用基因融合技术进行杀蚊幼毒蛋白基因的研究 Ⅰ.球形芽孢杆菌毒蛋白基因42的克隆

为了提高球形芽孢杆菌对中华按蚊的毒效,采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术成功扩增了Ｂ．ｓ．中有毒效作用的基因片段,通过Ｔ４ＤＮＡ聚合酶的修饰,使目的基因片段得以成功克隆。借助光敏生物素核酸标记探针,原位杂交筛选出目的基因阳性克隆。本实验中Ｔ４ＤＮＡ聚合酶的修饰是ＰＣＲ产物克隆成功的关键     

基因工程杀蚊幼蓝藻的研究

应用基因工程手段研制杀蚊幼蓝藻,是解决苏云金杆菌和球形芽孢杆菌等短持效问题的途径之一。但国际上基因工程蓝藻的毒效一直限于较低水平,甚至需要破碎细胞才能检测到对蚊幼虫的毒杀作用。本文将球形芽孢杆菌毒素基因装配鱼腥藻启动子后,转移入鱼腥藻进行表达,所得基因工程株对蚊幼虫具有十分显著的毒效,对淡色库蚊幼虫24h半致死浓度为2.31×10~4细胞/ml;其对淡色库蚊、中华按蚊、白纹伊蚊幼虫的毒效依次递减,这与球形芽孢杆菌相似。由于鱼腥藻易培养、生态适应性广等,可望成为蚊虫特效控制的新型武器。     

用基因融合技术进行杀蚊幼毒蛋白基因的研究Ⅱ.蚊幼虫肠壁细胞膜抗体基因的克隆

为了提高 Ｂ．ｓ．对蚊幼虫肠壁细胞膜的识别与结合力从而提高其杀蚊活性，本实验解剖了万余只中华按蚊幼虫肠道，制备了按蚊幼虫肠壁膜泡抗原及其鼠抗血清。抗原蛋白组分分析表明膜泡的纯度较高，而抗血清实验则显示出抗体组分与肠壁的结合作用。利用 Ｐ Ｃ Ｒ 技术成功扩增了小鼠抗体重链区基因，借助 Ｔ４ Ｄ Ｎ Ａ 聚合酶的修饰，使抗体基因得以成功克隆，为研制抗体基因与毒蛋白基因融合编码的“生物导弹”打下了基础。