体外条件下人骨髓间充质干细胞与NZBW F1鼠T淋巴细胞的免疫调节

背景：近年研究发现系统性红斑狼疮患者的间充质干细胞存在异常,自体造血干细胞移植治疗系统性红斑狼疮复发率高,有学者提出系统性红斑狼疮不仅是造血干细胞病,也是间质干细胞病。 目的：探讨人骨髓间充质干细胞在体外对NZBW F1鼠脾脏T淋巴细胞的免疫调节作用。 设计、时间及地点：细胞共培养体外实验,于2008-03/09在江苏大学附属医院中心实验室完成。 材料：健康人骨髓由江苏大学附属医院研究生自愿捐献。SPF级20周龄NZBW F1雌鼠9只,购自南京大学动物模式研究所。 方法：Percoll密度梯度离心法分离培养人骨髓间充质干细胞,取P3代细胞用于实验。20周龄NZBW F1小鼠适应性饲养至24周龄时,无菌分离脾淋巴细胞,在刀豆球蛋白A刺激下,将T淋巴细胞与骨髓间充质干细胞分别以不同比例(1∶0.01,1∶0.02,1∶0.1)共培养72 h,并设立对照组。 主要观察指标：MTT法检测T淋巴细胞增殖,流式细胞仪检测T淋巴细胞凋亡和CD69,CD28表达,实时荧光定量PCR检测T淋巴细胞白细胞介素10、干扰素γ mRNA水平。 结果：与对照组比较,在体外人骨髓间充质干细胞能抑制NZBW F1鼠T淋巴细胞的增殖,且呈剂量依赖性(P < 0.05)。与对照组比较,T淋巴细胞与骨髓间充质干细胞比例为1∶0.02和1∶0.1时,骨髓间充质干细胞可抑制T淋巴细胞的凋亡,并促进T淋巴细胞干扰素γ mRNA表达,抑制白细胞介素10 mRNA表达;T淋巴细胞与骨髓间充质干细胞比例为1∶0.01时,T淋巴细胞凋亡情况和干扰素γ、白细胞介素10 mRNA表达无明显差异(P > 0.05)。 结论：人骨髓间充质干细胞体外在一定比例下可能通过抑制NZBW F1鼠T淋巴细胞的增殖和凋亡、干预Th1/Th2细胞因子mRNA表达,继而下调T淋巴细胞的免疫功能。     

丰城鸡血藤H-103树脂提纯物抗MCF-7和A549的作用

目的评价丰城鸡血藤H-103树脂提纯物体外对人乳腺癌MCF-7细胞株和人肺腺癌A549细胞株抗肿瘤作用。方法采用MTT法检测不同浓度丰城鸡血藤H-103树脂提纯物对人乳腺癌MC-7细胞株和人肺腺癌A549细胞株生长的影响。结果2mg／ml丰城鸡血藤H-103树脂提纯物作用48h后，对两种肿瘤细胞的最大抑制率都大于50％，并且其抗瘤作用随着时间和剂量的增加而增强。结论丰城鸡血藤H-103树脂提纯物对MCF-7和A549在体外具有显著抑制作用。     

获得性凝血因子Ⅷ抑制物1例并文献复习

<正>获得性凝血因子Ⅷ抑制物,又叫做获得性血友病A(acquired haemophilia A,AH-A),极其罕见,该病多发生于非血友病健康人群,目前发病机制不明,主要见于自身免疫性疾病、恶性肿瘤、药物变态反应等。获得性凝血因子Ⅷ抑制物导致患者止血、凝血及纤维蛋白溶解等机制的缺陷或异常而     

硅酸三钙封闭牙本质小管的作用

背景：多项体外实验证实硅酸三钙不仅可以通过自固化过程与牙本质紧密结合,而且在生理环境下能诱导牙本质再矿化,有效阻塞牙本质小管。 目的：进一步验证硅酸三钙对牙本质小管的封闭作用。 方法：选择正畸患者拔除的第一前磨牙制作离体牙本质盘36块,分别经0.29 mol/L EDTA 内浸置2 min,6%柠檬酸蚀1 min 后冲洗,蒸馏水超声清洗20 min 3种方法预处理,模拟具有牙本质小管不同开放程度的牙本质敏感症。以上每组随机分为3个亚组,即硅酸三钙组、氟化钠对照组、空白对照组,前2组每天早晚分别用对应材料涂刷表面,2 min/次,空白对照组不处理,其余时间全部置于人工唾液37℃恒温箱中保存。14 d后通过扫描电镜观察各组处理前后牙本质形态,并计算开放牙本质小管直径和面积。 结果与结论：经不同预处理后牙本质小管都呈开放状态,但柠檬酸和EDTA预处理溶液较蒸馏水有更强的脱矿作用,牙本质小管更加清晰。各组经氟化钠或硅酸三钙涂擦后,牙本质小管口有不同程度沉积物,且开放牙本质小管面积及平均直径较空白对照组小（P〈0.05）;经硅酸三钙涂擦的牙本质小管几乎完全均质封闭,偶见有单个孤立开放的牙本质小管口,开放牙本质小管面积及平均直径都明显低于氟化钠对照组（P〈0.05）。证实硅酸三钙可有效封闭牙本质小管,且效果优于氟化钠;在治疗牙本质过敏时,如果先用EDTA或酸蚀剂处理,脱敏效果会更完善。     

2型糖尿病合并老年下肢动脉硬化闭塞症患者胱抑素C、同型半胱氨酸的水平及意义

下肢动脉硬化闭塞症（Peripheral atherosclerotic disease PAD）是糖尿病常见的大血管病变,是导致下肢截肢的主要原因,其发病率比非糖尿病者高20倍,并呈逐年上升趋势,70岁以上人群发病率达到15%-20%以上。因此早期发现、早期诊断、早期治疗及早期预防,可以有效的延缓老年2型糖尿病合并下肢动脉硬化闭塞症的进展。本文通过对老年2型糖尿病合并下肢动脉硬化闭塞组与无下肢动脉硬化闭塞症组的胱抑素C（CysC）及同型半胱氨酸（Hcy）的对比,旨在探讨更有效的临床观察指标。     

金边瑞香活性成分瑞香黄烷-Ⅰ,瑞香素对SMMC-7721和 MCF-7细胞作用的研究

目的 研究金边瑞香活性成分瑞香黄烷-Ⅰ(E002)、瑞香素(E003)抗肿瘤活性,为进一步研究抗肿瘤机制提供依据.方法 用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度E002、E003对SMMC-7721和MCF-7细胞的抑制率.结果 ①E002、E003浓度为250～1.95 μg/ml时,作用SMMC-7721细胞,两者的抑制率为:(86.9±2.2)%～(50.8±0.6)%. ②E002浓度为250～62.5 μg/ml时,作用MCF-7细胞,其抑制率为:(72.3±2.1)%～(52.48±1.65)%. ③E002对SMMC-7721和MCF-7细胞的IC50值分别为:(1.96±0.03)和(22.89±3.04) μg/ml;E003对SMMC-7721细胞的IC50值为:(1.23±0.11) μg/ml.结论 金边瑞香活性成分瑞香黄烷-Ⅰ对SMMC-7721、MCF-7细胞,瑞香素对SMMC-7721细胞的增殖均有显著抑制作用,且呈现良好的剂量依赖性.     

IL-15与IL-21细胞因子组合优化临床级人NK细胞培养体系

目的探讨IL-15、IL-21细胞因子组合建立的临床级人NK细胞培养体系对NK细胞增殖、免疫细胞表型和细胞毒作用的影响。方法分离9例健康志愿者外周血单个核细胞(PBMCs),根据以下3组进行扩增培养:(1)对照组(我科临床级人NK细胞培养体系),(2)IL-15组(对照组+IL-15),(3)IL-15/IL-21组(对照组+IL-15+IL-21)。台盼蓝拒染法计数细胞总数和活力;流式细胞术分析免疫细胞表型和NK细胞活化受体表达;乳酸脱氢酶释放法检测细胞毒活性。结果培养至14 d,IL-15/L-21组细胞总数明显升高,NK细胞增殖倍数达到(761.68±449.30)倍,明显高于IL-15组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-15/IL-21组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。3组培养物中CD3~-/CD56~+细胞百分率比较,IL-15/IL-21组和IL-15组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但IL-15/IL-21组和IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组中CD3~+/CD4~+细胞百分率均呈下降趋势,且IL-15/IL-21组和IL-15组明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但IL-15/IL-21组和IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组中总CD3~+细胞百分率比较,IL-15组明显低于对照组(P<0.05),但IL-15/IL-21组和IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。IL-15/IL-21组NKG2D活化受体表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但与IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组中CD3~+/CD56~+细胞百分率、CD3~+/CD8~+细胞百分率以及NKp46活化受体的表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。相同的效靶比,3组细胞的细胞毒作用比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论采用IL-15/IL-21组合优化人NK细胞培养体系,可以选择性地扩增NK细胞,提高培养物中NK细胞数量和细胞总数,以及活化受体NKG2D的表达水平,这将为优化临床级人NK细胞制备体系提供科学依据。     

骨髓源性间充质干细胞联合来氟米特对小鼠T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨骨髓源性间充质干细胞(BMSCs)在体外联合来氟米特(LEF)对小鼠T淋巴细胞的免疫调节作用.方法 直接贴壁筛选法分离培养小鼠BMSCs,流式细胞分析(FCM)鉴定BMSCs的纯度.用EZ-SepTMm Mouse 1X分离异体BALB/c小鼠的脾淋巴细胞,在刀豆球蛋白A(ConA)诱导的同时,先经LEF处理,洗去LEF后,脾淋巴细胞再和BMSCs共培养.分组:A组:脾淋巴细胞;B组:脾淋巴细胞+BMSCs;C组:LEF处理的脾淋巴细胞;D组:LEF处理的脾淋巴细胞+BMSCs.用四甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测各组T淋巴细胞的增殖情况,流式细胞术分析各组T淋巴细胞的活化及凋亡情况,定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组T淋巴细胞的白细胞介素(IL)-2、IL-10基因水平.结果 在体外,BM-SCs处理组(B组)T淋巴细胞的A570 nm值为0.578±0.042,LEF处理组(C组)A570 nm值为0.5024±0.040,两组A570 nm值均显著低于对照组(A组)A570 nm值为0.778±0.035(P<0.01).BMSCs联合LEF组(D组)A570 nm值为0.218±0.033,显著低于BMSCs处理组及LEF处理组(P<0.01). BMSCs联合LEF对CD3+CD69+、CD3+CD28+表达、IL-2基因表达均无明显影响.BMSCs单独或联合LEF组T淋巴细胞凋亡率分别为(2.29±0.32)%、(4.22±0.98)%,较A组T淋巴细胞凋亡率(8.08±1.20)%均明显下降.BMSCs处理组和LEF处理组T淋巴细胞IL-10基因相对表达分别为:0.098±0.039、0.054±0.022明显低于A组(IL-10基因相对表达为1.000)(P<0.01),MSCs联合LEF组IL-10基因相对表达为:0.023±0.015,显著低于BMSCs处理组及LEF处理组(P<0.01).结论 BMSCs联合LEF对小鼠T淋巴细胞有一定程度的协同免疫调节作用.     

类风湿关节炎患者外周血Th17细胞的检测及意义

目的 探讨Th17细胞在类风湿关节炎(RA)患者外周血中的水平及意义.方法 分离RA患者和健康者外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠阴选CD4~+T细胞,用或不用非特异性刺激剂(A-CD3、A-CD28),然后加佛波酯/离子霉素(PMA/Ion),经固定,透膜处理进行细胞内染色,流式细胞术(FCM)检测CD4~+T细胞内白细胞介素(IL)-17~+/干扰素(IFN)-γ~+、IL-17~+/IL-6~+水平.分组:①健康对照组;②RA病情稳定组;③RA病情活动组.结果 免疫磁珠阴选CD4~+T细胞纯度>90%.RA病情活动组IL-17表达水平(1.54±0.41)显著高于RA病情稳定组(0.70±0.21,P<0.01),二者又显著高于健康对照组(0.42±0.12,P<0.01).用A-CD3、A-CD28、IL-23刺激后,CD4~+T细胞IL-17胞内表达水平较无刺激组显著增加(P<0.05).CD4~+T细胞IFN-γ表达水平呈现与IL-17表达相似的特点,而RA患者与健康对照组IL-6表达水平差异无统计学意义.RA患者IL-17胞内表达水平与IFN-γ、IL-6无显著相关.结论 RA患者外周血CD4~+T细胞中存在异常增高的Th17细胞,且其水平与病情活动相关,有望作为判断RA患者病情活动的指标之一.     

姜黄素治疗炎症性肠病的研究进展

炎症性肠病(IBD)是一种病因不明的慢性非特异性肠道炎症性疾病,其发病与免疫系统功能紊乱密切相关。姜黄素是一种具有抗炎、抗纤维化、抗氧化、抗肿瘤作用的多酚类物质,近年研究表明其在IBD中通过免疫调节发挥明显抗炎作用。本文就姜黄素抗炎、抗纤维化的作用机制及其用于IBD治疗的研究进展作一综述。