HPV E6/E7 mRNA与YAP在宫颈癌中的表达与相关性研究

目的:研究宫颈病变中HPV E6/E7 mRNA与Yes相关蛋白（YAP）的表达情况及临床意义,探讨两者之间的相关性。方法: 应用支链DNA（b-DNA）技术检测36例正常宫颈组织（正常组）、45例宫颈上皮内瘤变(CIN) Ⅱ-Ⅲ级（CIN组）、43例宫颈癌（宫颈癌组）的宫颈脱落细胞标本中HPV E6/E7 mRNA的表达情况,免疫组化方法（IHC）检测上述各组患者宫颈组织石蜡包埋标本中YAP的表达情况。结果:HPV E6/E7 mRNA及YAP阳性表达率在正常组分别为16.67%、11.11%,在CIN组分别为82.22%、84.44%,在宫颈癌组分别为88.37%、90.70%,3组HPV E6/E7 mRNA及YAP阳性表达率均逐渐升高,且差异均具有统计学意义（P<0.05）。YAP在宫颈癌有淋巴结转移组中的表达明显高于无淋巴结转移组（P<0.05）,而与宫颈癌的临床分期、组织学分级及组织学类型无关（P>0.05)。HPV E6/E7 mRNA与YAP的表达呈正相关（r=0.383,P<0.05）。结论:HPV E6/E7 mRNA与YAP的检出率随病理级别的升高呈增强趋势,且两者具有相关性。因此,HPV E6/E7 mRNA与YAP的联合检查,可以提高宫颈病变的诊断率并能够预测癌前病变的进展。     

彩色多普勒超声、妊娠高血压和小于胎龄儿

使用装备有实时图像和脉冲波多普勒超声扫描仪,研究两组病人的螺旋动脉多普勒波形。组Ⅰ包括175例无合并症,孕龄从13～25周者,该组对每1例妊娠妇女测量一次螺旋动脉的多普勒血流波形,结果证实胎儿出生体重都适合其孕龄的第10和第90百分位数之间。组Ⅱ选择350例单胎孕妇,以前瞻性研究证实可能发生妊娠高血压综合征(PIH)或小于孕龄儿(SGA)。在孕13～19周和20～25周时,做了两次螺旋动脉扫描试验,以验证在图形的两个时间段中,哪一部分对预测PIH或SGA是最敏感的。出生后体重小于孕龄第10百分位数为有SGA,动脉收缩压>18.7kPa和/或舒张压>12kPa为PIH。     

重度妊高征胎盘组织病理学与形态计量学观察

为探讨妊高征胎盘床血管和胎盘绒毛的组织结构特点及其与妊高征发病机制的关系。本文应用图像分析系统对２９例重度妊高征（妊高征组）和２９例正常妊娠（正常组）的子宫胎盘床血管和胎盘绒毛进行了形态计量学检测。结果显示∶１妊高征组胎盘的重量、大小均显著低于正常组（Ｐ＜００５）。２妊高征组胎盘绒毛具有合体细胞结节、细胞滋养细胞、绒毛基底膜增厚和纤维素样坏死的绒毛数显著高于正常组（Ｐ＜００５），而具有血管合体细胞膜的绒毛数显著低于正常组（Ｐ＜００５）。３妊高征组胎盘的游离绒毛直径、周长和面积均比正常组显著减小（Ｐ＜００５）。４妊高征组子宫胎盘床螺旋动脉妊娠生理性改变缺乏，管壁增生肥厚、纤维素样坏死和动脉粥样硬化的发生率显著高于正常组（均Ｐ＜００５）。提示妊高征子宫胎盘床血管病变在妊高征发病中可能起重要作用，而胎盘绒毛的组织形态学变化是胎盘缺血、缺氧的结果     

Ang-2、Tie-2与ER-α在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:探讨血管生成素2(Ang-2)及其酪氨酸蛋白激酶受体2(Tie-2)和雌激素受体α(ER-α)在子宫内膜异位症(内异症)发病中的表达.方法:选择30例内异症患者的在位内膜作为内异症组,30例卵巢其他良性肿瘤患者的子宫内膜作为对照组,增殖期和分泌期各15例,应用免疫组织化学SP法检测Ang-2、Tie-2和ER-α在其中的表达.结果:Ang-2和Tie-2主要在子宫内膜的腺上皮表达,血管内皮和间质也有少许表达,但较腺上皮表达少,定位于细胞浆.ER-α在子宫内膜腺上皮和间质均有表达,定位于细胞核.内异症组的增殖期和分泌期内膜中Ang-2表达,分泌期时Tie-2的表达,增殖期ER-α的表达均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01).2组增殖期时Tie-2的表达,分泌期时ER-α的表达差别无统计学意义(P>0.05).Ang-2及Tie-2在2组中的表达均是分泌期高于增殖期,ER-α则是增殖期高于分泌期(P<0.05).结论:内异症在位内膜分泌期的Ang-2和Tie-2及增殖期ER-α高表达可能与内异症的发病有密切关系.     

乳腺浸润性导管癌微血管生成与转录因子Ets1表达之间的关系

目的：探讨乳腺导管上皮癌变过程中微血管的分布特点及转录因子Ets1和其下游蛋白MMP1对肿瘤血管生成的作用。方法：应用免疫组织化学SP法检测正常乳腺18例（NB组）、导管上皮普通性增生20例（UDH组）、非典型增生29例（ADH组）、导管原位癌15例（DCIS组）和浸润性导管癌70例（IDC组）中CD34标记的微血管密度（MVD）、转录因子Ets1和其下游蛋白MMP1的表达,并应用CMIAS计算机辅助病理图像分析系统对结果进行分析。结果：CD34标记的MVD随着导管上皮增生病变程度的加重依次增加,差别具有统计学意义（均P〈0．01）;转录因子Ets1和其下游蛋白MMP1在IDC组中的表达明显高于导管内增生性病变（均P〈0,01）,且两者的表达呈正相关（r=0．55,P〈0．01）;IDC组中CD。标记的MVD与Ets1和MMP1均有相关性（r分别为0．57和0．60,均P〈0．01）。结论：Ets1可能是调控乳腺癌血管生成的关键点。     

脐带血血清在脐静脉内皮细胞培养中的应用

目的通过观察以人脐带血血清为主体的培养体系对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外培养扩增的影响,探讨人脐带血血清替代动物血清用于培养HUVEC的可行性。方法将取来的脐带,分成25 cm的两段(A、B段),均采用胰酶消化法分离HUVEC,分别加入DMEM完全培养液A(含20%的脐带血血清)和B(含20%的胎牛血清、20 ng/mL的血管内皮生长因子),并通过传代进行纯化和扩增培养,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察并绘制细胞生长曲线,用免疫组织化学方法对所得细胞进行鉴定,用流式细胞术检测细胞周期。结果成功建立了以人脐带血血清为主体的培养体系的HUVEC培养扩增的方法,A、B两段脐带HUVEC吸光度无明显差异(P>0.05),免疫组化可见两段HUVEC胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原均呈阳性反应,流式细胞术检测结果显示,A段HUVEC S期的细胞约占35.5%,S+G2+M期的细胞约占48.2%活跃于增殖期,而处于G0/G1期的细胞约占58.3%左右,符合其生长特性。结论应用灭活脐带血血清培养体系可成功扩增HUVEC,培养的细胞具有HUVEC的基本特性,脐带血血清可在取脐带的同时获得,方法简便,无需购买,为体外研究血管内皮细胞提供了价廉、易行的实验手段。     

宫颈糜烂及HPV16/18 E6的表达关系研究

目的:研究肉眼拟诊为宫颈糜烂的患者其组织学诊断及人乳头瘤病毒16型(或18型)E6蛋白(HPV16/18E6)的表达及其临床意义。方法:随机抽取年龄为18～65岁的肉眼观为宫颈糜烂的患者100例,分为宫颈轻度糜烂组(30例)、中度糜烂组(41例)、重度糜烂组(29例),光滑组100例(对照组)。分别行阴道镜下宫颈活检,作出病理组织学诊断,采用免疫组织化学法(SP法)测定宫颈组织中HPV16/18E6表达情况。结果:(1)各组宫颈活检的病理结果分为正常、宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌(Ca)。各组间疾病构成差异有统计学意义(P0.01),且CINⅡ、CINⅢ及Ca随着疾病严重程度亦呈增加趋势。(2)宫颈光滑组、轻度糜烂组、中度糜烂组及重度糜烂组的HPV16/18E6蛋白阳性率分别为21.0%、26.7%、31.7%及51.6%,差异有统计学意义(P0.01)。其中,光滑组与轻度糜烂组及中度糜烂组、轻度糜烂组与中度糜烂组阳性率差异无统计学意义(均P0.05);重度糜烂组与其他各组比较差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:肉眼拟诊为宫颈糜烂的患者其组织学诊断多样化,糜烂程度越高,发生宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的可能性越大,HPV16/18E6的表达水平亦有随之升高的趋势。     

子宫内膜异位症病灶新生血管周细胞特点

血管生成在子宫内膜异位症(内异症)的发生和发展中起重要作用.异位内膜的种植、生长和侵袭均依赖新生血管形成,建立并维持新的血液供应,使子宫内膜异位种植存活,从而促成内异症发病并且反复发作.由此可见,内异症也属于一种血管生成依赖性疾病.目前认为,新生血管形成是内异症发病过程中重要的病理过程[1];新生血管有两种细胞构成,即内皮细胞和周细胞.周细胞是微血管壁位于内皮细胞外并包绕着内皮细胞的细胞[2].它与内皮细胞的关系对血管生成的调节极其重要,为探讨内异症病灶新生血管周细胞的特点,本研究通过动物实验观察了内异症的血管生成,现将结果报道如下.     

可溶性endoglin对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮及其合成酶磷酸化水平的影响

目的 观察可溶性endoglin(soluble endoglin,sEng)对体外培养的人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮(nitric oxide,NO)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)及其1177位点丝氨酸磷酸化程度的影响. 方法 将3代以内的人脐静脉内皮细胞接种于96孔培养板,分别加入完全细胞培养液(对照组)和不同浓度的sEng(1、10、100 μg/L),作用6、12和24 h后收取细胞培养液及细胞,硝酸酶还原法测定细胞培养液中NO代谢产物亚硝酸盐浓度反映NO含量,Western印记法检测各组细胞eNOS的相对表达量及其1177位点丝氨酸磷酸化情况,实时荧光聚合酶链反应技术检测各组细胞eNOS mRNA的相对表达量.采用方差分析、LSD法及Pearson相关分析法对各组进行比较. 结果 (1)1、10、100μg/L sEng作用6h,细胞培养液中NO浓度分别为(59.25±1.63)、(41.08±2.71)和(30.38±1.63)μmol/L;作用12 h,细胞培养液中NO浓度分别为(54.98±3.34)、(35.00±8.60)和(19.82±3.75)μmol/L;作用24 h,细胞培养液中NO浓度分别为(46.14±4.93)、(30.24±2.08)和(12.78±5.01)μmol/L,而对照组NO浓度随着时间的推移无明显改变(F=2.30,P=0.14).与sEng共培养后,细胞培养液中NO浓度明显降低,并与sEng作用时间(r=0.98,P＜0.05)及浓度(r=-0.88,P＜0.05)呈明显的负相关.(2)1、10、100 μg/L sEng作用6 h eNOS相对表达量分别为0.71±0.00、0.47±0.00和0.32±0.00;作用12 h,eNOS相对表达量分别为0.58±0.00、0.42±0.00和0.25±0.00;作用24 h,eNOS相对表达量分别为0.49±0.00、0.33±0.00和0.18±0.00.而对照组eNOS相对表达量及1177位点丝氨酸磷酸化eNOS吸光度/总eNOS吸光度随时间推移无明显改变(F分别为3.59和0.37,P分别为0.09和0.80).与sEng共培养后,细胞中eNOS蛋白表达量较对照组明显下降,其1177位点丝氨酸磷酸化程度明显减弱,与sEng作用时间(r分别为-0.98和-0.96,P均＜0.05)及浓度(r分别为-0.76和-0.79,P均＜0.05)呈明显负相关.(3)与sEng共培养后,细胞培养液中eNOS mRNA的表达量明显下降,亦与sEng作用时间(r=-0.51,P＜0.05)及浓度(r=-0.82,P＜0.05)呈明显的负相关. 结论 sEng 可能通过抑制eNOS 1177位点丝氨酸磷酸化,导致eNOS激活被抑制,NO生成减少,引起血管舒缩失调.