喀什0507JS32病毒的分离鉴定

2005年7～8月，在喀什地区采集蚊虫进行病毒分离，从当地居民家畜圈采集的一组库蚊分离到0507JS32病毒，该病毒对C6／36细胞致病变，而对Vero细胞不致病变。电镜观察显示，完整病毒颗粒呈球形，直径55nm，无包膜，衣壳表面壳粒结构明显。基因组核酸电泳显示基因组为12节段双链RNA（double stranded RNA，dsRNA）。利用辽宁病毒（Liaoning virus，LNV）第12基因片段特异性引物对病毒RNA进行RT-PCR扩增，PCR产物进行序列测定，所得核酸序列进行BLAST比较，结果显示，与LNV病毒第12基因片段核酸序列同源性大于89％，证实该病毒为LNV病毒。     

伯氏疏螺旋体分型多重实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种检测伯氏疏螺旋体的分型多重实时荧光定量PCR方法,可对3种致病基因型伽氏疏螺旋体B.garinii、阿氏疏螺旋体B.afzelii、狭义伯氏疏螺旋体B.burgdorferi sensu stricto检出并分型。方法针对3种基因型菌株的外膜蛋白osp C基因,在保守序列设计通用引物并分别设计型特异Taqman探针,3条探针分别标记FAM、Texas Red和CY5荧光报告基团,建立和优化多重实时荧光定量PCR反应体系,检测其敏感性和特异性。结果建立的多重荧光定量PCR的最低检测值为B.garinii 40copies/μl、B.afzelii 5.17copies/μl和B.burgdorferi sensu stricto 37.8copies/μl,通过检测立克次体、土拉弗朗西斯菌无交叉反应,检测100只游离蜱与常规PCR结合测序结果分型一致,说明本方法有较好的灵敏性和特异性。结论该方法能快速检测伯氏疏螺旋体并同时分型,为莱姆病的诊断提供新方法。     

新型冠状病毒双重荧光RT-PCR检测方法

目的为快速检测新型冠状病毒,防控疫情的输入,建立一种快速的双重实时荧光RT-PCR检测方法。方法对WHO公布的单重实时荧光RT-PCR检测引物和探针进行重新设计和优化,建立双重荧光RT-PCR反应体系,分别采用羧基荧光素(FAM)和绿色荧光蛋白(VIC)荧光基团标记探针,实现双基因的同时检测。结果经优化的双重实时荧光RT-PCR方法有较好的灵敏度和特异性,对阳性对照质粒检测灵敏度为31拷贝/μl,检测健康和普通发热人员咽拭子以及流感病毒无交叉反应。结论建立了双重实时荧光RT-PCR快速检测方法,提高检测效率和准确度的同时降低了成本,可用于新型冠状病毒的快速应急检测。     

多种蚊媒病毒x—TAG悬浮芯片复合检测方法的建立

建立多重检测东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、基孔肯亚病毒、登革病毒、日本脑炎病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、圣路易斯脑炎病毒、版纳病毒、布尼亚病毒、裂谷热病毒的悬浮芯片方法。将十二种蚊媒病毒分为3组,每组使用标记有不同anti—TAG的上游引物及标记有生物素的下游引物对分别构建多重PCR体系,PCR产物与偶联了x—TAG的编码磁性微球进行杂交,最后利用Bio—plex100分析系统对12种蚊媒病毒分别进行单一、多重液相芯片检测。将平均荧光强度的判定阈值定为背景对照的3倍,多批次实验均能对十二种单一病毒样本和混合病毒样本进行准确鉴定,未出现交叉反应,表明该方法特异性较好。敏感性测试结果显示本检测方法具有高灵敏度。通过利用偶联有TAG及生物素的引物对,成功建立了可同时检测12种蚊媒病毒的液相芯片检测技术平台。该平台对于病原体的检测具有较好的应用前景。     

通用型基因悬浮芯片检测生物恐怖细菌的方法研究

目的 建立快速、高通量的基因悬浮芯片检测方法,用于生物恐怖病原体的快速筛检.方法 选择保守的细菌16 S rDNA序列,并针对炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis,B.a)、鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis,Y.p)、布鲁菌属(Brucella spp.,Bru)、土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis,F.t)和类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.p)等5种生物恐怖细菌设计种(属)特异性探针,经16 S rDNA通用引物341A、519B扩增基因组DNA,用基因悬浮芯片方法进行检测,并对方法的灵敏度、特异度、重复性、检测能力进行验证.结果 经16 S rDNA通用引物扩增,特异性探针杂交检测,能将样本细菌鉴定到属水平,同属菌出现交叉反应;检出限分别为类鼻疽伯克霍尔德菌1.5 pg/μl,布鲁菌属20 ps/μl,炭疽芽孢杆菌7 pg/μl,土拉弗朗西斯菌0.1 pg/μl,鼠疫耶尔森菌1.1 pg/μl;15次重复检测各探针变异系数(CV)为5.18%～17.88%,具有较好的重复性;方法可正确检出模拟白色粉末样本中炭疽芽孢杆菌和鼠疫耶尔森菌.结论 建立了通用型基因悬浮芯片检测体系快速高通量筛查生物恐怖细菌的方法.     

通用型基因悬浮芯片检测生物恐怖细菌的方法研究

Objective To develop a fast, high-throughput screening method with suspension array technique for simultaneous detection of biothreat bacteria. Methods 16 S rDNA universal primers for Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Brucella spp. and Burkholderia pseudomallei were selected to amplify corresponding regions and the genus-specific or species-specific probes were designed. After amplification of chromosomal DNA by 16 S rDNA primers 341A and 519B,the PCR products were detected by suspension array technique. The sensitivity, specificity, reproducibility and detection power were also analyzed. Results After PCR amplification by 16 S rDNA primers and specific probe hybridization,the target microorganisms could be identified at genus level, cross reaction was recognized in the same genus. The detection sensitivity of the assay was 1.5 pg/μl (Burkholderia pseudomallei),20 pg/μl (Brucella spp.), 7 pg/μl (Bacillus anthracis), 0.1 pg/μ1 (Francisella tularensis), and 1.1 pg/μl (Yersinia pestis),respectively. The coefficient of variation for 15 test of different probes was ranged from 5.18% to 17.88%,it showed good reproducibility. The assay could correctly identify Bacillus anthracis and Yersinia pestis strains in simulated white powder samples. Conclusion The suspension array technique could be served as an opening screening method for biothreat bacteria rapid detection.     

液相蛋白芯片法与BAS-ELISA法检测病原抗体的方法比较

〔目的〕分别建立流感病毒、禽流感病毒、鼠疫耶尔森菌、SARS病毒、结核分支杆菌等发热病原抗体的液相蛋白芯片定量检测方法,比较液相蛋白芯片方法与生物素—亲和素系统（BAS-ELISA）方法的检测能力。〔方法〕用诊断抗原包被编码微球,应用间接法检测模式,建立液相蛋白芯片定量检测病原抗体的方法,用液相蛋白芯片和BAS-ELISA方法检测相当样品并进行比较分析。〔结果〕建立的液相蛋白芯片分别检测流感、禽流感、鼠疫、SARS、结核特异性抗体,最低检测限分别为5.68ng/ml、1.50ng/ml、50.30pg/ml、105.57pg/ml、14.06pg/ml。液相蛋白芯片方法和BSA-ELISA方法的检测性能,在一定浓度范围内,对于相同样品2种方法有很好的相关性。〔结论〕与BAS-ELISA方法相比,液相蛋白芯片检测灵敏度高,动态范围宽,为同时检测多种病原抗体、任意组合检测目标物提供了平台。     

基于症候群监测初步建立我国口岸入境人员传染病 监测网络及其2009-2011年监测结果分析

目的 了解我国入境人群发热症候群和腹泻症候群的病原谱构成数据,促进我国入境传染病网络实验室监测网络技术平台建立和完善.方法通过口岸体温监测、医学巡查、主动申报、健康体检等手段,于2009年5月-2011年3月间,联合9个直属检验检疫局所属口岸建立监测哨点并对筛选出的入境发热及腹泻人员进行样本采集、统一病原谱检测及数据分...     

中越河口-老街双边边境地区蚊虫比较性调查

为明确中越河口-老街双边边境地区蚊虫种类及其分布情况,2008年11月在云南省河口县及越南老街省老街市4个地点的畜圈,于夜间用电动诱蚊灯采集蚊虫,并对雌蚊进行分类鉴定。结果显示,在中国河口采集库蚊、按蚊、阿蚊、伊蚊、小蚊共5属19种678只,在越南老街采集到库蚊、按蚊、伊蚊、阿蚊、曼蚊、蓝带蚊6属20种1334只。骚扰阿蚊和三带喙库蚊是河口、老街夜间畜圈数量最多的蚊种;河口的骚扰阿蚊构成比比20年前有所增加;致倦库蚊在老街蚊虫中构成比仅次于骚扰阿蚊和三带喙库蚊,与河口不同。     

血清学方法监测HPV感染和预防宫颈癌前病变价值的初步探讨

目的 初步探讨利用原核系统表达的复性L1蛋白检测抗HPV16L1抗体的血清学方法在监测HPV感染中的价值，为预防宫颈癌前病变的发生提供简便的实验室监测方法。方法 以基因重组技术表达的变性和复性突变型L1蛋白为抗原用酶联免疫法检测不同宫颈病变患血清中的IgG抗体。结果 以变性L1(m202)蛋白为抗原检测，宫颈癌、CIN患、正常或慢性宫颈炎妇女(对照组)血清IgG阳性率分别为16．0％、10．5％和9．1％，3间无显差异；HPV～DNA阳性的CIN患阳性率为12．5％，与对照组无显差异。以复性L1(m202)蛋白为抗原，3组阳性率分别为16．0％、35．5％和15．9％，CIN患的阳性率显高于宫颈癌和对照组；HPV—DNA阳性的CIN患阳性率为32．5％，显高于对照组。结论血清中抗L1蛋白线性抗体的检测不能反映HPV天然感染状态；以复性L1蛋白为抗原的血清ELISA检测方法可用于检测HPV感染后人体产生的针对构象表位的抗体，该检测方法可用于研究HPV血清流行病学及筛选发生宫颈癌前病变的高危人群。