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背景:寻找合适的标记分子作为血管内皮祖细胞谱系追踪观察的标志成为其体内、外诱导分化机制研究中的一项重要课题。
目的:体外研究绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因转染骨髓源性血管内皮祖细胞的方法,并检测基因转染后细胞的生物学特性。
设计、时间及地点:细胞基因工程对照观察,于2007-07/2008-05在苏州大学附属第二医院实验中心完成。
材料:3周龄清洁级Wistar大鼠15只用于制备骨髓源性血管内皮祖细胞, 绿色荧光蛋白基因及重组腺病毒由苏州大学附属第二医院李晓强教授惠赠。
方法:体外分离培养Wistar大鼠血管内皮祖细胞,EGM-2MV培养基培养大鼠骨髓中的单个核细胞。以腺病毒为载体,293A细胞为包装细胞,介导GFP转染血管内皮祖细胞,与未转染的同期细胞作对照。
主要观察指标:在荧光显微镜下观察GFP表达效率。酶联免疫吸附法检测培养上清中血管内皮生长因子蛋白水平评价GFP转染血管内皮祖细胞后对细胞功能的影响,MTT法评价GFP转染血管内皮祖细胞后对细胞活性的影响。
结果:成功构建了携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(Ad-GFP),成功培养了大鼠骨髓源性内皮祖细胞,重组Ad-GFP可高效率转染血管内皮祖细胞,病毒感染组阳性细胞与未感染组细胞血管内皮生长因子蛋白水平表达相当,Ad-GFP转染后对血管内皮祖细胞的增殖没有影响。
结论:构建了带有GFP的缺陷型重组Ad-GFP,转染Wistar大鼠血管内皮祖细胞得到了高效表达,且感染细胞的生物学特性和增殖能力未受影响。 相似文献
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外伤性血管损伤的手术及介入治疗 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨外伤性血管损伤的外科手术及介入治疗方法 . 方法 分组回顾分析85例血管损伤的1临床资料.损伤部位包括颈静脉、椎动脉、四肢主干血管、肠系膜上动脉.其中交通伤25例、锐器伤60例.行手术治疗62例(血管移植术37例,血管修补术25例),介入治疗23例. 结果 死亡1例,截肢1例.两组共随访58例,所有患者损伤血管通畅情况良好. 结论 及时止确的诊断对于血管损伤的救冶意义重大.介入治疗血管损伤具有创伤小、手术时间短、操作简单、术后恢复快的优点.介入与手术方法 可联合应用丁血管损伤的治疗. 相似文献
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目的 研究新型超顺磁性氧化铁(SPIO)标记骨髓源血管内皮祖细胞(EPCs)对其生物学影响,提高其标记效率及安全性.方法 采用梯度离心结合贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓源EPCs并鉴定,以3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTS)修饰Fe2O3配制成SPIO,用六种不同浓度SPIO(0 μg/ml、6.25 μg/ml、12.5 μg/ml、25 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml)分别转染标记EPCs,对标记后的EPCs行普鲁士蓝染色、台盼蓝染色、透射电镜、噻唑蓝(MTT)检测、流式细胞仪检测细胞凋亡与细胞周期,探讨不同SPIO浓度对EPCs标记效率、细胞活性及增殖的影响.结果 普鲁士蓝染色显示EPCs呈浓度依赖性摄取SPIO,培养基中Fe3+浓度为25 μg/ml时,标记效率最高,可见95%以上EPCs普鲁士蓝染色阳性;当Fe3+浓度小于12.5 μg/ml时,染色阳性细胞数小于50%;当Fe3+浓度为100μg/ml时活细胞数目小于40%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).台盼蓝染色显示随着标记浓度的升高,细胞活力逐渐升高.当SPIO浓度超过50 μg/ml,细胞活性逐渐降低.透射电镜可见EPCs超微结构保存良好,大量的高密度SPIO颗粒,主要位于溶酶体内、滑面内质网、线粒体等细胞器的膜结构上.MTT测试及细胞凋亡与周期检测表明SPIO标记对EPCs存活、增殖的能力无明显影响,标记后的EPCs可用于进一步干细胞示踪研究.结论 梯密度离心结合贴壁法可分离出血管内皮祖细胞进行体外增殖分化.APTS修饰Fe2O3配制而成的新型SPIO可简便标记EPCs,并且在适当浓度下对MSCs的生物学活性没有影响,为后期的活体MRI示踪于细胞移植实验奠定基础. 相似文献
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电视腹腔镜胆囊切除术 (LPC)具有对患者损伤小 ,术后恢复快 ,住院时间短的优点 ,但术中易发生高CO2 血症 ,给麻醉工作带来了新问题 ,提出了新要求。我们通过 1 2 4例LPC的硬膜外麻醉认为 ,只要正确、及时地处理好CO2 气膜对呼吸、循环的影响 ,选择性用硬膜外麻醉实施LPC是安全有效的。1 临床资料1 997-0 5~ 1 999-1 2 ,硬膜外麻醉下行LPC1 2 4例。男性 2 1例、占 1 6 9% ,女性 1 0 3例、占 83 1 %。年龄 3 4~ 68岁。术前评估ASA分级 :Ⅰ级 85例、占68 5% ,Ⅱ级 3 9例、占 3 1 5%。2 麻醉经过与结果常规术前准备 ,… 相似文献
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为解决麻醉医师观摩手术进程问题 ,笔者利用现有设备 ,改进仪器部件 ,扩大应用范围 ,提高了仪器使用率。1 方 法对一台德国LEICAWILDmicroscopeM 690手术显微镜及配套专用显微录像设备 (但无外录像作用 )进行改造。为使显微录像机增加外录功能 ,另配一个外录镜头 ,用于心脏外科体外循环手术录像。具体改装如下 :将日本产镜头(0 5m~ 3m的JAPANavenirCCTVlens 16mmF 1 4)连接在显微录像头上 (SONYCCD iris) ,把SONYCCD iris固定在台灯用万向关节一端 ,另一端固定在无… 相似文献
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