重组人乳头瘤病毒58型L1蛋白在Sf9细胞中的表达条件优化

Objective To select the optimum conditions for amplification and expression of the recombinant human papillomavirus 58 (HPV58) LI gene using baculovirus-insect cell expression system. Methods The Sf9 insect cells at logarithmic phase was used to amplify virus at different multiplicities of infection (MOI). Titers of the virus were determined by plaque assay. The expression of recombinant protein was identified by indirect immunofluorescence assay, and the expression of recombinant protein at different MOI and time was determined by Western blot. Results Recombinant baculovirus containing HPV58 LI gene were amplified at MOI of 0.5 for 48 h when the Sf9 insect cells were at logarithmic phase, and the highest titers of the virus reached 5×108 pfu/ml. The optimum conditions for expressing the recombinant protein were that the recombinant baculovirus was inoculated at MOI of 5.0 and the protein was expressed within 72 h. Conclusion The optimum conditions for amplifying the virus and expressing the recombinant protein are determined.     

重组人乳头瘤病毒16型L1 VLP的初步纯化、鉴定及免疫效果的初步研究

目的 对昆虫细胞-杆状病毒系统表达的人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型L1蛋白病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)进行初步纯化研究,并在小鼠中检测纯化VLP的免疫原性.方法 采用蔗糖-氯化铯密度梯度超速离心纯化方法纯化HPV16 LI VLP.对纯化得到的VLP分别进行蛋白印迹法、十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及电镜鉴定.然后用VLP免疫6周龄BALB/c小鼠.将小鼠随机分成6组(3个剂量组、2个佐剂组和1个对照组),间隔2周免疫3次,3次剂量相同.取血分离血清,采用间接ELISA法检测抗HPV16 L1 VLP抗体滴度.结果 经蔗糖-氯化铯密度梯度超速离心纯化后,用SDS-PAGE鉴定纯化的HPV16 LI VLP,纯度达到90%.电镜观察可见完整的VLP颗粒.间接EUSA检测结果显示,剂量组及佐剂组小鼠血清中均可检测到特异性抗HPV16 L1 VLP抗体,且抗体滴度随针次和剂量的增加而增高.结论 采用蔗糖-氯化铯密度梯度超速离心纯化法得到的HPV16 L1 VLP可用于免疫学初步研究.通过昆虫细胞表达产生的HPV16 LI VLP 具有较强的免疫原性,能诱导小鼠产生强的体液免疫应答.     

活性氧在极低频电磁场生物效应机制中的研究进展

随着电力、电器设备的普遍使用,环境中极低频电磁场(extremely low frequency electromagnetic fields,ELF-EMF),尤其是工频电磁场的分布也越来越广泛.1979年,Wertheimer 和Leeper首次报道了儿童白血病发病率的增加可能与住宅附近的高压输变电设备有关.这一发现不仅使学者对于极低频电磁场潜在健康风险产生了极大兴趣,与其密切相关的公共卫生问题也引起了全社会的日益关注.随后几十年间陆续进行的研究结果表明,ELF-EMF暴露可能与多种肿瘤的发病率升高存在一定的相关性[1-2].     

药物生产车间污染微生物的快速鉴定和污染微生物资源及信息库的建立

目的:利用分子生物学方法快速检测无菌药品生产企业生产过程中的污染微生物,并建立污染微生物资源及信息库,为药品生产企业追寻污染溯源提供相应的技术指导。方法:对某家药厂口服固体制剂、制药用水、工作人员及生产环境等环节进行为时半年的微生物监控。应用传统法及分子生物学法16Sr DNA序列比对鉴定污染微生物,并对结果进行分析与整理,初步建立药物污染微生物资源及信息库。结果:共收集294株微生物,其中生产环境微生物污染率最高,占全部污染源的92.5%;其次是口服固体制剂(3.7%)、制药用水(2.0%)、工作人员(1.7%)。污染微生物主要分布于20个属,35个种,其中葡萄球菌污染率最高达到56.3%;其次为芽胞杆菌(Bacillus)(17.6%)、微球菌(Micrococcus)(15.8%)和微细菌(Microbacteria)(4.0%)。根据鉴定结果从污染来源、培养特性、形态染色及菌株登录号四方面进行归纳总结,并用Excel及Word电子文档建立药物污染微生物资源库。结论:本研究在多个药物生产环节检测到种类繁杂的污染微生物。因此,建立制药企业污染微生物资源及信息库,能够为今后开展污染水平的风险评估和不良事件调查提供技术平台。     

现代教师应在教学过程中自我完善

如何提高医学人才的综合素质已成为医学教育的一个重要课题，而建立一支高素质的教师队伍是实施素质教育的根本。笔者阐述现代教师在教学过程中，只有加强师德修养，转变教育的思想观念和职业理念，提高教学水平和科研能力，才能培养出具有综合素质的医学人才。     

绿色闪烁光对豚鼠眼屈光发育及乙酰胆碱M1受体表达的影响

目的研究绿色闪烁光诱导豚鼠近视眼模型中乙酰胆碱M1受体的表达,探讨M1受体在近视发展过程中的作用和机制。方法选择健康20日龄豚鼠30只,随机分为3组,每组10只,绿光组用明暗交替各2 s的绿色闪烁光照射,放在完全密闭的纸箱中饲养;自然光组用正常自然光照射,放在四周密闭而上方开放的纸箱中饲养;对照组用正常自然光照射,放在视野开阔的笼中饲养。分别在实验前、实验6周时用散瞳检影验光法测量眼屈光度,用A超测量眼轴长度。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测视网膜、脉络膜和巩膜组织中的M1受体m RNA的表达。结果绿光组诱导出近视,眼轴长度均较自然光组和对照组增加,差异均有统计学意义(P0.05)。绿光组巩膜、视网膜组织M1受体m RNA的表达均低于自然光、对照组,差异均有统计学意义(均P0.01)。结论绿色闪烁光诱导的豚鼠近视可能与眼视网膜组织、巩膜组织中M1受体m RNA的表达量减少有关。     

中药材地肤子与其伪品灰菜子超微指纹特征的对比研究

目的研究中药材地肤子及其伪品灰菜子的鉴别,建立中药材地肤子超微指纹特征鉴定标准。方法应用扫描电镜技术分别在70倍、 800倍、 3000倍电镜下对地肤子及其伪品灰菜子表面超微指纹特征进行比较研究。结果地肤子与其伪品灰菜子表面超微指纹特征存在明显区别。结论该方法可通过表面的超微指纹特征的研究快速准确鉴别地肤子与其伪品灰菜子,可为地肤子真伪鉴别提供一种有效、简单的快速鉴定方法。     

论农村卫生技术人员终身教育

农村卫生技术人员为广大农村居民健康服务,对农村居民基本医疗和公共卫生服务具有不可替代的作用.随着农村医改的深入,农村公共卫生服务质量要求不断提高,农村卫生技术人员医疗诊治水平和疾病预防能力亟待提高.医学教育已经从学校教育延伸到终身教育,农村卫生技术人员必须终身学习,才能更好地为广大农村居民服务.网络教育是终身教育的重要途径,为农村卫生技术人员接受终身教育提供了条件.终身教育体系的构建和终身教育法制化是农村卫生技术人员终身教育的重要保障.     

270例布病患者人群分布及临床症候群分析

布病是一种在全世界广泛分布的人兽共患慢性传染病.近年来发病率明显回升.该病严重威胁着人和多种动物的生命健康,常常导致严重的公共卫生问题和巨大的经济损失[1].布鲁菌是布病的病原,同时是潜在的生物恐怖制剂[2].布病临床表现复杂多样,以发热、乏力、多汗、肝脾肿大、顽固性关节和肌肉疼痛为主要表现的全身性疾病[3].     

基于杂合肽H5LL活性的生物信息学分析和重组乳酸菌表达载体的构建

目的：以人源性抗菌肽（AMPs）富组蛋白5 (Hst5)和LL-37为亲本,设计新型杂合肽H5LL,并通过基因工程技术构建重组乳酸菌表达载体,实现AMPs的高效和安全表达。方法：采用生物信息学方法对H5LL进行理化参数、亲/疏水性、剪切位点、磷酸化位点、信号肽、跨膜区域、亚细胞定位和二级结构预测;将目的序列和空载质粒pMG36e经HindⅢ及KpnⅠ双酶切后,构建乳酸菌重组表达载体pMG36e-H5LL,克隆转化获得含目的基因的重组质粒。结果：H5LL成为AMPs的可能性较高,含36个氨基酸,相对分子质量为4 625 380,总电荷数为+10,具有亲水性;有3个磷酸化位点,无糖基化位点;属于膜内蛋白,无跨膜区域,无信号肽;亚细胞定位预测,线粒体靶向肽的可能性为0.333。二级结构中α-螺旋结构和β-转角占比分别52.78%及22.22%,三级结构中α-螺旋数量较多。含目的基因的重组质粒PCR电泳,于138 bp处有单一特异性条带;双酶切电泳,重组质粒在136和3 500 bp处有清晰条带。结论：设计并合成的新型杂合肽H5LL具有较高稳定性、抑菌活性和低毒性;成功构建重组乳酸菌表达载体p...