肾综合征出血热浙江分离株Z521株的分子生物学特征分析

目的:研究分析肾综合征出血热浙江分离株Z521病毒株的S片段基因的结构特征。方法:从病毒感染的细胞中提取细胞总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)得到了与理论值相符的产物,将RT-PCR产物直接克隆T载体,纯化后测定序列,应用DNA STAR软件分析比较。结果:Z521病毒株S片段的全基因序列共1700个核苷酸,四种核苷酸的比例分别为A31.82%,G 23.29%,T25.41%,C 19.47%,GC含量为42.76%,AT含量为57.24%,共编码429个氨基酸。Z521株S片段与HTN76118和SEO R22病毒比较,核苷酸同源率分别为86%和71.5%,氨基酸同源率分别为97.9%和83%。结论:Z521病毒株为HTN型毒株,与目前的浙江省毒株Z10存在差异,可能为新的亚型。     

人用H5N1禽流感疫苗免疫动物效果观察

目的将用禽流感毒种R1203株按3种生产工艺生产的疫苗进行动物接种,观察疫苗的免疫效果。方法用不同剂量的3种工艺生产的禽流感疫苗,分别免疫大鼠和家兔,肌肉接种2针（隔14 d）,首针后14和28 d静脉采血,测定接种1针和2针后,动物血清中血凝抑制抗体和中和抗体的产生情况。结果大鼠的抗体反应较家兔敏感;大鼠和家兔在疫苗接种1针后14 d,都能产生血抑抗体,滴度可达1∶40,但中和抗体滴度都很低,几乎测不到;接种2针后,血抑抗体或中和抗体反应都显著高于第1针;裂解-2苗接种大鼠和家兔后的抗体反应普遍高于另2种疫苗,且家兔量-效反应明显。结论裂解-2疫苗优于其他2种;中和抗体能正确反应疫苗的质量;H5N1禽流感疫苗的效力试验可用于免疫家兔测定中和抗体和临床前研究的动物试验,用15μg血凝素（HA）接种家兔2针,血清中和抗体滴度达1：40或以上。     

评价肾综合征出血热疫苗效果的攻击毒株的选择

肾综合征出血热（HFRS）是一种严重危害人体健康的自然疫源性疾病。我国占全球发病总数的90％，病死率约为3％-10％，波及全国30个省市和自治区。在各种预防HFRS的措施中，疫苗是一种最特异和最有效的预防手段。迄今为止。本实验室已经研究出HFRSⅠ型、Ⅱ型和双价及双价纯化沙鼠肾灭活疫苗，并已取得正式生产号，为预防HFRS起到了重要的作用。而HFRS疫苗质量的好坏，对HFRS疫区的防病效果起很大的影响。考核HFRS疫苗免疫效果最常用的方法是中和抗体效价的检测。但家兔经疫苗免疫后活毒攻击，检查家兔小肠的病毒抗原是考核疫苗免疫效果最直接、方便、稳定的方法。本课题组从2001—2002年HFRS毒株浙江分离株中筛选出一株攻击家兔后小肠荧光抗原最强的矾株作为今后考核HFRS疫苗效果的攻击毒株。     

肾综合征出血热疫苗的纯化与人体观察

肾综合征出血热(HFRS)足由汉滩病毒引起的急性传染病,世界各地均有发生.用长爪沙鼠肾原代细胞培养HFRS病毒,经β-丙内脂灭活病毒,研制成功汉坦型、汉城型及汉坦型加汉城型三种疫苗,已取得很好的预防效果[1,2].为使产品的质量进一步提高,进行了疫苗纯化的研究.     

汉坦病毒G2糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其在免疫诊断中的应用

目的构建汉坦病毒(HV）Z10株包膜糖蛋白G2基因的重组表达载体，探索其在昆虫细胞中的表达及在免疫荧光诊断中的应用。方法以质粒pUCm—Z10M为模板设计引物，用聚合酶链反应(PCR)扩增Z10株G2基因片段，将G2片段克隆入pUCm—T质粒载体，碱法提取质粒pUCm-Z10-G2，酶切后将回收片段插入杆状病毒转移载体pFastBacHTa，构建重组体pFastBacHTa-Z10-G2，重组体转化感受态细胞E．coli DH10Bac后，经2轮筛选，提取重组质粒转染昆虫细胞sf9，并用间接免疫荧光技术检测表达的G2蛋白。结果获得含有编码HV Z10株的包膜糖蛋白G2基因的重组质粒，转染昆虫细胞表达出G2蛋白，与肾综合征出血热(HFRS)阳性血清反应，昆虫细胞内呈现特异性环状荧光。检测40份HFRS血清，与全病毒细胞抗原片的符合率为95％。结论成功构建HV Z10株包膜糖蛋白G2基因的表达载体，并在昆虫细胞中表达。可利用重组G2蛋白检测HV感染。     

浙江省61株嗜肺军团菌血清1型菌株的SBT序列分型

目的了解浙江省空调冷却塔/冷凝水中嗜肺军团菌血清1型(Lp1)菌株的序列分型特征。方法选取2005～2011年间浙江省10个地区空调冷却塔/冷凝水中分离的61株Lp1型嗜肺军团菌菌株,采用欧盟军团菌感染工作组(EWGLI)军团菌序列分型(SBT)方法,PCR扩增7对管家基因,对扩增产物进行测序、比对、递交,以获取等位基因号以及SBT序列型,运用DNAsp 5.0软件对测序结果进行核苷酸多态性分析,采用SplitsTree及eBURST软件对分型结果进行聚类分析。结果 61株Lp1型嗜肺军团菌可分为11种SBT序列型,其中5株(5/61)均为新发现序列型;ST-1型在10个地区(市)的冷却塔/冷凝水中均有分布,该序列型菌株占81.9%(50/61)。7个管家基因的核苷酸多态性(Pi)范围为0.01095(mip)～0.05355(pilE)。聚类分析显示,浙江省Lp1型菌株分属多个克隆系,但主要分属ST-1序列群、ST-154序列群和ST-149三大序列群,另有1株为不属于任何序列群的单体。结论聚类分析表明浙江省空调冷却塔/冷凝水中分离的Lp1型嗜肺军团菌存在遗传多样性,序列群分布与国内部分省份的结果相似,以ST-1序列型为主。     

沙畈乡肾综合征出血热控制效果分析

目的：持续观察肾综合征出血热（HFRS）高发疫区的控制情况。方法收集金华市婺城区沙畈乡5个村HFRS疫情数据,对开展灭鼠防鼠、免疫接种等综合防控工作的效果进行分析评价。结果灭鼠前后进行鼠密度测定,室外鼠密度从6.00％（18/300）下降到1.70％（5/300）;室内鼠密度从7.00％（7/100）下降到4.81％（5/104）;1997年沙畈乡5个村发病率490.23/10万。对从事野外劳动的16～60岁农民实施疫苗接种,免疫覆盖率达51.86％,免疫阳转率为97.60％,1999—2013年仅1例未接种者发病。结论以疫苗接种为主,辅以灭鼠等防制措施,对HFRS高发疫区的控制效果满意。     

肾综合征出血热的4周龄长爪沙鼠模型

目的　肾综合征出血热长爪沙鼠模型的建立。方法　 4周龄左右的长爪沙鼠 ,脑内接种肾综合征出血热 (HFRS)病毒 ,在 - 1、+1、+2、+4天注射环磷酰胺 30mg/kg体重 (第 0天感染病毒 )。结果　沙鼠由隐性感染变为急性致死性感染 ,病死率为 93%。在病死动物的脑、肺、肝、脾和肾等器官中 ,均检查到HFRS病毒抗原。结论　 4周龄长爪沙鼠模型可用于本病的研究。     

肾综合征出血热灭活疫苗大鼠效力试验模型

目前肾综合征出血热灭活疫苗效力试验采用家兔作为免疫动物 ,对疫苗免疫能产生较好的中和抗体和免疫荧光法(ＩＦＡ)抗体应答 ,但购买和饲养家兔成本较高。实验用大鼠为汉坦病毒的敏感动物 ,我们已经报道汉滩病毒 (ＨＴＮＶ)型(Ⅰ型 )肾综合征出血热灭活疫苗免疫大鼠 ,观察表明大鼠对Ⅰ型疫苗的反应性良好 ,同型中和抗体应答类似于家兔 ,异型中和抗体和ＩＦＡ抗体应答较家兔为好。我们继续研究汉城病毒 (ＳＥＯＶ)型 (Ⅱ型 )和双价肾综合征出血热灭活疫苗在大鼠的免疫反应 ,并观察了疫苗的稳定性。一、材料和方法1.动物 :大鼠 :ＳＤ品种 ,刚…