hGITRaa1-165-IgG1Fc真核表达质粒的构建及其表达

目的:构建含有人糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)胞外段基因的真核表达质粒hGITRaa1-165-IgG1Fc-peDNA3.1(+),检测hGITRaa1-165-IgGIFc融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达.方法:以pGEMT-GITR质粒为模板,通过PCR扩增获得人GITR胞外段的基因hGITRaa1-165,将该目的基因连接至IsGlFc-pcDNA3.1(+)质粒,构建hGITRaa1-165-lgG1Fc-pcDNA3.1(+)真核表达质粒.将该重组质粒采用脂质体法转染COS-7细胞,通过SDS-PAGE和蛋白质印迹法检测hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达.结果:成功构建真核表达质粒hGI-TRaa1-165-IgG1Fc-pcDNA3.1(+),并在其转染的COS-7细胞培养上清中检测到hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白的表达.结论:成功表达hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白,为进一步研究GITR的生物学功能奠定了基础.     

麻疹患儿外周血中白细胞介素-21水平检测及其临床意义

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学生营养餐对改善学生营养状况的效果观察

为了解长春市学生营养餐对改善学生营养状况的效果,保障学生营养餐加工、制作的卫生安全,提高营养水平,在长春市朝阳区一所小学进行为期一年的营养餐效果观察.通过观察生长发育指标及学生营养不良患病情况,评价学生营养餐实施的效果.     

安徽省界首市农村婴儿喂养现况及其与生长发育的关系

目的:了解安徽省界首市农村地区婴儿的营养状况,进一步探讨不同喂养方式与婴儿生长发育的关系。方法:以安徽省界首市农村地区所有婴儿作为研究对象进行普查。制定统一调查表,现场调查由乡村或社区医生承担,由课题负责人对调查员进行统一培训。调查员对婴儿的身高与体重进行测量,并对婴儿的监护人进行询问,了解婴儿一般情况、母乳喂养情况以及监护人自身的情况,逐一填写调查表。结果:有效调查1490人,男921人,女569人。其中母乳喂养532人,占35.7%;混合喂养748人,占50.2%;人工喂养210人,占14.1%。不同性别间的喂养方式差别无显著性,男婴的WAZ值为0.9786±0.0425,HAZ值为0.3316±0.04962,Kaup指数为18.4856±0.09425;女婴的WAZ值为1.1515±0.05293,HAZ值为0.4968±0.06044,Kaup指数为17.9830±0.1219,不同性别间这3个指数的差别有显著性。母乳喂养和混合喂养组婴儿的WAZ、HAZ值高于人工喂养组。结论:界首市农村地区的母乳喂养率较低,母乳喂养与混合喂养组婴儿的生长发育好于人工喂养组。     

早期胰腺导管腺癌相关肿瘤标志物的筛选及临床意义

目的检索并分析可用于早期胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)诊断的肿瘤标志物。方法从癌症基因图谱计划(TCGA)数据库中检索出PDAC相关的17种候选肿瘤标志物;ELISA法对75例早期PDAC患者、25例中晚期PDAC患者、30例良性胰腺囊肿患者、30例慢性胰腺炎以及40例健康人对照血清标本中这17种候选肿瘤标志物进行检测,筛选出7种肿瘤标志物(IGFBP2、LRG1、CA19-9、REG3A、COL18A1、TIMP1和TNFRSF1A),并进一步筛选出在早期及中晚期PDAC患者血清中差异表达的3种肿瘤标志物(CA19-9、LRG1、TIMP1);采用ROC曲线和二元Logistic回归分析这3种肿瘤标志物对早期PDAC的诊断效能。结果 ELISA法检测结果表明,7种肿瘤标志物(IGFBP2、LRG1、CA19-9、REG3A、COL18A1、TIMP1和TNFRSF1A)在早期和中晚期PDAC患者血清中的含量均显著高于相关疾病对照及健康人对照组(P均0.05);进一步筛选结果证实,TIMP1、LRG1和CA19-9在早期、中晚期PDAC患者中的表达差异均有统计学意义(P均0.05);三者联合检测诊断早期PDAC的ROC曲线下面积(AUC~(ROC))为0.950,敏感性为91.4%,特异性为82.2%,准确性为91.3%,均显著高于单项检测及两两联合检测。结论 TIMP1、LRG1和CA19-9三者联合检测可显著提高早期PDAC的检出率,可用于早期PDAC的诊断。     

五重荧光定量RT-PCR法检测甲型流感病毒

目的建立一种五重荧光定量RT-PCR检测并鉴别流感病毒A(Flu A)及血凝素H3、H5、H7基因亚型的方法。方法以人细胞核糖核酸酶P(RNase P)基因为内参照,用Primer Express 3.0软件设计PCR特异性引物和探针。构建质粒标准品用于分析该方法的灵敏度和重复性,利用不同来源的呼吸道病毒样本进行特异性分析。结果该法检测Flu A、H3、H5、H7以及RNase P质粒标准品的灵敏度均达102copies/m L,特异性达100%,各对引物和探针仅检测出相应的病毒,未有交叉反应,变异系数(CV)≤1.99%。结论建立的五重荧光定量RT-PCR法灵敏度、特异性高,重复性好,可用于检测出多种甲型流感亚型,对甲型流感病毒不同亚型早期诊断具有一定的价值。     

细胞抑制性受体PD-1及LAG-3在慢性乙型肝炎患者CD4+ T细胞表面的表达及其意义

目的探讨慢性乙型肝炎患者(CHB)外周血CD4~+T淋巴细胞抑制性受体程序性死亡分子-1(PD-1)及淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)的表达水平及其与疗效的关系。方法采用流式细胞术分别检测71例CHB初治患者和40例健康人外周血CD4~+T淋巴细胞PD-1及LAG-3的表达水平,同时在治疗前(T1)、治疗后24周(T2)及治疗后52周(T3)随访接受干扰素抗病毒治疗的CHB患者17例。采用实时荧光定量PCR技术检测血清HBV DNA水平,化学发光微粒子免疫分析技术定量测定血清HBV标志物,速率法检测ALT水平。结果与健康对照组相比,71例CHB患者CD4~+T细胞可检测到高水平PD-1及LAG-3表达,两组之间差异有统计学意义(P0.01);HBeAg(~+)组PD-1及LAG-3表达水平明显高于HBeAg(-)组,两者间差异有统计学意义(P0.05);有效抗病毒治疗患者PD-1及LAG-3水平随着DNA及ALT水平的下降而明显下降,与治疗前相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论有效的抗病毒治疗可促使CHB外周血CD4~+T淋巴细胞功能恢复,可能为CHB的治疗及疗效监测提供了依据。     

血清miRNAs在类风湿关节炎患者中的表达及临床意义

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者血清miRNAs(miR-146a-5p、miR-155-5p和miR-124a-3p)的表达水平及其临床意义。方法收集2016年10月至2018年10月在我院门诊就诊的39例RA患者临床资料、全血及血清样本。全血样本用于检测血沉(ESR),血清样本用于检测类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)和miRNAs核酸。采用SYBR Green实时荧光定量PCR检测RA患者血清miR-146a-5p,miR-155-5p和miR-124a-3p的表达水平。结果 RA患者治疗前血清miR-146a-5p(1.742±1.058)表达水平显著高于HC组(1.045±0.772),且与DAS28评分(r=0.836 5,P=0.004 5)、ESR值(r=0.437 2,P=0.032 5)和RF含量(r=0.733 6,P=0.013 7)呈正相关;而miR-155-5p(U=42.00,P=0.032 9)和miR-124a-3p(U=44.5,P=0.044 5)表达水平显著低于HC组,且miR-155-5p表达水平与RF含量呈负相关(r=-0.445 3,P=0.031 6),miR-124a-3p表达水平与DAS28评分(r=-0.538 7,P=0.025 8)和RF含量(r=-0.436 5,P=0.046 3)呈负相关;RA患者治疗后血清miR-146a-5p表达水平较治疗前显著下降(U=60.00,P=0.003 8),miR-155-5p(U=64.00,P=0.005 9)和miR-124a-3p(U=85.00,P=0.042 2)表达水平较治疗前显著升高。结论 RA患者血清miR-146a-5p、miR-155-5p和miR-124a-3p的表达水平异常,对RA患者的诊断具有潜在的临床应用价值。     

女性性工作者宫颈人乳头状瘤病毒感染特征分析

人乳头状瘤病毒（humanpa pillomavirus，HPV）感染是宫颈癌和癌前病变的主要致病因子。目前已经分离出100多种HPV亚型，其中感染生殖道上皮细胞的有40余种。根据致病力的不同，HPV被分为高危型和低危型。不同亚型的HPV感染其致病性不同，其中高危型HPV持续感染与宫颈癌的发生最为密切，是导致宫颈癌发生的主要因素心。我国女性性工作者HPV感染特征的评估较为困难。本研究通过对浙江省湖州地区女性性工作者和普通人群的宫颈HPV感染状态调查，分析本地区女性性工作者和普通人群HPV感染特征。