汉坦病毒Z10疫苗株M片段的克隆及在昆虫细胞表达的研究

汉坦病毒 (HTNV)Z10株是从患者血清中分离到[1] ,现已用于生产肾综合征出血热 (HFRS)Ⅰ型疫苗的毒株。自 1995年投产供应市场后 ,已在全国二十几个省市推广应用 ,目前该疫苗已接种 10 0 0余万人份 ,为控制HFRS的流行起了很好的作用。我们应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法成功地扩增出Z10株全长M基因 ,进行核苷酸序列测定 ,并与HTN型及SEO型病毒的核苷酸序列进行比较 ,从分子水平证实它与HTN血清型病毒具有很高的同源性。将M基因插入重组杆状病毒 ,感染昆虫细胞 ,成功地表达了M基因膜蛋白 ,为进一步开发基因工程疫苗打下…     

2007年浙江省鼠类感染汉坦病毒监测及病毒分离

目的了解浙江省鼠类自然感染汉坦病毒（HV）情况和病毒型别,为肾综合征出血热（HFRS）防治提供科学依据。方法采集鼠类肺组织和血清标本,用间接免疫荧光试验检测鼠血清IgG抗体,直接免疫荧光试验检测鼠肺Hv抗原。HV抗原阳性鼠肺接种Vero—E6细胞分离病毒,用HV单克隆荧光抗体鉴定分离株的型别。结果共捕获鼠形动物1129只,其中黑线姬鼠为优势种,鼠肺HV抗原阳性率为3．0％,鼠血标本IgG抗体阳性57份,阳性率8．0％。分离到6株汉滩（HTN）型病毒,其中来自黑线姬鼠5株,褐家鼠1株。结论浙江省存在以黑线姬鼠为主要传染源的HFRS疫源地,HV主要流行型别为HTN型。     

微波免疫荧光法快速检测血清抗体

目的　建立快速检测血清中肾综合征出血热 (HFRS)抗体和狂犬抗体的微波免疫荧光方法。方法　通过直接免疫荧光技术筛选出微波免疫荧光方法最适的反应条件 ;收集临床诊断疑似HFRS病人的血清和注射狂犬疫苗 5针免疫后 10d的血清各 5 0份 ,采用微波免疫荧光法快速检测血清中的HFRS抗体和狂犬抗体 ,其结果与常规的间接免疫荧光方法做比较。结果　筛选出微波免疫荧光法最适的反应条件是 40 %的微波强度反应 1min ,其次是 2 0 %的微波强度反应 2min ,其余反应条件不适合。微波免疫荧光法检出HFRS抗体阳性血清 16份 ,阳性率为 3 2 .0 % ,GMT为160 .0 ,常规免疫荧光法检出的阳性率与微波免疫荧光法一致 ,GMT为 167.1,经统计学处理 ,二者之间差异无显著性 ;微波免疫荧光法检出狂犬抗体阳性血清 43份 ,阳性率为 86.0 % ,GMT为 83 .93 ,常规免疫荧光法检出狂犬抗体阳性血清 45份 ,阳性率为 90 .0 % ,GMT为 87.70 ,经统计学处理 ,二者之间差异亦无显著性。结论　微波免疫荧光法快速、简便 ,具有高敏感性和特异性 ,可应用于快速诊断中 ,适合基层单位推广使用。     

SARS荧光免疫诊断技术研究

目的应用基因工程技术,在昆虫细胞中表达SARS核蛋白基因,产生无感染性的核蛋白抗原,利用此蛋白制备抗原片,用于检测血清中SARS特异性抗体.方法从非典型性肺炎病人血清中提取病毒RNA,通过RT-PCR方法扩增出SARS核蛋白基因片段,将核蛋白基因插入杆状病毒,构建重组昆虫杆状病毒,转染昆虫细胞,收获细胞,经丙酮固定,制成SARS抗原片,建立了SARS荧光免疫方法(IFA).结果用此抗原片检测多份血清,仅与SARS病人血清起反应,而与正常人及其它发热病人血清不起反应.结论利用该方法制备抗原片,不需要P3实验室,操作简便,为诊断与研究SARS提供了方便而安全的方法.     

人用H5N1禽流感疫苗检定评价

目的选用H5N1禽流感毒种（R1194和R1203）,按设计的生产工艺,制成的疫苗进行全面检定,选取其中较好毒株生产的疫苗,用于以后人用禽流感疫苗临床前研究的动物免疫。方法利用从国外引进2株H5N1禽流感病毒,设计生产3种疫苗（全病毒、裂解-1、裂解-2）的纯化工艺,优化纯化条件,全面检定制成的疫苗,比较2毒种生产疫苗的质量。结果2毒株在接种滴度104EID50/ml（半数鸡胚感染剂量/ml）,培养温度34.5℃,培养时间3 d的条件下,病毒增殖滴度较高;检定结果证明,制成的所有疫苗中反映质量的内毒素、卵清蛋白、总蛋白、总蛋白与血凝素之比这4项指标,明显优于国家标准;3种工艺疫苗的电镜形态完全不同;经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）,全病毒疫苗和裂解-2疫苗的蛋白条带形态相似,但裂解-1疫苗在32 KD左右的条带缺失;毒种R1203株疫苗的产量明显高于R1194株。结论设计的3种生产疫苗的纯化工艺,均可生产出高质量的疫苗;毒种R1203株的疫苗产量高于毒种R1194株;可用R1203毒株,按3种不同工艺生产的疫苗接种动物,观察免疫效果。     

汉坦病毒中国疫苗株Z10核蛋白免疫原性的研究

汉坦病毒株Ｚ10是浙江省卫生防疫站出血热重点实验室于 80年代分离成功 ,具有血凝滴度高、抗原性强等特点[1] ,后用作生产肾综合征出血热 (ＨＦＲＳ)Ⅰ型和双价疫苗的毒株 ,用该病毒株生产的疫苗接种疫区人群 ,经现场流行病学考核 ,保护率在 95 %以上 ,具有很好的防病效果[2 ] 。为研究Ｚ10株核蛋白的生物学特性 ,我们将Ｚ10株核蛋白基因插入到原核表达质粒 ｐＥＴ2 8ａ,构建成重组表达质粒 ,转化大肠杆菌ＢＬ2 1(ＤＥ3) ,进行核蛋白的表达 ,并将表达产物免疫家兔 ,研究其免疫原性 ,为进一步研究基因工程疫苗打下基础。一、材料与方法1.材料…     

冷冻鹅血球应用于肾综合征出血热血清血凝抑制抗体及分型的研究

肾综合征出血热 (ＨＦＲＳ)是由布尼亚病毒科汉坦病毒属的病毒引起 ,严重危害人类生命安全、损害健康的急性传染病。目前全世界已有 30多个国家和地区发现肾综合征出血热病例 ,至少存在 10种类型 ,在我国仅发现以黑线姬鼠传播的姬鼠型和褐家鼠传播的家鼠型病毒引起的出血热的流行〔1〕。血凝抑制试验不仅可用于该病的诊断 ,用Ⅰ型和Ⅱ型两种血凝抗原同时与病人血清做血凝抑制试验 ,还可以通过两者的血凝抑制滴度差来判定所感染的病毒类型〔2〕。该实验中 ,鹅血球是不可缺少的试剂 ,然而不同来源的鹅血球对出血热血凝抗原存在着很大的个体差…     

HFRS病毒Z37株在绿猴肾传代细胞的病变作用和传代适应

[目的]研究肾综合征出血热（HFRS）病毒39疫苗株在绿猴肾传代细胞（vero,vero-E6)上的病变和传代适应增殖情况,为应用vero细胞研制出血热疫苗提供科学依据。[方法]将肾综合征出血热疫苗株Z37适应在绿猴肾传代细胞（vero,vero-E6)上,对细胞进行细胞病变（CPE）的动态观察,并于不同的时间取样,测定病毒滴度,比较静置培养、转瓶培养滴度的差异情况。[结果]Z37株不使vero-E6细胞产生病变,用HEPES诱导,3d可见明显病变现象。Z37株不使vero细胞产生病变,用HEPES诱导病变现象未获成功,Z37株在vero细胞中可高滴度繁殖,滴度达到10^7/ml,转瓶培养病毒滴度略高于静置培养。[结论]应用vero细胞研制HFRS疫苗是可行的。     

浙江省1997至1999年肾综合征出血热监测分析

目的：通过监测分析,掌握全省肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）流行规律,控制暴发流行,进一步降低发病率,制订防制措施。方法：采用直接免疫荧光法（ＦＡＴ）检测鼠肺ＨＶ抗原;采用间接免疫荧光法（ＩＦＡＴ）检测ＨＦＲＳ病人、健康人血清以及鼠血中ＨＶ抗体。结果：１９９７－１９９９年全省共发病７５３４例,年均发病率为５．６５／１０万,死亡３９人,病死率为０．５２％。病例仍主要分布在沿钱塘江两岸的浙东和浙西丘陵区,浙     

浙江省蚊媒携带流行性乙型脑炎病毒的分布特点

目的 了解浙江部分地区蚊媒及猪携带流行性乙型脑炎(乙脑)病毒情况以及浙江省存在的乙脑病毒基因型别.方法 于2007年5月至10月在浙江省仙居、龙泉和慈溪3个县人房及猪舍采集蚊虫标本和猪血清,共采集10 662只蚊虫和204份猪血清,蚊虫标本中以淡色库蚊和中华按蚊为主.利用病毒分离和荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测蚊虫携带乙脑病毒,应用酶联接免疫吸附剂测定(ELISA)方法对猪血清进行抗体检测.应用荧光定量RT-PCR方法对细胞分离株进行病毒鉴定;利用RT-PCR方法扩增新分离乙脑病毒PrM基因,并对细胞分离到的病毒进行基因分型.结果 在蚊虫标本中检出7批乙脑病毒核酸阳性样本,并分离出3株病毒,经鉴定3株病毒均为乙脑病毒,基因分析表明3株病毒均属于基因Ⅰ型乙脑病毒.猪血清有121份阳性,总阳性率为59.3%.6月份有50%以上的猪血清中乙脑病毒抗体呈阳性.结论 浙江省部分地区存在着乙脑的传播媒介,在蚊媒和猪中携带有乙脑病毒;采集的蚊虫标本中分离到3株病毒,经鉴定为基因Ⅰ型乙脑病毒,是近年来在浙江省首次分离到的基因Ⅰ型乙脑病毒.