评价纸片扩散法检测念珠菌对氟康唑的敏感性及临床应用

美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)于1997年公布了酵母菌肉汤稀释法抗真菌药物敏感性试验参考方法(NC-CLS M27-A),并于2002年进行了修订(NCCLS M27-A2)[1],但该类方法操作繁琐,难以在常规工作中开展.2003年NC-CLS公布了酵母菌纸片扩散法抗真菌药物敏感性试验方案(NCCLS M44-P)[2].我们应用此方案检测了临床标本中分离的136株念珠菌对氟康唑的敏感性,并与微量肉汤稀释法测定结果进行了比较,以评价其结果和临床应用可靠性,报告如下.     

三种方法四种试剂自动化检测HBV血清标志物结果的对比研究

目的评价三种方法四种试剂自动化检测HBV血清标志物结果的差异。方法选择A xSYM、A lise i、SYM-B io自动免疫分析仪分别采用三种方法四种试剂对636例筛选的血清标本进行HB sA g、A n ti-HB s、HB eA g、A n ti-HB e、A n ti-HB c等五项血清标志物检测,并以A xSYM结果为参照,对项目结果不符及项目结果不一致进行分析。结果对636例筛选的血清标本,A lise i KHB、A lise iM urex、SYM-B io与A xSYM比较,其总的项目结果不符率和总的项目结果不一致率分别为12.4%和3.5%,11.1%和2.6%,7.5%和8.6%,各项目结果不符率以A lise iKHB、A lise iM urex的A n ti-HB e和SYM-B io的HB eA g/A n ti-HB c最高,分别为5.0%,5.8%和2.2%;各项目结果不一致率以A lise i KHB、A lise iM urex的A n ti-HB s和SYM-B io的A n ti-HB e最高,分别为2.3%,1.6%和3.2%。结论仪器、方法、试剂不同可导致血清标志物结果的差异,各项目的报告单位、判断标准有待进一步规范,应建立完善的检测血清标志物量值溯源体系。     

慢性HBV感染者低浓度HBsAg相关分子调查研究

目的 探讨低浓度HBsAg人群的分子生物学特征及流行病学意义.方法 采用PCR及基因测序的方法 对HBV慢性感染者136份低浓度HBsAg(低浓度HBsAg组)和44份高浓度HBsAg(高浓度HBsAg组)血清标本进行HBV DNA、酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(YMDD)变异检测,并分别对浓缩法HBV DNA105拷贝/L的47份低浓度HBsAg和37份高浓度HBsAg血清标本进行基因型检测,以及对直接法HBV DNA10~5拷贝/L的14份低浓度HBsAg和29份高浓度HBsAg血清标本进行S基因序列、血清型进行检测分析,S基因序列采用BioEdit软件与中国株参照序列进行比对.结果低浓度HBsAg组HBV DNA阳性率、YMDD变异率和HBV DNA对数值分别为34.6%(47/136)、0(0/136)和6.5±1.4,高浓度HBsAg组分别为84.1%(37/44)、9.1%(4/44)和8.9±1.8,两组之间差异有统计学意义(浓缩法χ~2=30.8,P<0.05;直接法χ~2=53.5,P<0.05;YMDD变异率精确概率法,P=0.003;HBV DNA对数值t=6.5,P<0.05);47例低浓度HBsAg病例中分别检出B基因型16例、C基因型5例、未分型26例,14例血清型分别为adw 7例、ayw4例、adr2例、ayr 1例,在两组人群中基因型的分布差异有统计学意义(χ~2=13.5,P<0.05),血清型的分布差异无统计学意义(χ~2=4.7,P>0.05),S基因测序结果未发现S基因变异,但6处16例次存在核苷酸碱基差异而氨基酸同义的多态性特征.结论 低浓度HBsAg人群HBV DNA存在低复制现象,基因型、血清型分别以B型、adw/ayw为主,S基因呈多态性特征,低浓度HBsAg存在可能与HBV S基因特殊的分子生物学特征使HBsAg表达低下有关,或与患者感染HBV后机体免疫系统的个体反应导致低浓度HBsAg诱导机体免疫耐受有关.     

2012年CLSI M100-S22文件主要更新内容的解读

本文主要介绍美国临床和实验室标准协会( CLSI)抗菌药物敏感试验执行标准M100-S22文件主要更新和变化情况,内容包括:(1)一般变化;(2)试验和报告推荐药物变化;(3)解释标准(折点)和注释变化;(4)质量控制和其他变化;(5)附录和术语表变化.     

肉汤稀释法酵母菌药物敏感性试验及质量控制介绍

美国临床实验室标准化委员会(NCCLs)于1997年公布了肉汤稀释法酵母菌抗真菌药物敏感性试验参考方法(M27-A),并于2002年进行了修订(M27-A2)[1].下面简要介绍肉汤稀释法酵母菌药物敏感性试验方法及质量控制.     

迈瑞BC-6900全自动血细胞分析仪体液模式的性能验证和评价

目的验证和评价迈瑞BC-6900血球仪体液模式的主要性能指标。方法按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准对BC-6900血球仪体液模式白细胞(WBC-BF)、红细胞(RBC-BF)的空白计数、携带污染率、精密度、线性范围和相关性等性能指标进行验证和评价。结果 BC-6900血球仪2个项目空白计数与携带污染率均较低,符合厂家的技术指标要求;不同水平的精密度均符合临床要求,变异系数(CV)均小于15%;临床标本2个项目的检测结果与稀释倍数呈良好的线性关系(均r0.99);BC-6900血球仪体液模式2个项目测定结果与显微镜下手工计数比较具有良好的相关性(均r0.99);分类结果与显微镜下手工分类比较,有核细胞计数大于0.1×109/L时,单个核细胞、多个核细胞分类结果相关系数为0.984,而有核细胞计数在0.1×109/L以下时2种细胞的相关系数分别为0.893和0.811。结论 BC-6900血球仪体液模式性能指标良好,能较好地满足临床体液常规的检测要求。     

骨髓有核细胞直接定量计数的实验研究

目的探讨骨髓有核细胞直接定量计数的准确方法.方法选用EDTA-K2抗凝骨髓,稀释20倍后,以血细胞计数池准确计数有核细胞;同时对有核细胞增生程度以高倍镜法进行比较.结果 123份EDTAK2抗凝的骨髓标本有核细胞进行直接定量计数,结果介于6.0～456.0×109/L之间,平均95.3×109/L.低、中、高3份骨髓标本有核细胞直接定量计数法,CV分别为0.096、0.061和0.061:高倍视野法CV分别为0.348、0.136和0.075.123份骨髓有核细胞增生经高倍视野法观察:极度活跃5份、明显活跃33份、活跃52份、减低26份、极度减低7份,各增生梯度之间,采用t检验:t值分别为7.28、3.41、2.56和4.30,差异均具有显著意义.结论 选用EDTA-K2抗凝骨髓并进行骨髓有核细胞直接定量计数是必要的也是可行的,该法较目前国内常规方法准确性高、重复性好,便于操作.     

巢氏PCR扩增低拷贝HBV全基因组方法的建立及应用

目的建立一种用于低拷贝乙型肝炎病毒(HBV)不同基因型全基因组扩增的巢式聚合酶链式反应(nested PCR)方法及应用评价。方法通过设计和改良一组对HBV各基因型(A,B,C,D,E,F,G)DNA均具有较高扩增效率的通用巢式简并引物,采用两步法分六段(Ⅰa,Ⅰb,Ⅱa,Ⅱb,Ⅲ,Ⅳ)扩增低拷贝HBV基因组,比较不同反应条件对于PCR扩增产物的影响(退火温度,引物浓度),建立一种适合于低拷贝HBV全基因组扩增的方法;同时采用该方法对57份低浓度HBsAg乙肝感染者(HBsAg10IU/ml)的全基因组进行扩增、测序、拼接并进行评价。结果该方法的灵敏度可达25IU/ml,重复性好,对57份低浓度HBsAg乙肝感染者进行扩增,其中全基因扩增49例(86.0%),各片段(Ⅰa,Ⅰb,Ⅱa,Ⅱb,Ⅲ,Ⅳ)扩增分别为:53例(93.0%),52例(91.2%),54例(94.7%),54例(94.7%),55例(96.5%)和49例(86.0%),说明该方法适用于慢性低浓度HBsAg乙肝感染者HBV DNA全基因扩增。结论该文为慢性低浓度HBsAg乙肝感染者的全基因系列分析提供了高灵敏度、高特异度的方法,可在低浓度HBsAg感染者流行病学调查中发挥重要作用,同时为巢氏PCR扩增反应体系的优化提供了参考。     

不同基质溶液与渗透压对PEG沉淀血清循环免疫复合物的影响

目的探讨聚乙二醇(PEG)沉淀预处理的实验影响因素,建立一种高效的PEG沉淀体系用于血清循环免疫复合物(CIC)前处理。方法对PEG沉淀预处理的实验条件(溶液基质、离子强度、pH值和渗透压)优化,沉淀血清(制备标准HBsAg-anti-HBs CIC)中的CIC后,采用自主研制的免疫复合物解离剂进行解离,然后再用化学发光法检测游离HBsAg。通过计算解离量来比较最适沉淀体系,最后分别采用传统沉淀和优化后的沉淀条件结合自主研发的解离技术,对335份五种乙肝血清标志物模式(HBV-M)标本进行HBsAg-CIC检测。结果基质溶液为0.15mol/L,pH8.2,500mOsm/kg的硼酸盐缓冲液的70g/L PEG 6000沉淀剂,4℃过夜沉淀后选择离心力为18 009×g,离心温度4℃,离心时间为10min,其沉淀分离效果最佳;五种乙肝血清标志物模式(HBV-M)标本分别采用传统和改良法检测免疫复合物,其中改良法的阳性率高于传统法分别为:0,95.2%,87.2%,80%和8.7%,另外在HBV-M 2,3,4组中改良法的沉淀CIC含量高于传统法且差异存在统计学意义(P0.05)。结论 PEG沉淀被广泛用于血清CIC检测及前处理,受到多重因素的影响,其中基质溶液及渗透压的选择也十分重要。该文为提高血清中循环免疫复合物(CIC)的检出率及缩短沉淀时间提供了理论基础。     

M46CN Campylobacter乳胶凝集试验检测弯曲菌的评价

摘要：目的：评价M46CN Campylobacter乳胶凝集试验检测弯曲菌的性能。 方法：用M46CN Campylobacter乳胶凝集试验对临床373份粪便标本及其48 h培养分离菌进行直接检测和鉴定,以API Campy生化鉴定、革兰染色、氧化酶和动力试验（简称常规鉴定）结果为标准,评价M46CN Campylobacter乳胶凝集试验对标本直接检测和分离菌鉴定结果的性能。 结果：M46CN Campylobacter乳胶凝集试验对373份粪便标本进行直接检测,阳性61例,阴性312例,其检测敏感性为80.8％,特异性为99.3％,阳性预测值为96.7%,阴性预测值为 95.5％,诊断效率为95.7%。与标准方法鉴定结果相比,经Kappa一致性检验,Kappa=0.854 7,u=16.596 1,P<0.01。对373份粪便标本的分离菌进行鉴定,Campylobacter阳性73例,阴性300例,其检测敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和诊断效率均为100%。 结论：M46CN Campylobacter乳胶凝集试验直接检测粪便标本与标本培养后经标准生化反应鉴定结果具有良好一致性,对培养物中弯曲菌鉴定与标准的生化鉴定结果完全符合,其敏感性和特异性高,适合临床常规鉴定弯曲菌属细菌使用。