首次从云南蚊虫分离到辛德毕斯病毒及其鉴定

目的了解云南省虫媒病毒的存在和流行情况。方法2005年8月,在云南省勐海县采集蚊虫,蚊虫标本经研磨后,上清液接种BHK21细胞以分离病毒,用间接免疫荧光试验和RT-PCR等方法进行鉴定,并对病毒的分子生物学特征进行分析。结果采集到蚊虫标本9400只,其中分离到一株对BHK-21细胞能产生明显细胞病变的病毒(MX10)。该病毒经间接免疫荧光试验提示为甲病毒。用甲病毒属特异引物和Sindbis病毒E1基因特异引物对MX10病毒的RT-PCR扩增为阳性,经核酸序列测定分析证实该序列与Sindbis病毒泰国分离株(AF492770)同源性最高,为90.0%;与1987年分离自云南发热患者的YN87448株和1991年新疆按蚊分离株XJ-160的同源性分别为73.1%和72.0%。结论本次从勐海县蚊虫分离到的MX10病毒株为Sindbis病毒,并可能是Sindbis病毒的新亚型或新株系。     

黑龙江省部分地区虫媒病毒调查

目的对黑龙江省部分地区的虫媒病毒进行调查,从吸血蚊虫中分离病毒,并对其进行鉴定。方法2002年在黑龙江省采集蚊虫标本,用BHK细胞分离病毒,并进行血清学和分子生物学鉴定。应用ClustalX(1.8)软件做碱基配对及进化分析,GENEDOS(3.2)软件完成氨基酸位点分析。结果4株病毒引起BHK细胞规律病变,病变时间为72h,乳鼠脑内接种病毒后72h死亡。与标准乙型脑炎病毒抗体呈阳性反应。扩增病毒PrM、E区段并进行基因分型分析,4株病毒属于基因Ⅲ型乙型脑炎病毒。以减毒活疫苗株SA14142为标准,采用以往黑龙江省分离的乙脑毒株(47、Ha3株)为参照对4株病毒的E基因区段进行分析,4株病毒之间核苷酸同源性在99.9%以上,氨基酸同源性在99.8%以上;新分离4株乙脑病毒与SA14142的核苷酸同源性为97.3%,氨基酸同源性在96.8%～97.0%,共存在7个位点的共同差异。结论在黑龙江省新分离到4株乙型脑炎病毒。在决定病毒毒力的8个重要位点上有6处差异。     

检测土拉弗朗西斯菌的生物素—亲和素ELISA法的建立

〔目的〕建立一种快速、敏感、特异检测土拉弗朗西斯菌的免疫学方法。〔方法〕应用生物素-亲和素标记系统,建立双抗体夹心ELISA方法,检测土拉弗朗西斯菌,并进行"模拟样品"的检测判定其定量检测能力。〔结果〕建立的生物素—亲和素ELISA检测土拉弗朗西斯菌的方法具有很好的敏感性和特异性,检测FopA蛋白的灵敏度达到6ng/ml;批内变异系数1.96%～6.64%,批间变异系数8.94%～10.02%,重复性好;检测不同浓度马秋波GP2蛋白、天花M1R蛋白、黄热YF-E-D3蛋白、禽流感NP蛋白、登革病毒Deng-E-D3蛋白和普氏立克次体120N蛋白,未发现交叉反应;对"模拟样品"中土拉弗朗西斯菌FopA蛋白的检测回收率为91.7%～125.0%。〔结论〕应用生物化的FopA多抗与酶标亲合素结合,建立了检测土拉弗朗西斯菌的生物素—亲和素放大酶联免疫吸附法(BSA-ELISA),具有较好的灵敏度和特异性,在病原菌的识别、快速检测、应对生物恐怖威胁中具有广阔的应用前景。     

中国滇西北地区分离流行性乙型脑炎病毒的分子特征研

目的 对中国滇西北地区分离的流行性乙型脑炎(乙脑)病毒进行分子特征研究,了解与云南省内其他地区病毒株的差异.方法 用RT-PCR的方法扩增滇西北地区分离的13株乙脑病毒PrM、E片段和3'非编码区,对扩增产物进行序列测定.用Clustal 1.8X、DNASTAR、GENEDOC等生物学软件进行核苷酸序列和系统进化分析.结果 基于PrM和E基因核苷酸序列的系统进化显示,滇西北分离的13株乙脑病毒中有12株属于基因Ⅰ型,1株为基因Ⅲ型;12株基因Ⅰ型乙脑病毒与云南省其他地区分离的病毒株处于不同分支;和云南省其他地区分离株之间E基因核苷酸序列差异度为0.2%～13.9%;3'非编码区存在两种核苷酸缺失情况,基因Ⅰ型毒株在终止密码子后出现3处缺失,而基因Ⅲ型毒株只有1处缺失.结论 滇西北地区乙脑病毒分离株以基因Ⅰ型为主,E基因核苷酸序列与云南省其他地区分离株差异不明显;基因Ⅰ型毒株在3'非编码区存在3处缺失,而基因Ⅲ型毒株则只有1处缺失.     

2011年黑龙江省黑瞎子岛鼠群中钩端螺旋体感染状况调查

目的 调查2011年黑龙江省黑瞎子岛鼠群中钩端螺旋体的感染情况.方法 于2011年4-10月在黑龙江省黑瞎子岛采用夹夜法捕鼠,共捕鼠356只,无菌操作采集鼠肾样品;提取鼠肾脏总核酸,采用PCR方法,利用钩体鉴别引物,对提取的肾脏总核酸中23 S rDNA的482 bp特异性片段进行扩增,以检测鼠体钩端螺旋体感染情况;抽取不同月份的15份阳性扩增产物进行纯化,用双脱氧终止法测序,并利用Mega 4.0软件与Genebank中已知的国内外菌株基因序列进行比对及系统发育分析.结果 在捕捉到的356只鼠中,红背(鼠平)和黑线姬鼠所占比例较大,分别为39.3％(140/356)和36.0％(128/356).所有鼠中共检测到钩端螺旋体阳性39只,感染率为11.0％,除褐家鼠外,其他鼠种均有感染,黑线姬鼠、红背鼾、东方田鼠、花鼠和大林姬鼠的感染率分别为9.4％ (12/128)、12.9％(18/140)、10.8％(7/65),差异无统计学意义(x2=1.92,P＞0.05).4月份未检测到感染疫鼠,5、6、7、8、9和10月份的感染率分别为5.6％(4/72)、8.8％(5/57)、12.8％(5/39)、9.8％(5/51)、33.3％(11/33)和22.5％ (9/40),差异有统计学意义(x2=32.92,P＜0.05);黑瞎子岛鼠群感染的钩端螺旋体在同一进化支上,相似度为97.1％～99.6％,与澳大利亚的菌株U90865在进化上最为相近,相似度＞96.3％.结论 该地区鼠群中已存在钩端螺旋体的感染,所感染钩体在进化上相似,且存在季节性差异,而对宿主的选择性不明显.     

咪唑安定和异丙酚复合诱导的临床研究

随着人们对药物研究的深入和临床监测技术的发展 ,越来越多的联合用药方案被麻醉医生应用于麻醉诱导。苯二氮卓类药物咪唑安定 (Ｍｉｄａｚｏｌａｍ)是在八十年代中期开始应用于临床麻醉的 ,近年来国外一些学者将其与异丙酚 (Ｐｒｏｐｏｆｏｌ)伍用复合诱导在临床中使用。本文仅就异丙酚和咪唑安定复合诱导的一些问题进行综述。1　异丙酚主要的药效学与药代学特性异丙酚起效快 ,维持时间短 ,分布容积大 ,血浆浓度的下降呈三相 ,即快速分布相 (半衰期为 1.5～8ｍｉｎ)、代谢相以及慢速再分布相 (半衰期为 5～ 12ｈ)。异丙酚具有较强的脂溶性 …     

输入性蚊类携带虫媒病毒监测研究

〔目的〕研究输入性蚊类携带虫媒病毒情况。〔方法〕在检疫锚地采集入境国际航行船舶携带的输入性蚊类进行虫媒病毒培养分离鉴定。〔结果〕2004～2005年共检测7706只输入性蚊类。在来自亚洲、北美洲、南美洲及大洋洲的6个国家的15艘次入境国际航行船舶携带的935只输入性蚊类体内分离出13株虫媒病毒,其中乙脑病毒8株;甲病毒属病毒5株,平均病毒检出率为1.39%(13株/935只)(自最高1株/19只至最低1株/135只)。此次研究结果为我国首次发现。〔结论〕结果证明输入性蚊类可携带虫媒病毒的事实和风险,应予高度重视。     

悬浮芯片法与生物素-亲和素ELISA法检测炭疽杆菌芽孢比较研究

〔目的〕建立快速、敏感、特异、高通量、同时检测多种病原体的技术方法。〔方法〕建立基于双抗体夹心免疫学检测的编码微球悬浮芯片和生物素-亲和素ELISA方法,比较2种方法对炭疽芽孢杆菌定量检测以及直接从＂白色粉末＂样品中检测的能力。〔结果〕悬浮芯片对炭疽杆菌芽孢检测具有很好的敏感性和特异性,最低检出限为4.2×103cfu/ml,动态范围为103-107cfu/ml;生物素-亲和素ELISA最低可以检测到1.4×104 cfu/ml,线性范围为104-107cfu/ml。〔结论〕悬浮芯片方法检测炭疽杆菌芽孢比ELISA方法具有更高的灵敏度和更宽的动态检测范围,在病原菌的早期识别、快速诊断、应对生物恐怖威胁、控制传染病爆发中具有广阔的应用前景。     

中缅边境蚊虫调查研究

目的调查中缅边境3个口岸蚊虫种群数量及构成。方法灯诱法。结果在中缅边境3个采样点共采集19种蚊虫,其中三带喙库蚊是优势种群,致倦库蚊、棕头库蚊和中华按蚊数量较多。结论中缅边境蚊种丰富,优势度较高的三带喙库蚊为流行性乙型脑炎（乙脑）的媒介,联合开展中缅边境蚊虫和蚊传疾病的监测是双方共同控制传染病传入传出的关键。     

复合检测5种重要发热病原悬浮芯片筛查方法的建立

目的建立同时检测甲型流感病毒、人禽流感病毒、鼠疫耶尔森菌、SARS冠状病毒、结核分枝杆菌5种发热病原抗体蛋白悬浮芯片方法。方法分别用各病原体的诊断抗原耦联不同编码的微球作为反应载体,采用间接反应模式,建立蛋白悬浮芯片方法检测引起发热体征的5种病原的特异性抗体,在同一反应体系中对人血清中的流感、禽流感、鼠疫、SARS、肺结核等特异性抗体进行复合检测。结果建立的蛋白悬浮芯片5种病原抗体快速筛查系统具有较高的特异性和敏感性,同时检测鼠抗流感NPIgG、兔抗禽流感H5N1IgG、兔抗鼠疫F1IgG、兔抗SARSNIgG、兔抗结核分枝杆菌IgG的检测灵敏度分别为968.80ng/ml、69.40ng/ml、6.30ng/ml、15.50ng/ml、1.60ng/ml。结论重要发热病原悬浮芯片快速筛查系统能快速、敏感、特异、同时检测人血清中的5种病原抗体,对口岸出入境人员是否携带病原的快速筛查具有广阔的应用前景。