结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6对小鼠巨噬细胞凋亡的诱导作用

【目的】研究结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）分泌蛋白ESAT-6（early secreted antigenic target of 6 kD）对小鼠巨噬细胞凋亡的影响及机理。【方法】应用流式细胞仪分析稳定表达ESAT-6和经重组ESAT-6蛋白作用的小鼠RAW264.7细胞的凋亡;应用Caspase-3检测试剂盒检测caspase-3活性变化;进一步应用Western blotting分析稳转细胞系ESAT-6表达情况。【结果】RAW-EGFP-ESAT-6细胞系培养48 h后的凋亡率与caspase-3活性显著高于RAW264.7和RAW-EGFP细胞系（P〈0.05）;RAW-flag-ESAT-6细胞系培养48 h后的凋亡率与caspase-3活性显著高于RAW264.7和相应对照细胞系（P〈0.01）。10μg/ml重组ESAT-6可显著诱导RAW264.7细胞凋亡,而5μg/ml重组ESAT-6无明显诱导细胞凋亡效果。稳转细胞系RAW-flag-ESAT-6细胞内flag-ESAT-6浓度大约只有500 ng/ml。【结论】胞内低水平表达结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6可依赖caspase-3信号通路诱导小鼠RAW264.7细胞凋亡。     

卵巢癌细胞ER亚型和p160共激活因子表达及其与他莫西芬和雌激素敏感相关性

目的:分析比较4种常见的人上皮性卵巢癌细胞系(A2780、CAOV-3、SKOV-3和ES-2)雌激素受体(ER)亚型及p160共激活因子表达及其对他莫西芬(TAM)和雌激素敏感性的关系.方法:采用免疫印迹法和RT-PCR技术检测ERα、ERβ及p160共激活因子的表达,采用MTT试验测定卵巢癌细胞对TAM和17β-雌二醇(E2)的敏感性.结果:4种卵巢癌细胞均表达ERα,其中A2780细胞较低,CAOV-3和SKOV-L3细胞较高,ES-2细胞居中;ERβ的表达情况则与ERα恰好相反;3种p160共激活因子mRNA的表达水平均以A2780细胞为最低,而ES2、SKOV-3和CA-OV-3细胞则依次升高;4种卵巢癌细胞对TAM的敏感性不同,其中A2780细胞最敏感,CAOV-3、SKOV-3和ES-2细胞则有不同程度的耐药性.其耐药倍数分剐为4.98、3.75和2.66;除SKOV-3细胞外,E2对CAOV-3、ES-2和A2780细胞均有不同程度的促增殖作用,其强度依次降低.结论:卵巢癌细胞ERβ表达水平与其对TAM的敏感性呈正相关趋势;3种p160共激活因子表达水平与卵巢癌细胞对TAM的敏感性呈负相关趋势,与ERα而非ERβ的表达水平相一致.     

低功率微波对中性氧化电位水消毒口腔印模效果的影响

摘要 目的 研究低功率微波对中性氧化电位水消毒口腔印模材料效果的影响,为探求口腔印模有效的消毒方法提供实验参考。方法 采用载体定量杀菌试验方法,对微波与中性氧化电位水联合作用消毒口腔印模材料的效果进行观察。结果 以140 W低功率微波联合中性氧化电位水对大肠杆菌作用2 min,对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌作用3 min,杀灭对数值均＞3.00;对枯草杆菌黑色变种芽孢作用5 min,杀灭对数值＞3.00。中性氧化电位水单独浸泡3 min,对大肠杆菌杀灭对数值＞3.00,但对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌杀灭对数值则＜3.00。单独低功率微波照射作用3 min,对上述3种细菌杀灭对数值均＜3.00。结论 低功率微波对中性氧化电位水杀灭不同微生物均有显著增效作用,可用于口腔印模消毒。     

人IL-8正义和反义真核表达载体的构建与表达

目的:构建人IL- 8正义和反义真核表达载体.方法:RT-PCR扩增正义和反义IL- 8基因片段后, 将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+), 通过菌落PCR、双酶切及测序进行鉴定后, 采用脂质体法分别瞬时转染至人卵巢癌细胞系A2780和SKOV3细胞中, 并用RT-PCR和ELISA法检测细胞转染后IL- 8的表达水平.结果:经验证, 重组人IL- 8正义/反义真核表达载体构建正确.pcDNA3.1(+)-ssIL- 8转染A2780细胞后, 其IL- 8 mRNA及蛋白表达水平均显著增加;而pcDNA3.1(+)-asIL- 8转染SKOV3细胞后, 其IL- 8分泌水平降低.结论:成功构建了人IL- 8正义/反义真核表达质粒pcDNA3.1(+)-ssIL- 8/pcDNA3.1(+)-asIL- 8, 为后续研究IL- 8在卵巢癌及其他肿瘤中的作用打下基础.     

结核分枝杆菌ESX-1分泌蛋白对巨噬细胞调控作用

近年来结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculo-sis,MTB)多重耐药性(multi-drug resistance,MDR)的不断出现以及艾滋病人群对MTB易感性的增加,导致患结核病的人数迅速增加,死亡率也在不断上升,大有死灰复燃的趋势[1],这促使科研工作者加速了新疫苗研制和新药物的开发,而与之相关的就是对     

炭疽毒素受体CMG2胞外区的截短表达、纯化及鉴定分析

【目的】分析CMG2胞外区的分子结构与功能,探讨ATR与PA结合的活性位点及特征,为阐明炭疽毒素的致病机理提供依据。【方法】用pQE30表达质粒在大肠杆菌内表达长短不同的3个CMG2胞外区截短片段,经纯化后,用Western blotting和细胞保护性实验对3个重组蛋白进行分析。【结果】发现3个重组蛋白均可与485单抗结合,但均没有细胞保护活性。【结论】3个截短蛋白失去了与PA结合的能力,说明CMG2的187—217之间氨基酸残基对PA结合很重要,不可或缺。     

格尔德霉素对宫颈癌HeLa细胞中bcl-2表达的影响

目的:观察格尔德霉素(geldanamycin,GA)在体外对宫颈癌HeLa细胞抗凋亡基因bcl-2和mRNA转录、蛋白表达水平的影响。方法:分别给予宫颈癌HeLa细胞0,0.02,0.2,2,10μmol/L浓度GA处理24h,用annexin V方法检测细胞凋亡,半定量PCR检测bcl-2、Hsp90 mRNA转录水平,用10μmol/L的GA处理HeLa细胞3、12、24、48h后,Western blot检测bcl-2、Hsp90蛋白表达水平的变化。结果:宫颈癌HeLa细胞经不同浓度的GA作用24h,细胞凋亡指数呈剂量依赖性增加,bcl-2 mRNA表达呈剂量依赖性降低,bcl-2蛋白表达水平呈时间依赖性降低,处理组与对照组之间的差异有统计学意义;但GA对Hsp90 mRNA和蛋白表达水平无明显影响。结论:GA可抑制宫颈癌HeLa细胞抗凋亡基因bcl-2的转录和表达,促进凋亡。     

炭疽毒素受体单克隆抗体的制备、鉴定及结合位点分析

【目的】制备与鉴定针对两种炭疽毒素受体(anthrax toxin receptor,ATR)的特异性单克隆抗体,为建立ATR的检测方法、研究炭疽毒素的致病机理提供工具。【方法】以重组表达的两种ATR即毛细血管形态发生蛋白2(capkllary morphogenesis protein 2,CMG2)和肿瘤内皮标志8蛋白(tumor endothelial marker 8,TEM8)分别免疫小鼠,制备单克隆抗体,用ELISA、Western dot blotting及细胞保护性试验等方法对所制备的单克隆抗体进行鉴定和分析,并尝试应用上述单克隆抗体经双抗体夹心ELISA、Western blotting和IFA对ATR进行检测。【结果】获得针对CMG2的单克隆抗体4B5、4G3;针对TEM8的单克隆抗体2D6、4B9;以及可同时结合CMG2和TEM8的单克隆抗体2G4,其中4B5具有一定的细胞保护活性,这些单克隆抗体可用于ATR的特异性检测。【结论】本研究所制备的单克隆抗体可经ELISA、Western blotting和IFA用于ATR体内外检测,从而为探讨炭疽毒素的致病机理提供有效的研究手段。