结核分枝杆菌PPE60的GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达和鉴定

目的构建结核分枝杆菌PPE60的GST融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA为模板,经PCR技术扩增目的基因,将目的基因克隆到pGEX-4T-1载体中,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆。进行质粒的酶切鉴定和序列分析;对重组的大肠杆菌进行诱导表达,SDS-PAGE分析菌体蛋白,凝胶密度扫描分析目的蛋白的表达情况,Western-blot鉴定融合蛋白。结果正确构建了pGEX-PPE60融合表达载体,载体能在大肠杆菌中表达分子量约为70 kDa的重组蛋白,占菌体总蛋白的50%。该融合蛋白能与GST抗体产生阳性反应。结论成功构建了GST-PPE60融合蛋白的表达载体,并能在大肠杆菌中高效表达,为PPE60蛋白的功能研究奠定了基础。     

抗结核分枝杆菌单克隆抗体用于结核杆菌抗原分析、鉴定及检测的研究

目前,结核病仍是严重危胁人类健康的传染病,如何有效控制结核病,并且降低结核病患病率和发病率是我国乃至世界卫生工作中一项迫在眉睫的任务。因此,对于结核病的诊断和治疗的研究仍有许多工作要做。抗结核分枝杆菌单克隆抗体的研制对于结核病的血清学诊断、结核病的治疗以及结核分枝杆菌抗原的分析都有重要的意义。抗结核分枝杆菌单克隆抗体将作为工具被越来越深入及越来越广泛的进行应     

气相色谱与薄层层析法用于分支杆菌及相关菌的分类鉴定

用酸性细胞水解法提取出的分支杆菌及相关菌属菌体脂肪酸（ＦＡ）和支菌酸（ＭＡ），可分别通过气相色谱和薄层层析（ＴＬＣ）两种方法进行测定，在得到纯培养物２４小时内同时获得测试菌种丰富的类脂信息。利用本文介绍的结合ＧＣ－ＴＬＣ抗酸菌鉴定法，不仅可将分支杆菌属和在菌体形态、生理生化特性上与其相似的胞壁Ⅳ型菌诺卡氏菌属、红球菌属、棒杆菌属相互区别，而且可以将８５％的分支杆菌鉴定到种的水平，很多单用ＭＡ分析或ＦＡ分析不能区分的菌种均能被很好的识别。     

色谱技术在分支杆菌分类鉴定及诊断中的应用

色谱技术近年来在医药学领域的广泛应用,尤其是在临床微生物检验方面所发挥的作用己引起各方面的重视。以气相色谱(GC)为主的色谱技术不仅是分支杆菌属分类工作必不可少的手段,而且在分支杆菌的菌型鉴定、结核性脑膜炎的快速诊断及结核杆菌的药敏试验等方面均具有临床实用价值。本文结合作者的工作对这一领域10余年来国内外的研究进展作一综     

母牛分支杆菌制剂对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮水平的影响

一氧化氮（ＮＯ）在活化巨噬细胞抗某些肿瘤细胞和微生物上起重要作用。用不同剂量的母牛分支杆菌制剂免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，检测小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的水平，结果显示受免疫小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮水平明显高于未免疫小鼠（Ｐ＜０．０１－０．００１）。不同剂量母牛分支杆菌制剂免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，腹腔巨噬细胞产生的一氧化氮水平差别不显著（Ｐ＞０．０５）。因此认为，母牛分支杆菌制剂作为结核病免疫治疗剂其作用之一是活化巨噬细胞产生一氧化氮，从而达到杀菌的目的。     

金免疫斑点渗滤试验快速检测抗结核抗体对结核病诊断的价值

金免疫斑点渗滤试验快速检测抗结核抗体对结核病诊断的价值李晓明，庄玉辉，王巍，张敦熔肺结核的诊断主要依据临床、胸部Ｘ线表现及痰细菌学检查。痰涂片抗酸染色阳性率较低；细菌培养虽可提高检出率，但亦不足５０％，需６～８周才能报告结果，不能满足临床的需要。ＢＡ...     

聚合酶链反应－单链构象多态性用于耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变的研究

目的研究结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变及其与利福平（ＲＦＰ）耐药性的关系。方法以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法分析了４０株结核分支杆菌临床分离株。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法由ＰＣＲ扩增和扩增产物ＤＮＡ单链多态性分析组成。结果两对引物ＰＣＲ扩增产物分别为４１１和２５８ｂｐ，其敏感性分别为５ｐｇ／μｌ、５００个菌／ｍｌ和１ｐｇ／μｌ、５００个菌／ｍｌ；均为属特异性。４０株结核分支杆菌临床分离株２５８ｂｐ扩增片段ＳＳＣＰ图谱的特点：以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，１０株敏感株均无区别；单耐ＲＦＰ或包括ＲＦＰ多种抗结核药３０株，除３株外，其余２７株ＳＳＣＰ图谱有明显的区别；检测阳性率为９０％，特异性为１００％。结论ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法可检测出耐ＲＦＰ结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变；该基因是ＲＦＰ的药物靶编码基因，它的突变与ＲＦＰ耐药性有密切关系，这有助于结核分支杆菌耐药性的快速检测和研究     

16S～23S rDNA间隔区序列寡核苷酸探针不同显色方法对结核患者痰标本的检测

目的：评价16S－23rDNA间隔区序列寡核苷酸探针碱性磷酸酶显色与辣根过氧化物酶化学发光学对结核患者痰标本检测的应用价值。方法：采用生物素标记5′端18bp的寡核苷酸探针斑点杂交的碱性磷酸酶显色反 辣根过氧化物酶化学发光检测90例例结核患者和30例非结核患者痰标本,结果：痰标本基因组DNA直接与探针杂交,碱性磷酸酶显色反应检测阳性率为22．2％,辣根过氧化物酶化学发光检测阳性率为33．3％,痰标本经引物PL1、PL2扩增（扩增产物350bp,）与寡核苷酸探针杂交,碱性磷酸酶显色反应检测阳性率为77．8％,辣根过氧化物酶化学发光检测阳性率为83．3％,痰标本经引物b扩增（扩增产物250bp)与探针杂交,碱性磷酸酶显色和化学发光检测阳性率分别为75．6％,80．0％,检测的敏感性高于痰涂片。寡核苷酸探针与30例非结核患者痰标本DNA杂交则全为阴性。结论：寡核苷酸探针和250bpPCR扩增产物相结合,经化学发光显色是分枝杆菌检测的一种有效方法。     

聚合酶链反应分子灯塔法检测结核分枝杆菌

目的 评价聚合酶链反应（PCR）分子灯塔法检测临床标本中结核分枝杆菌（结核菌）的应用价值。方法 应用涂片镜检法、培养法及PCR分子灯塔法检测142份结核病患者痰标本,42份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 涂片镜检法检测结核病患者临床标本中结核菌阳性率为35.2%(50/142),培养法阳性率为35.9%(51/142),PCR分子灯塔法阳性率为44.4%(63/142)。用PCR分子灯塔法检测临床标本特异性为100％。结论 PCR分子灯塔法是一种全新的PCR分子交模式,PCR扩增、荧光探针杂交、检测一体化,在单一管内完成,其简便、快速、防污染,敏感性较高、特异性强,是结核病辅助诊断的有效方法之一。