猪辅助性带胰头及十二指肠肝肠联合移植的研究

目的介绍猪辅助性带胰头及十二指肠的肝肠联合移植(LSBT)模型技术及其免疫抑制治疗。方法40头杂交长白猪分为两组,每组20头,组内进行辅助性带胰头及十二指肠的LSBT10次。其中A组未用免疫抑制剂治疗,B组采用环孢素A和甲基强的松龙治疗。结果A组动物术后成活时间为(10.33±1.93)d(7~25d),B组全部动物成活超过30d。在没有应用体外转流的情况下,可以耐受血液动力学的波动,血液动力学指标(B组)可以在血流再通后2h恢复正常。B组猪术后血液、尿液和腹腔引流液中的淀粉酶一过性升高,但在1周后回落到术前水平,活检没有发现严重胰腺炎。结论猪辅助性带胰头和十二指肠的LSBT是一种可行的、安全的移植模型,这一模型可以简化传统肝肠移植的技术,应用环孢素A和甲强龙可以有效的抑制猪肝肠移植后急性排斥反应。     

熊胆对肝星状细胞免疫学特性影响的研究

目的:探讨熊胆是否能够抑制肝星状细胞的免疫抑制活性,增强免疫反应。方法:用熊胆水溶液给C57BL/6(B6;H2b)小鼠灌胃4周,通过Percoll密度梯度离心法从小鼠肝脏分离出肝星状细胞,用结蛋白和α-平滑肌动蛋白(α-SMA)免疫组化法检测HSCs表达,用流式细胞仪检测肝星状细胞表面分子,用Brdu细胞增殖检测试剂盒检测T细胞增殖,以及用蛋白芯片检测肝星状细胞分泌的细胞因子。结果:熊胆能够减少HSCs的表达,下调肝星状细胞表面分子、影响肝星状细胞对多种细胞因子的分泌、逆转HSCs对T细胞增值反应的抑制作用。结论:熊胆能够抑制肝星状细胞的免疫抑制活性,增强免疫反应。     

胰周血管置管持续药物灌注治疗急性重症胰腺炎

目的 探讨胰周血管置管持续药物灌注治疗急性重症胰腺炎的方法和应用价值。方法 设计从胃网膜右动脉插入药泵到胃十二指肠动脉并在术后经药泵持续注射生长抑素类物质和抗生素治疗8例急性重症胰腺炎患者。结果 平均住院时间32．5天，Ranson评分符合条数从9．8条降至3．4条，APACHE-Ⅱ评分从11．2降至4．6。2例病人(2／8)CT随访中发现其胰周囊肿明显缩小。完全治愈7例，全组无再次手术病例，无手术期死亡，1例术后41天死于肝功能衰竭。结论 手术中置管并在术后持续药物灌注是治疗急性重症胰腺炎的一种有效方法，它能有效地提高胰腺局部的血药浓度，选择性强，能有效减少胰腺炎的并发症和死亡率，是一种值得进一步探讨和推荐的治疗方法。     

肝肠联合移植的现状

长期应用全胃肠外营养支持 (TPN)的短肠综合征患者在出现肝功能损害、肝功能衰竭时要求作肝肠联合移植。肝肠联合移植是一种新型的难度极大的移植术 ,在国内和亚洲地区还未见报道。作者就肝肠联合移植的历史、适应证、免疫学特点、外科技术进展、围手术期的处理和并发症等作以下综述 ,为临床肝肠移植的开展提供指导     

ω-3多不饱和脂肪酸肠外营养对老年重症肺炎患者炎症反应和免疫功能的影响

目的观察含有不同ω-3／ω-6比例脂肪酸肠外营养对老年重症肺炎患者机体炎症反应和免疫功能的作用。方法将40例老年重症肺炎患者随机分为研究组和对照组,每组20例。两组在常规治疗基础上均使用等氮、等热量肠外营养,共5天,其中研究组添加ω-3多不饱和脂肪酸。分别在治疗前和治疗第6天检测血C反应蛋白（CRP）、淋巴细胞免疫表型,并观察两组患者的抗生素应用天数及种类。结果治疗后两组患者CRP水平均下降,CD3＋、CD4＋均升高,但研究组变化幅度更大（P〈0．05）;治疗后两组患者的CD8＋均下降,但两组间下降幅度比较无显著性差异;CD4＋／CD8＋仅在研究组升高。研究组抗生素应用天数及种类均少于对照组。结论添加ω-3多不饱和脂肪酸的肠外营养能降低老年重症肺炎患者机体炎症反应,提高免疫功能,缩短病程。     

人腹膜间皮细胞的改良分离及其鉴定

背景:腹膜间皮细胞作为腹膜的重要组分,分泌多种细胞因子,在参与抗炎、免疫调节、腹膜纤维化等方面起着重要作用,如何获得优质、均一的腹膜间皮细胞成为解决这些问题的关键。目的:拟建立改良的人腹膜间皮细胞消化培养法。方法:0.1%胶原酶Ⅰ消化腹部大网膜组织,去除红细胞后用含体积分数为10%胎牛血清的1640培养基培养。在培养过程中以倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8观察培养液对间皮细胞生长的促进作用,透射电子显微镜观察细胞超微结构,激光共聚焦免疫荧光鉴定细胞。结果与结论:分离培养的细胞为多角形,汇合时呈铺路石样排列,培养细胞的纯度达90%以上;生长良好,迅速,可传代至四五代。透射电子显微镜下见细胞表面大量的微绒毛,免疫荧光显示角蛋白、波形蛋白抗原阳性,白细胞CD45、第Ⅷ因子相关抗原阴性;所有被鉴定特征均符合间皮细胞的特点。结果提示胶原酶Ⅰ消化法是一种简单、高效、重复性高的分离腹膜间皮细胞的方法。     

体内外人脂肪间充质干细胞向肝样细胞分化的实验研究

目的 分离、培养人脂肪间充质干细胞(hADSCs),研究其在体内外向类肝样细胞转化的能力.方法 采用Ⅰ型胶原酶消化皮下脂肪,贴壁分选去除造血细胞的方法获得较纯的干细胞.通过对形态观察、表面分子鉴定、透射电镜内部结构扫描以及成脂、成骨定向诱导对脂肪间充质干细胞进行鉴定.用EGF、FGF、OSM、HGF、TSA细胞因子体外诱导hADSCs向肝样细胞分化.尾静脉输注hADSCs至急性肝损伤裸鼠,观察hADSCs在裸鼠肝脏内定植、向肝样细胞分化情况,以及hADSCs对裸鼠肝损伤的保护作用.结果 分离获得的细胞呈长梭形贴壁生长,低表达CD34、CD45,高表达CD73、CD90、CD105,具有多向分化潜能.诱导细胞表现出肝样细胞形态,表达AFP、alb,并且和肝细胞一样具有吸脂性.体内诱导:移植细胞在裸鼠体内生存、分布,并且细胞表达人alb,细胞体积较裸鼠肝脏细胞大,形态不均一,与人肝脏细胞形态有差异.同时研究发现hADSCs可改善急性肝损伤裸鼠肝功能,降低转氨酶.结论 人脂肪间充质干细胞可在体内外向肝样细胞分化,分化的细胞具有肝细胞样生物学性状.hADSCs对裸鼠急性肝损伤具有一定的治疗作用.

Abstract：

Objective To isolate and culture human adipose derived mesenchynal stem cells (hADSCs) and study the potential of hADSCs to differentiate into hepatocyte-like cells. Methods To ensure the removal of contaminating hematopoietic cells, hADSCs were selected based on plastic adherence. Cell surface antigen was confirmed by flow cytometry; ultramicrostructure was detected by transmission electron microscopy; adipogenic and osteogenic differentiation of hADSCs was analyzed by oil Red O staining and yon Kossa staining. hADSCs were exposed to differentiation medium containing EGF,FGF,OSM, HGF,TSA in vitro. 10% CCl4 (100 μ1/20 g body weight )was injected into immune-deficient BALB/c-nu mice and hADSCs (5 × 105 cells) were simultaneously administrated from the tail vein. Blood samples were collected and concentration of aminotransferase and direct bilirubin were detected. Administration without hADSCs was used as a control. One month later, we sacrificed the mice and liver sections were examined by histochemical immunofluorescence with human ALB specific antibodies. Results hADSCs exhibited fibroblast-like morphology, and expressed CD73, CD90,CD105, and were lacking of CD34 and CD45. Adipogenic and osteogenic differentiation showed that hADSCs have the capacity of multidifferentiation. The differentiated cells showed hepatocyte-like cell morphologies and hepatocyte-specific markers including albumin (alb) and α-fetoprotein (AFP). The bioactivity assays revealed that these hepatocyte-like cells could uptake low-density lipoprotein (LDL).Histochemical immunofluorescence showed that hADSCs were incorporated into injured livers. Some human alb-positive cells were found in liver sections after implantation of undifferentiated hADSCs. Transaminase activity in the experimental group was lower than in the control group. Conclution hADSCs can differentiated into functional hepatocyte-like cells and can relieve CCl4 induced BALB/c-nu acute liver injury.     

超声乳化吸引刀联合超声刀在腹腔镜肝肿瘤切除术中的应用

腹腔镜肝切除术难度较高.我院近一年来采用超声乳化吸引刀(cavitron ultrasonic surgical aspi-rator,CUSA)结合超声刀进行腹腔镜下肝脏切除术18例,现报告如下.临床资料1.一般情况:本组18例中男12例,女6例,年龄28～81(平均56)岁.术前B超、CT、MR等检查诊断原发性肝癌10例(均为单发结节,无转移及淋巴结肿大,TNM分期为T1～T3,N0M0);肝血管瘤5例;局灶性结节性增生3例.     

BVT.2733影响饮食诱导肥胖小鼠中Visfatin表达的研究

目的:构建高脂饮食诱导肥胖小鼠模型,观察BVT.2733在改善胰岛素抵抗中的作用及对Visfatin表达的影响?方法:构建高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型,分为肥胖对照组和BVT.2733治疗组,肥胖对照组给予安慰剂?治疗组给予BVT.2733灌胃2周,同时设正常饮食的小鼠为正常对照组?放射免疫法测小鼠空腹胰岛素水平,生化法检测血糖,实时定量RT-PCR 检测内脏脂肪组织Visfatin的mRNA表达?观察各组小鼠脂肪组织的形态学变化?结果:与正常对照组相比,肥胖对照组小鼠脂肪细胞明显增大,体重增加,空腹血糖?血清胰岛素水平升高(P < 0.05)?与肥胖对照组相比,BVT.2733治疗组小鼠脂肪细胞体积减小,空腹血清胰岛素水平明显下降(P < 0.01),脂肪组织Visfatin mRNA表达显著降低(P < 0.05)?结论:BVT.2733能够降低体重,减少脂肪组织,并且降低Visfatin的表达水平?     

DNA甲基化转移酶1/3b与肝癌临床病理特征和预后相关性研究

目的探讨DNA甲基化转移酶1/3b(DNMT1/3b)表达异常与肝癌临床病理特征和患者术后生存之间的相关性。 方法采用免疫组织化学技术检测89例手术切除肝癌组织中DNMT1和DNMT3b的蛋白表达情况,结合临床病理及无瘤生存期和总生存期,分析DNMT1/3b与临床病理参数、预后的相关性,并通过高通量基因芯片技术筛选肝癌相关DNMT1和DNMT3b的靶基因。 结果89例肝癌组织中DNMT1和DNMT3b皆为阳性63例,皆为阴性5例,单一阳性的分别为9例和12例。DNMT1/3b在肝癌组织中高表达与患者血清AFP(χ²=12.903,P=0.005)、乙型肝炎(χ²=9.535,P=0.023)、卫星灶(χ²=9.574,P=0.023)和肿瘤复发、转移及生存期有关,而与性别、肿瘤大小、肝硬化和肿瘤分化无关;Kaplan-Meier分析显示DNMT1/3b阳性组患者生存时间较阴性组短,差异有统计学意义(P<0.05)。高通量基因组甲基化芯片技术筛选出肝癌细胞中受DNMT1和DNMT3b调控的基因2 000多个,其中参与肿瘤侵袭转移的靶基因有112个。 结论DNMT1/3b在肝癌组织中高表达与患者血清AFP、乙型肝炎、卫星灶和肿瘤复发、转移等临床病理特征和生存期密切相关,并可能通过调控多方面肿瘤相关基因促进肝癌复发、转移等恶性表型。