2011-2012年杭州市手足口病的病原构成及肠道病毒71型的分子流行病学特征

目的 探讨杭州市手足口病病原谱构成及其肠道病毒71型(human enterovirus 71,EV71)的分子特征。 方法 采集210例疑似手足口病感染者的粪便标本及其相关临床资料,采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)方法进行初步检测,利用RT-PCR扩增部分EV71和柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16, Cox A16)阳性样本VP1基因区并测序分析。 结果 荧光定量RT-PCR检测表明,210例疑似感染者的粪便中, EV71、Cox A16 和其他肠道病毒的阳性率分别为60.95%(128/210)、21.43%(45/210)和9.05%(19/210)。10株EV71病毒VP1区核酸序列与JX509922、JX509924、JX509926、JX509927、 JX509928和 JX509929的同源性最高为95.7%~98.0%,且均属于EV71中 C4a亚型。 结论 EV71和Cox A16是杭州市儿童手足口病的主要病原体。因此加强EV71和Cox A16的监测特别是EV71的检测,有助于更好地预防和控制手足口病。     

2007—2017年中国甲型H3N2流感病毒HA基因特征分析

摘要：目的：回顾性分析2007—2017年我国人感染季节性甲型H3N2流感病毒血凝素（hemagglutinin, HA）的分子特征,为我国甲型H3N2流感病毒的防控和疫苗的研发提供科学依据。 方法：从全球共享禽流感数据库（the global initiative on sharing avian influenza data, GISAID）中下载中国2007—2017年人感染季节性甲型流感病毒H3N2亚型毒株HA基因序列,利用MEGA7.0生物学信息软件分析其HA的分子特征。 结果：2007—2017年,中国甲型流感病毒H3N2亚型共1 991例,总体上病毒株数呈逐渐递增趋势。HA序列分析表明,甲型H3N2流感病毒的亚型存在多样性且多种亚型共存,3C.2a.1系的病毒株自2010年起逐年增多,2016年起成为最主要的流行优势株。1系、2系、3A系、3B系、3C.1系、3C.2系、3C.2a系、3C.2a.1系、3C.3系、3C.3a系和3C.3b系的同源性分别为94.0%～100.0%、96.7%～100.0%、94.3%～100.0%、94.9%～100.0%、94.6%～100.0%、95.4%～100.0%、95.1%～100.0%、93.3%～100.0%、97.5%～100.0%、95.3%～100.0%和94.6%～100.0%。HA蛋白关键位点N121K、G/R142K出现变异,268株发生N121K突变且主要来源于2017年的毒株,358株发生G/R142K突变且主要来源于2016年和2017年的毒株。 结论：甲型H3N2流感病毒的亚型存在多样性,多种亚型共存且不同年份间的优势流行株存在差异,这些将有助于疫苗的研发和疾病的防控。     

人感染高致病性H5N6禽流感病毒的分子生物学特征

目的分析2014-2015年3例新型人感染高致病性禽流感(HPAI)H5N6毒株的血凝素(HA)与神经氨酸酶(NA)基因序列,探讨该病毒的遗传变异及分子生物学特征。方法收集Gen Bank、全球共享禽流感数据倡议组织(GISAID)及浙江大学传染病诊治国家重点实验室提供的H5N6病毒基因序列,利用生物信息软件MEGA6.0及Net Nglyc服务器对基因序列进行遗传进化和分子变异特征分析。结果 3例感染HPAI-H5N6患者毒株的HA与NA氨基酸序列的同源性分别为96.5%~98.7%和90.1%~98.2%;HA氨基酸序列比对分析发现A/Guangzhou/39715/2014(H5N6)和A/Sichuan/26221/2014(H5N6)与A/duck/Eastern China/1111/2011(H5N2)同源性最近,分别为97.7%和98.5%;A/Yunnan/0127/2015(H5N6)与A/muscovy duck/Vietnam/LBM631/2014(H5N1)同源性最近(97.2%);NA氨基酸序列比对分析发现A/Guangzhou/39715/2014(H5N6)和A/Yunnan/0127/2015(H5N6)与A/swine/Guangdong/K6/2010(H6N6)同源性最近,分别为97.2%和97.6%,A/Sichuan/26221/2014(H5N6)与A/duck/Guangdong/S3073/2010(H6N6)同源性最近(97.4%);进化树分析显示3例患者毒株处于2个不同的分支;HA基因包含有S137A、T160A等突变,糖基化分析显示有6~7个N-糖基化位点。结论新型人感染HPAI-H5N6病毒是一种重组病毒,其HA基因来源于亚洲禽类H5亚型,NA基因来源于亚洲禽类H6N6;HA基因位点突变及N-糖基化改变可能有助于增强对人类的感染。     

免疫性血小板减少症患者外周血中滤泡辅助性T细胞和IL-21的水平及临床意义

目的探讨滤泡辅助性T细胞(Tfh细胞)和IL-21在免疫性血小板减少症(ITP)中的作用。方法采集15例ITP患者及20例健康对照者外周血,用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中CXCR5+CD4+Tfh细胞的百分率,ELISA法检测血清IL-21水平;用实时荧光定量PCR检测PBMC中IL-21 mRNA的表达。结果 ITP组PBMC中CXCR5+CD4+Tfh细胞比例(17.55±1.015)%显著高于健康人对照组(10.19±0.343)%,差异有统计学意义(t=7.657,P0.01);ITP组血清中IL-21水平(100.7±3.71)pg/mL显著高于健康人对照组(64.6±0.81)pg/mL,差异有统计学意义(t=10.84,P0.01),且两者之间存在明显相关性(r=0.689 3,P0.01)。ITP患者IL-21 mRNA的相对表达量4.319±0.767明显高于健康人对照组1.125±0.052,差异有统计学意义(t=4.813,P0.01)。结论 ITP患者外周血Tfh细胞比例、IL-21水平及IL-21 mRNA表达均增高,可能在ITP的发病机制中发挥重要作用。     

2013~2014年杭州地区手足口病柯萨奇病毒A6型和A10型VP1基因特征分析

目的了解2013~2014年杭州地区手足口病病原谱的分布,并对其病原基因特征进行分析。方法采集2013年3月至2014年4月手足口病患儿标本1 340例,提取病毒核酸,通过逆转录和PCR扩增肠道病毒VP1序列并测序,经Blast比对确定病毒基因型。对柯萨奇病毒A6型(CA-A6)和A10型(CA-A10)VP1全长序列进行同源性比对分析,并构建系统进化树。结果1 340例手足口病患儿标本中,肠道病毒检出阳性率为81.43%(1 090/1 340)。其中,CV-A6阳性率为41.04%,取代EV-71(14.48%)成为杭州地区检出阳性率最高的肠道病毒;CV-A10检出率(8.51%)也高于CV-A16(3.81%),列于第三位。同源性比对及系统进化分析显示,2013~2014年的25株CV-A6病毒核苷酸同源性为89.0%~99.7%,主要分布于G、H基因亚型;15株CV-A10病毒核苷酸同源性为95.3%~99.9%,分布于F、G基因亚型。结论 2013~2014年杭州地区儿童手足口病的主要病原体发生重大变化,CV-A6病毒成为最主要病原,CV-A10病毒也存在潜在威胁,需加强对其他肠道病毒的持续监测和分子特征分析。     

2011~2013年杭州市手足口病病原谱流行特征及柯萨奇病毒A16型VP1区基因变异研究

目的了解杭州市手足口病病原谱流行特征及柯萨奇病毒A16型(CA16)分离株的VP1基因变迁规律。方法采集杭州市2011~2013年手足口病患者的2 197份临床标本,用通用引物进行肠道病毒实时荧光定量RT-PCR检测,对阳性标本进行分型,对部分CA16感染阳性重症患者标本测定VP1基因序列并进行同源性比对和系统进化树分析。结果杭州地区肠道病毒通用型核酸检出率为56.0%(1 317/2 197),肠道病毒71(EV71)、CA16和其他肠道病毒的检出率分别为24.1%(530/2 197)、13.9%(306/2 197)和22.8%(501/2 197)。在咽拭子和粪便标本中EV71检出率均最高,分别为23.9%(301/1 258)和23.6%(148/627),而在疱疹液标本中其他型肠道病毒检出率最高,为32.6%(76/233),脑脊液标本中无CA16检出。咽拭子标本和粪便标本在发病初期的检出率较高,发病后第5天和第6天后检出率低于发病初期检出率,而脑脊液和疱疹液不同病程阶段的检出率无统计学意义。9株CA16分离株VP1基因的核苷酸同源性为90.8%~99.7%,分属于B1b亚型和B1a亚型。结论 2011~2013年杭州地区手足口病患者主要病原体以EV71和CA16为主,样本类型和采样时间是影响肠道病毒检出率的重要原因。杭州地区CA16毒株VP1区基因的变异程度较低,需进一步加强开展手足口病的监测。     

自由体位联合无创分娩减痛对初产妇疼痛、分娩恐惧、妊娠结局及盆底肌功能的影响

目的：研究自由体位联合无创分娩减痛对初产妇疼痛、分娩恐惧、妊娠结局及盆底肌功能的影响。方法：将2021年6月-2022年6月本院产前检查并分娩的100例初产妇，随机数表法分为观察组和对照组各50例，两组均给予常规围生期干预和无创分娩减痛，观察组采用自由体位分娩。比较两组产程时间(第一产程、第二产程、第三产程)、产时和产后疼痛程度[视觉模拟评分(VAS)]、入组时和分娩时分娩恐惧及控制程度[分娩恐惧量表(CAQ)、分娩控制量表]、妊娠结局、产前和产后6周盆底肌功能[阴道静息压力(VRP)、盆底肌力量、盆底肌耐力]。结果：观察组第一产程时间(415.4±73.3 min)低于对照组(461.3±82.8 min)(P<0.05);两组第二产程、第三产程无差异，产时和产后VAS评分无差异(均P>0.05);分娩时，两组CAQ水平均较入组时下降且观察组低于对照组，两组分娩控制感评分均较入组时上升且观察组高于对照组(均P<0.05);两组分娩方式及新生儿5min Apgar评分无差异(P>0.05);产后6周，两组VRP、盆底肌力量、盆底肌耐力均较产前下降，但观察组均高于...     

多重荧光定量RT-PCR检测高致病性H5N6禽流感病毒

目的建立一种快速检测流感病毒A型(FluA)及高致病性禽流感(HPAI)H5N6病毒感染的荧光定量RT-PCR法。方法以人细胞核糖核酸酶P(RP)基因作为临床样本的内参基因,用Primer Express 3.0软件设计PCR特异性引物和探针,建立一种检测FluA及HPAI-H5N6病毒的一步法多重荧光定量RT-PCR方法,评估其灵敏度、特异性,并与上海之江公司提供的试剂及测序法进行比较。结果建立的多重荧光定量RT-PCR法检测FluA、H5、N6及RP质粒标准品的灵敏度均达102copies/m L。各对引物和相应探针仅检测出相应的病毒,在这些病毒和常见病原分析中未发现存在交叉反应,特异性达100%。用该法检测135例临床标本,结果显示FluA为23例,未发现HPAI-H5N6病毒的感染者;与上海之江公司提供的试剂的检测结果及基因测序结果一致。结论建立的一步法多重荧光定量RT-PCR法可用于FluA及HPAI-H5N6病毒感染患者的早期诊断。