片检测具有良好的检出率、特异性与敏感性。     

纠正功利主义倾向加强和改进大学德育教育

当今大学在办学指导方针上存在着功利主义倾向,在德育工作方面没有把以人为本、提升青年学生道德和人格水准作为新时期大学教育的使命。为此,本文提出大学教育应该以育人为本,把培养具备高尚、完美人格的人作为教育的根本任务。要研究构建代表先进文化前进方向的、合理的、完整的德育体系,使大学培养出来的学生真正达到既具备适应市场经济需求的各种品格,又能在一定程度上能超越现实和物质利益、具备完美人格的高尚的人。     

流式细胞术检测HLA-B27抗原的表达及意义--与微量淋巴毒实验的比较

目的对不同HLA-B27检测方法之间的差异及各自的优缺点进行评价并探讨其临床意义.方法分别采用微量淋巴毒法（MCLT）及流式细胞术（FCM）检测134例患者外周血标本的HLA-B27抗原,将二者结果进行分析比对;并对患者人群中的B27荧光强度与发病年龄及患病时间之间进行相关分析.结果两种检测方法检测脊柱关节病组和对照组HLA-B27阳性例数及阳性率相比,差异均无统计学意义,结果符合率为94.8%,仅有7例不符合,而对照组的符合率为100%;B27荧光强度与起病年龄之间存在较弱的正相关（r=0.345,P=0.026）,而与患病时间之间存在较弱的负相关（r=0.371,P=0.006）.结论两种检测方法均准确可靠,HLA-B27检测对AS的早期诊断与判断预后意义重大;B27表达强度与发病年龄及患病时间之间可能存在一定程度的关联.     

压电免疫球蛋白微阵列免疫传感器抗体固定方法的研究

目的构建一种新型压电免疫球蛋白微阵列免疫传感器,探索SPA法在金电极表面进行抗体固定的最佳条件。方法以AT切型、基频10MHz的金膜石英晶体作为换能器,将抗人免疫球蛋白单克隆抗体固定在石英晶体电极表面,根据SPA能通过分子间作用力与Au原子形成稳定的SPA-Au复合物的原理,对抗体进行固定,对SPA固定抗体的最佳温度及时间条件、抗体浓度、pH值等影响因素进行实验研究。结果包被SPA宜于采用低温、长时间的包被方式,进行抗体固定的抗体溶液最佳浓度5mg/ml,pH值7.2。结论采用SPA法在石英晶体表面进行抗体固定操作简单、省时,是压电免疫传感器抗体固定的有效方法。     

非发酵菌的分离鉴定和耐药性分析

目的研究医院2005年临床分离的非发酵菌病原菌分布及耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供科学依据。方法采用法国生物梅里埃公司API系统进行细菌鉴定,K-B法做药敏,应用WHONET-5软件对药敏结果进行数据统计分析。结果分离出的2908株病原菌中,非发酵菌604株,其中铜绿假单胞菌最为常见(52.32%),其次为嗜麦芽寡养单胞菌(14.07%)、鲍氏不动杆菌(13.74%),非发酵菌在痰液中检出最多(76.32%),检出的非发酵菌对所监测的抗菌药物均有不同程度耐药。结论非发酵菌检出率较高,且呈多重耐药,临床治疗非发酵菌感染应根据药敏结果合理使用抗菌药物。     

抗真菌药敏试验在3种不同琼脂平板的比较

目的通过对临床常用的5种抗真菌药物的纸片扩散法药敏试验,对3种真菌药敏培养基进行比较分析。方法选用5种Rosco公司的Neo-Sensitab抗真菌药敏纸片,在Shadomy改良琼脂、RPMI 1640琼脂(RPMI1640)和葡萄糖亚甲蓝M-H琼脂(GMB M-H)3种培养基上对80株临床分离酵母菌检测,以Shadomy改良琼脂为对照。结果对于5种抗真菌药物其敏感性,RPMI 1640琼脂与Shadomy改良琼脂相比较,它们的符合率相同都较高;亚甲蓝MH无其他两种的符合率高,RPMI 1640和GMB M-H与Shadomy相比都显示了较好的相关性(P<0.01)。结论RPMI 1640琼脂可以用于Rosco抗真菌药敏纸片试验,既经济、简便、快速、准确,又有良好的实用性,可以代替Shadomy培养基;MH亚甲蓝培养基对于5-氟胞嘧啶的判读结果与NCCLS相差甚远,对于其他药敏纸片的结果与NCCLS的符合率,也没有另外两种琼脂上做出结果的符合率高,不建议使用M-H(亚甲蓝)琼脂进行Rosco纸片扩散实验。     

应用多重PCR鉴定对人致病的产气荚膜梭菌毒素

目的研究用多重PCR的方法鉴定产气荚膜梭菌及分型毒素,为开展基因诊断做好准备。方法根据GenBank已经发表的产气荚膜梭菌毒素基因序列,设计出针对CPα、CPβ、CPE毒素基因的3对特异引物,运用多重PCR的方法鉴定出产气荚膜梭菌并对其毒素基因进行分型。结果经电泳鉴定,多重PCR成功的扩增出预先设计的3条特异的目的条带。结论所设计的多重PCR反应体系能够得到产气荚膜梭菌的特异序列,同时能够鉴定分型3种对人致病的毒素序列,为进一步开展基因诊断打下基础。     

漏声表面波生物传感器的研究现状及应用

生物传感器由于集高效、灵敏、特异、结构小巧、经济实用等优点于一身,目前已成为生命科学领域的研究热点[1]。它利用各种类型的换能器,将待测的生物信号转换为声、光、电等可检测的物理信号,从而实现对样本中靶生物分子的检测。随着声学技术的迅猛发展,近年来出现了一系列漏声表面波(LSAW)传感器,这种传感器广泛应用于测量温度、质量及液体密度等物理参数[2,3]。LSAW传感器是继陶瓷、半导体、光纤等传感器之后逐步发展起来的一种新型传感器[4,5],它综合了物理、材料、微电子、信号处理、工艺等众多学科知识,是一个技术密集的领域。1漏…     

尿β2微球蛋白压电传感器阵列的构建与临床应用

目的探讨并建立压电石英晶体免疫传感器检测尿液微量β2微球蛋白的方法。方法采用葡萄球菌A蛋白（SPA）法固定石英晶体微阵列上单克隆抗β2微球蛋白抗体,并用石英晶体微天平（QCM）检测样品反应频率漂移量;优化传感器检测条件并运用回收实验,天内、天间重复试验来验证其准确度与精密度,并将免疫比浊法作为参比方法与建立的传感器方法进行方法学比较。结果该传感器平台的非特异性反应低（FS〈20Hz）,线性范围广（0.01～40.00mg/L）,灵敏度达到3μg/L,准确度高（CV〈10%）,精密度试验总体CV〈10%,并且具有检测时间短（〈10min）等优点,与传统的免疫比浊法具有可比性。结论采用压电石英晶体免疫传感器法检测尿液微量β2微球蛋白是一种可行的检测方法,可应用于临床检测并为诊断早期肾损伤提供帮助。     

同源基因定量聚合酶链反应条件的优化

目的探讨同源基因定量聚合酶链反应（PCR）的最佳反应条件。方法用两种PCR仪分别扩增正常人位于唐氏综合征致病关键区域的人肝型磷酸果糖激酶基因（PFKL）和人肌型磷酸果糖激酶基因（PFKM）。结果两种PCR仪的最佳退火温度分别是64℃和60℃,且只有在此反应条件下PFKL和PFKM的电泳条带光密度值具有一致性。结论不同的PCR仪器检测唐氏综合征扩增条件也不同。