聚合酶链反应-微孔板杂交技术检测临床标本中结核分枝杆菌

目的评价聚合酶链反应 (PCR) -微孔板杂交技术检测临床标本中结核分枝杆菌的价值。方法 :应用结核病细菌学涂片、培养常规检测方法及PCR -微孔板杂交技术检测 138例结核病患者痰标本 ,4 2例非结核呼吸系统疾病患者痰标本。结果 :用常规细菌学方法检测临床标本中结核杆菌敏感度为 37% (5 1/ 138) ,用PCR-微孔板杂交技术检测敏感度为 5 6 % (77/ 138) ,高于常规检测法 19%。用PCR -微孔板杂交技术检测临床标本特异性为 10 0 %。结论 :PCR -微孔板杂交技术将PCR扩增、核酸杂交的技术及酶免技术相结合 ,简便、快速、敏感度高、特异性强 ,是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

改良消减杂交法筛选结核分枝杆菌毒力相关基因

0　引言　结核病是长期危害人类健康的严重疾患之一 ,目前我国每年死于结核病的人数达 2 5 .6万 ,在传染病中居第一位 .然而结核分枝杆菌的致病详细机制至今仍不清楚 ,给结核病的治疗和预防带来一定困难 .人型结核分枝杆菌毒株H37Rv是引起结核病的主要病原 ,其基因突变株 H37Ra丢失致病能力 .利用改良消减杂交技术筛选出 H37Rv株与H37Ra株之间的差异基因片段 ,为进行毒力基因研究提供了基础 .1　材料和方法1.1　 m RNA提取　结核分枝杆菌经溶菌酶和蛋白酶 K处理后 [1 ] ,采用 Promega Poly ATtract○RSystem10 0 0试剂盒分别提取毒…     

应用双重PCR技术快速鉴定结核与非结核分支杆菌

目的：建立双重ＰＣＲ技术快速鉴定的结核与非结核分支杆菌。方法：通过试验选择双重ＰＣＲ最佳反应条件,检测引物Ａ１,Ａ２和Ｂ１,Ｂ２扩增分支杆菌的特异性及扩增结核分支杆菌的敏感性,并对３４例结核分支杆菌和非结核分支杆菌临床分离株鉴定。结果：引物Ａ１,Ａ２能扩增所试２４种分支杆菌,Ｂ１,Ｂ２仅扩增结核分支杆菌复合体菌种,两对引物扩增１２种非分支杆菌均为阴性。     

16S—23S rDNA间隔区序列寡核苷酸探针对龟分枝杆菌暴发感染的鉴定

目的：该研究旨在采用分子生物学技术,从基因水平上对深圳市某医院及河北辛集地区发生术后及注射后龟分枝杆菌暴发感染的临床分离株进行鉴定,并建立一套快速的鉴定龟分枝杆菌脓肿亚种的探针杂交方法。方法：根据龟分枝杆菌脓肿亚种标准株16S－rDNA间隔区序列测序结果,设计一对寡核苷酸探针,对其敏感性,特异性及其对临床标本和临床分离株的检测进行了研究,结果：探针检测PCR扩增产物敏感性为1ng,只与龟分枝杆菌脓肿亚种杂交,与56株龟分枝杆菌脓肿亚种临床分离株全部杂交,检测57株临床标本阳性率为66．6％,结论：探针检测从基因水平上再次确认引起这两次暴发感染的致病菌为龟分枝杆菌脓肿亚种,结果快速可靠,可为临床诊断提供依据。     

16s～23s rDNA间隔区序列聚合酶链反应鉴定术后龟分支杆菌暴发感染

目的　从基因水平上确认深圳市某医院术后暴发感染的致病菌,并建立一套快速的ＰＣＲ方法鉴定龟分支杆菌脓肿亚种。方法　根据分支杆菌的１６ｓ～２３ｓｒＤＮＡ间隔区序列,设计合成一对引物和龟分支杆菌脓肿亚种ＤＮＡ探针,采用ＰＣＲ 和ＤＮＡ 斑点杂交技术,对５３ 株龟分支杆菌脓肿亚种临床分离株进行ＰＣＲ扩增和ＤＮＡ杂交。在此基础上,采用１６ｓ～２３ｓｒＤＮＡＰＣＲ扩增体系检测２５９份临床标本,对部分标本做ＤＮＡ探针斑点杂交反应。结果　５３ 株龟分支杆菌脓肿亚种临床分离株均被扩增出一条特异的３８０ ｂｐ ＤＮＡ 带和出现特异的杂交斑点。２５９ 份临床标本,ＰＣＲ 扩增阳性率为６０－６％ 。结论　在基因水平上确认此次引起院内术后暴发感染的致病菌为龟分支杆菌脓肿亚种。１６ｓ～２３ｓｒＤＮＡＰＣＲ扩增检测体系灵敏、特异,能鉴定龟分支杆菌。     

微卡苗对PPD强阳性者体液免疫的影响及意义

目的 观察母牛分枝杆菌疫苗(即微卡苗)对机体体液免疫的影响?方法 测定PPD强阳性者注射微卡苗前?后12周,服异烟肼前?后血清IgG抗体OD值并进行对比分析?结果 注射微卡苗前?后12周血清抗体水平明显升高(P<0.01)阳性率由25%上升为80%?服药组?对照组抗体水平治疗前?后无差异?结论 注射微卡苗可提高机体的体液免疫水平,对于结核病的发生可能有预防效果,比服药更安全?易于控制?     

Smad家族蛋白在真核细胞中的表达

目的:探索Smad蛋白在肺部肿瘤形成过程中的分子机制,构建带FLAG标签的smad1、2、3、4的真核表达我体,并检测其在293T细胞中的表达.方法:以人肺细胞cDNA文库为模板.分别扩增smad1、2、3、4基因全长编码区序列,克隆到pCDNA3-FLAG真核表达载体上.用脂质体介导的基因瞬时转染法,将重组正确的表达载体转染293T细胞,Western-blot法检测细胞中的FLAG融合蛋白的表达.结果:酶切鉴定和DNA序列分析显示构建了正确的FLAG-smad真核表达载体,并都能在真核细胞中表达分子量大小相符的重组蛋白.结论:成功地构建了FLAG-smad1、2、3、4真核表逸载体,为Samd蛋白及其相关蛋白在肺部肿瘤的作用研究奠定了基础.     

结核分枝杆菌MPT64在毕赤酵母中的分泌表达

目的克隆结核分枝杆菌MPT64基因全长，构建毕赤酵母分泌型表达载体，获得表达MPT64的重组毕赤酵母工程菌。方法利用PCR技术扩增MPT64基因克隆到毕赤酵母分泌表达载体pPICZotA中；将正确的表达载体线性化后，电击导人到毕赤酵母GS115中，Zeocin^TM抗性筛选正确的重组子；SDS—PAGE及Western-blot鉴定分泌表达MPT6d的重组毕赤酵母。结果克隆获得了正确的MPT64酵母分泌表达载体，并获得了相应的重组酵母株，该重组子经甲醇诱导培养后能分泌大小约30kDa的蛋白，该蛋白能特异地与His抗体结合。结论本实验获得了酵母重组的结核杆菌MPT64蛋白，为探讨其生物学性能和临床上的应用奠定了实验基础。     

结核病若干问题研究进展

结核病是由结核分枝杆菌引起的一种严重危害人类健康的慢性传染病。据世界卫生组织（world Health Organi—zation，WHO）2010年全球结核病控制报告显示[1]，2009年全球新发结核病患者940万，共有结核病患者1400万，死于结核病者130万。结核病给人类的健康带来了如此巨大的负担，人类一直致力于结核病诊断、治疗、预防等方面的研究。笔者将从以下5个方面来介绍结核病研究的一些进展。