腹腔镜保守性手术联合GnRH-a反减疗法治疗子宫内膜异位症

目的探讨腹腔镜保守性手术后采用降低促性腺激素释放激素激动剂(GnRh-a)的剂量治疗子宫内膜异位症的疗效及其副作用。方法将腹腔镜保守性术后60例子宫内膜异位症患者随机分两组,对照组30例接受GnRh-a亮丙瑞林治疗,3.75mg,每28d1次,连续6次;观察组30例先给予亮丙瑞林3.75mg,每28d1次,连续3次后减为半量(即1.88mg),再连续3次。结果两组患者治疗后痛经、盆腔痛均较治疗前降低。治疗结束时对照组与观察组中潮热、多汗等低雌激素症状中-重度发生率分别为83.33%和26.67%,差异有统计学意义(P<0.01);对照组较治疗前腰椎骨密度明显降低,平均骨丢失5.0%,观察组平均骨丢失为1.2%。用药8周后两组血雌二醇(E2)和CA125水平均明显降低,对照组血E2波动与观察组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论以GnRH-a治疗子宫内膜异位症,在垂体功能完全抑制后将用量减半,既可使异位的子宫内膜发生萎缩,同时减轻了因卵巢功能进行性抑制而引起的潮热和骨丢失。     

丙型肝炎病毒编码蛋白的生物学功能

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)引起的传染性疾病.是慢性肝病的主要原因之一,本文系统阐述病毒编码蛋白通过直接与细胞内重要调节分子结合,以病毒-宿主细胞相互作用方式影响细胞重要的信号通路,导致细胞增殖、分化等发生异常,干扰机体免疫防御功能,削弱宿主对HCV感染细胞的抗病毒应答,有利于慢性持续性感染的建立,最终促使HCV相关肝病的发生和发展.加强对病毒蛋白生物学功能的研究,将有助于探讨HCV致病机制和免疫逃逸机制,对HCV特异靶向药物和治疗性疫苗的研究和开发也具有重要的意义.     

乙型肝炎病毒DNA转染与鸭乙型肝炎病毒DNA感染原代鸭肝细胞对比研究

目的探讨HBVDNA复制和表达的跨种属特异性,为HBVDNA转染跨种属原代肝细胞模型的建立提供实践基础和理论依据.方法分离培养原代鸭肝细胞(PDH),电转线性HBVDNA(转染组,1.19×1012拷贝/1×107PDH)或急性感染DHBV(感染组,4×108病毒颗粒/1×107PDH),分别于转染/感染后ld、3d、5d等时点检测PDH培养上清或裂解液中HBsAg、HBeAg与DHBsAg(采用IMX系统或ELISA检测);并采用DotBlotting检测PDH裂解液中总HBVDNA.于转染/感染后2d提取PDH总DNA采用SouthemBlotting分析HBVDNA与DHBV复制型式.以单纯电击或未感染的PDH为对照组.结果转染后1d、3d和5d各时点转染组PDH裂解液中HBsAg分别为15.24、14.55和5.13(P/N值,阳性≥2.1),HBeAg均为阴性;PDH培养上清中HBsAg与HBeAg均阴性;感染组各时点PDH上清中DHBsAg分别为14.6、31.53、34.73(S/N值,阳性≥2.1);上述各项指标于对照组均为阴性.DotBlotting显示转染组与感染组PDH各时点的裂解液中HBVDNA与DHBVDNA均为阳性,对照组为阴性;SouthernBlot分析显示转染组HBVDNA与感染组DHBV均为游离复制型,可见4.0kb以下分子涂抹带,包括rcDNA、cccDNA(scDNA)和ssDNA等复制中间体;未见整合型HBVDNA-高分子区(4～24kg)涂抹带.结论HBVDNA在PDH中的复制和表达与DHBV感染组相似,可能为肝细胞内环境依赖性,无严格种属特异性限制.     

葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基通过诱导细胞周期阻滞抑制肝癌细胞增殖

目的:葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基（G6PC）重组腺病毒,探究G6PC对肝癌细胞增殖及细胞周期调控的影响。方法:构建重组腺病毒AdG6PC,将Huh7细胞及SK-Hep1细胞设为Mock组、AdGFP组、AdG6PC组。采用细胞增殖实验及克隆形成实验观察其对肝癌细胞增殖的影响,transwell实验及划痕实验观察其对肝癌...     

重组泡球蚴主要表面抗原在棘球蚴病免疫诊断中的效果

目的 研究非融合表达重组抗原用于棘球蚴病免疫诊断的效果。方法 将泡球蚴主要表面抗原基因编码序列克隆于原核非融合表达载体pQE30（＋）并进行表达。以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）及免疫印迹（WB）试验对重组抗原鉴定。亲和层析纯化重组抗原，用于酶联免疫吸附法（ELISA）检测患者血清特异性抗体。结果 SDS—PAGE及WB分析显示泡球蚴主要表面抗原基因在大肠埃希菌内得到了高效非融合表达。以此重组抗原进行ELISA试验，检测棘球蚴病68例，阳性率达97．1％，检测囊虫等其他感染性疾病80例及健康人血清20份，阴性符合率达98％。结论 泡球蚴主要表面抗原基因在大肠埃希菌中获得了高效非融合表达，以该重组抗原建立的ELISA试验，对棘球蚴病诊断具有较高的敏感性和属特异性。     

泛昔洛韦治疗乙型肝炎相关疾病研究进展

本文就近两年泛昔洛韦用于治疗慢性乙型肝炎、肝移植术后预防乙型肝炎病毒(HBV)再感染的相关进展、长期治疗后出现的耐药突变以及其他核苷类似物的交叉耐药等问题作了综述。     

重组抗原CP4-EPSPS的表达及免疫学活性研究

目的：表达并纯化重组CP4-EPSP合成酶（CP4-EPSPS），研究重组CP4-EPSPS的免疫学活性；为进一步制备单克隆抗体和开发检测CP4-EPSPS的快速诊断试剂奠定基础。方法：诱导表达含转基因大豆CP4-EPSPS的重组载体pET-EPSPS。经Ni-NTA琼脂糖树脂亲和层析纯化，以ELISA、胶体金试条、Western杂交鉴定其免疫活性。结果：重组CP4-EPSPS以包涵体表达为主，上清表达量极低，但胶体金试纸条检测发现上清中CP4-EPSPS抗原活性强；复性包涵体的抗原性与上清的抗原性明显不同。采用扩大培养量、缩小超声破碎重悬体积的方法，从上清中纯化CP4-EPSPS获得成功，ELISA检测此重组抗原免疫小鼠血清抗体滴度可达到1：625，000；Western杂交证实重组抗原免疫血清与CP4-EPSPS标准品有较好的免疫反应性。结论：包涵体的简单复性方法难以恢复其关键的抗原决定簇的免疫原性；运用胶体金试纸条检测重组CP4-EPSPS活性，灵敏度高，简单快捷，对CP4-EPSPS特异检测相关的关键性抗原决定簇的甄别有重要作用，可指导重组抗原的纯化和在免疫学研究、特别是在单克隆抗体开发中的应用。     

不同靶区RNA干扰抑制乙型肝炎病毒复制与表达

目的 观察针对乙型肝炎病毒（HBV）不同靶区发夹样RNA（shRNA）抑制HBV复制与表达的效率。方法 根据shRNA表达载体设计原则，设计并构建了针对HBVP、C、S和X区7种特异性和2种序列突变的shRNA表达载体，将其与1．3倍HBV全基因表达载体共转染于HepG2细胞，通过Southernblot和酶联免疫吸附法分别检测HBV DNA复制中间体和乙型肝炎表面抗原（HBsAg）水平，来观察shRNA抗HBV复制与表达的效率。结果 发现针对HBV不同靶区shRNA均有抗HBV复制和表达效果，以P1、S2、C2、S1和X抑制HBV DNA复制效率较高，P1的抑制率高达95％。HBsAg表达受抑制情况与HBV DNA复制受抑制的程度相似，其中C2、C1和S2对HBsAg的抑制作用较强。结论 针对HBV四个开放性读码框进行RNA干扰对HBV复制和抗原表达均有抑制作用，其中P1和C2分别对HBV复制和表达的抑制效率较高。     

肿瘤特异性Survivin启动子与甲胎蛋白启动子的活性评价与比较

目的研究并比较肿瘤特异性Survivin和甲胎蛋白(AFP)基因启动子在不同肝细胞癌细胞系中的转录活性，为肝癌靶向性基因治疗提供依据。方法采用聚合酶链反应法扩增获得Survivin和AFP基因的启动子片段，并克隆入表达虫荧光素酶基因的报告质粒中，通过测定荧光素酶报告基因的表达情况，测定Survivin与AFP基因启动子的转录活性，同时采用巨细胞病毒启动子为对照，评价其转录活性水平。结果Survivin启动子在肝癌细胞中具有相当强的活性，其活性水平在高表达AFP的肝癌细胞中为AFP启动子的54～100倍，达到巨细胞病毒启动子活性的16％～21％。结论Survivin启动子在肝癌细胞系中具有较强的启动活性，可望开发成为新的肝癌靶向性基因治疗工具。     

特异性SARS-CoV N蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位初步分析

目的：用分段表达纯化的SARS冠状病毒（SARS-CoV）的核衣壳蛋白（nucleocapsid N蛋白）制备针对该蛋白不同区域抗原表位的高特异性单克隆抗体（McAb）,初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。方法：用分段表达纯化的SARS～CoV的N蛋白（分别记为N1蛋白、N2蛋白）分别免疫Balb／c小鼠制备McAb,通过检测其亚类、效价及相对亲和力鉴定McAb的生物学特性,以Western blot鉴定单克隆抗体特异性,并对McAb结合表位进行初步分析。结果：筛选出7株抗SARS-CoV N1蛋白及2株抗SARS-CovN2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定6株为IgG1,2株为IgG2b,1株为IgG3,腹水效价10^5以上;亲和常数达10^8以上。Western blot证实所获的单克隆抗体可与SARS-CoVN蛋白发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示2株N1 McAb识别相同的抗原表位,其余均识别不同的抗原表位。结论：通过分段表达纯化的SARS-CoVN蛋白而制备的特异性针对SARS-CoV N蛋白不同区域抗原表位的单克隆抗体中,N1单抗识别N蛋白N端（1-549bp）,N2单抗识别N蛋白C端（496～1269bp）,可初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。