相思子毒素抗原和抗体制备

[目的]研究一种相思子毒素抗原、抗体的制备技术。[方法]根据相思子毒素对半乳糖的特异性结合能力,采用亲和层析技术将相思子种子中大部分杂质除去;经凝胶过滤层析,进一步去除植物种子中与蛋白毒素并存的凝集素,获得电泳纯度天然相思子毒素纯品。[结果]利用大肠埃希菌表达重组相思子毒素A链蛋白,经金属螯合层析法纯化,得到重组相思子毒素A链蛋白抗原。重组抗原免疫大耳白兔、昆明小鼠,采用辛酸一硫酸铵盐析法和亲和层析法纯化兔血清和鼠腹水获得多抗;2种抗体与天然毒索特异性结合的活性效价均为10^6。[结论]抗原、抗体的制备为建立相思子毒索检测方法奠定了基础。     

悬浮芯片定量检测鼠疫菌的方法研究

目的利用编码微球悬浮芯片技术,探讨直接从"白色粉末"样品中检测鼠疫菌的可行性,为建立快速、敏感、特异、高通量、同时检测多种生物恐怖因子的技术平台奠定基础。方法用抗体包被编码微球作为反应载体,双抗体夹心法为反应模式,建立鼠疫菌F1抗原悬浮芯片检测方法,对"白色粉末"中的鼠疫耶尔森菌进行检测。通过盲样和标准实验室检测评估对现场样品的适用性。结果建立的定量检测鼠疫菌F1抗原的悬浮芯片方法具有较高的特异性和敏感性,并在0.154～4514ng/ml浓度范围内具有良好的动力学响应特性,比ELISA方法有较高的灵敏度和较宽动态检测范围。结论定量检测鼠疫菌的悬浮芯片方法能快速、敏感、特异地定量检测"白色粉末"中鼠疫菌,在早期识别、快速诊断和应对生物恐怖威胁、传染病暴发中具有广阔的应用前景。     

Nonidet P-40裂解流感病毒及其对抗体结合影响的透射电镜观察

目的 利用TEM观察经Nonidet P-40处理的A型流感病毒表面形态变化,研究不同表面活性剂-病毒表面相互作用情况,以提供一种较为温和的病毒表面裂解条件,并考察表面活性剂存在条件下对病毒表面抗体结合作用的影响,为利用病毒内部抗体结合病毒下层结构提供免疫诊断学理论基础.方法 通过用不同浓度的非离子型表面活性剂NP-40对完整的A型流感病毒进行处理,经透射电子显微镜成像,观察两种试剂对病毒表面形态的破坏程度,并考察病毒抗体结合情况.结果 NP-40各浓度对病毒表面破坏程度不一,病毒随浓度增高降解程度增大,但在0.1%NP-40及以下浓度上对抗体结合作用影响不大.结论 通过表面活性剂优化处理病毒颗粒,对抗体的结合会产生影响,本研究为利用流感病毒内层抗体结合包膜病毒奠定了样本处理的理论基础.     

辽宁省乙脑病毒的分离与鉴定

目的 对2002年辽宁省采集的蚊虫标本进行病毒分离与鉴定。方法 从辽宁省采集蚊虫标本4927只，用细胞培养的方法分离病毒，对新分离的病毒进行血清学（ELISA和IFA方法）、分子生物学鉴定。结果 本实验共研磨蚊虫标本50批，分离到2株病毒，命名为LN02-102、LN02，104。这2株病毒均可致BHK-21细胞病变（CPE）（2—3d），致Vero细胞病变（2—4d），也可致C6／36细胞病变（2—4d）。对3日龄乳鼠2—3d可致死。这2株病毒可与标准乙脑病毒抗体反应。利用病毒PrM区段（基因组456-695核苷酸）进行基因分型分析。新分离的2株病毒属于基因Ⅰ型乙脑病毒。对这2株病毒的E基因区段进行分析，它们之间核苷酸和氨基酸的同源性为100％，与疫苗株SA14-14-2相比，核苷酸差异为4．11％，氨基酸差异在0．60％。结论 在辽宁省采集的蚊虫标本中分离到2株病毒，经血清学和分子生物学鉴定为基因Ⅰ型乙脑病毒，是近年来在辽宁省首次分离到基因Ⅰ型的乙脑病毒。     

2005年广西媒介蚊虫中流行性乙型脑炎病毒的分离鉴定

目的对广西流行性乙型脑炎(乙脑)流行区的蚊虫进行乙脑病毒分离鉴定。方法2005年6、7月在北流市和靖西县居民区的畜圈内采集蚊虫标本,用C6/36和BHK21细胞分离乙脑病毒,用ClustalX(1.8)、Mega3.1等软件进行分离株E基因序列比对和系统进化分析。结果两地共采集三带喙库蚊771只、骚扰阿蚊425只,从三带喙库蚊中分离到3株基因1型乙脑病毒,3株病毒之间E基因片段核苷酸和氨基酸的最大同源性为99.3%和99.8%,与越南毒株之间核苷酸和氨基酸的最大同源性为98.4%和99.6%。结论从2005年采集自广西的蚊虫中分离到3株基因1型乙脑病毒,这是首次报道在广西分离到基因1型乙脑病毒。