大鼠肝卵圆细胞增殖模型建立及其表面标记检测

本文拟建立大鼠卵圆细胞增殖模型,分离纯化卵圆细胞并对其特性进行研究。给SD大鼠喂饲2-乙酰氨基芴(2-AAF),剂量分别为5、10、15、20mg／kg,连续给药6d,第7天行三分之二肝切除术,术后继续给药1周,并于术后每隔3d取肝组织行常规组织学观察、细胞增殖试验及免疫组化染色。经免疫磁珠标记C-kit阳性细胞以纯化卵圆细胞,再经免疫细胞化学及RT-PCR对其进行鉴定。结果显示,10、15、20mg／kg三种剂量2-AAF均可成功建立卵圆细胞增殖模型,卵圆细胞增殖于第8天较明显,至第11天达高峰,第14天有所减少。卵圆细胞胞核Brdu染色阳性,卵圆细胞表达特异性抗原OV6、肝细胞标记白蛋白、胆管细胞标记CK19、甲胎蛋白以及连接蛋白43,同时还表达造血干细胞标记C-kit。实验表明,2-AAF剂量为10～20mg／kg时可获得较理想的大鼠卵圆细胞增殖模型,增生的卵圆细胞为具有双向分化潜能的肝干细胞,前体细胞。     

重组人生长激素治疗肝硬化低蛋白血症疗效分析

我们从 1 999年 1 0月起试用重组人生长激素治疗肝硬化低蛋白血症患者 3 0例 ,效果良好 ,现报告如下。对象与方法一、对象血清白蛋白含量低于 3 5 ｇ/Ｌ的肝硬化患者 5 0例 ,随机分成治疗组 (ＧＨ组 ) 3 0例和对照组 2 0例。其中治疗组男 2 2例 ,女 8例 ,年龄 2 5～ 64岁 ,平均(4 8 1± 1 0 1 )岁 ;对照组男 1 5例 ,女 5例 ,年龄 2 5～ 65岁 ,平均 (4 8 0± 1 0 2 )岁。两组患者在性别、年龄、Ｃｈｉｌｄ分级和血清白蛋白水平分布上均无显著性差异。二、方法ＧＨ治疗组患者给予重组人生长激素 (由安科生物工程股份有限公司提供 ) 4Ｕ皮下…     

肝纤维化血清标志物与病理的关系

慢性肝病进展为肝纤维化有诸多病因,在我国病毒性肝炎是最常见的原因.近年来,试图寻找一种简便和无损伤的方法,特别是血清学的诊断方法.本研究对66例慢性肝病患者的肝活检和外周血清中透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型胶原(PⅢP)、Ⅳ型胶原(IV-C)和甲胎蛋白(AFP)的检测水平进行对照,比较其一致性.     

破伤风的监护治疗——附100例治疗、并发症和死亡率的分析

本文报道1961年～1977年英国Leeds总医院监护病房治疗100例破伤风的经验。其中男性75例,女性25例。年龄为5～87岁,以儿童和老人发病最多。100例中65例发现伤口,其中仅17例培养出破伤风梭状芽胞杆菌,大部分病例伤口不严重,其中30例甚至当时未作处理。5例可能是由于下肢曲张静脉溃疡感染所引起。25例接受破伤风类毒素,21例接受预防性抗     

内毒素在重型肝炎中的作用机制

内毒素参与了重型肝炎的病理过程。重型肝炎患者的肠道屏障功能减弱,机体对内毒素的清除能力下降,存在明显的内毒素血症,从而对肝脏造成二次损伤,本文就近年来关于内毒素在重型肝炎中的作用机制方面的研究作了综述。     

复方鳖甲软肝片抗肝纤维化的临床评价

单用复方鳖甲软肝片,3次/d,每次4片,口服,治疗符合2000年9月《病毒性肝炎防治方案》中慢性肝炎后肝硬化(代偿期)诊断标准者12例。均伴有血清学肝纤维化指标增高,其中9例男性,3例女性,年龄在27～67岁,平均43.8岁;病程3～32年,平均9.8年;病种为乙型肝炎11例(其中失访1例),丙型肝炎1例,疗程半年。其中6例患者作了治疗前后二次肝穿刺。     

逆转录病毒载体介导β-gal基因在原代大鼠肝细胞的表达

逆转录病毒载体被广泛用于移植肝细胞的基因标记和肝病的体外基因治疗。但重组逆转录病毒的感染需要靶细胞处于分裂增殖状态 ,而原代大鼠肝细胞增殖能力弱 ,逆转录病毒感染效率低 ,近年来采用生长因子刺激肝细胞增殖 ,取得了较好效果[1] 。本实验观察了含表皮生长因子 (ＥＧＦ)的培养条件下 ,双顺反子逆转录病毒载体介导 β ｇａｌ基因表达于肝细胞的效率。材料与方法一、材料Ｓｐｒａｇｅ Ｄａｗｌｅｙ雄性大鼠 (15 0～ 2 0 0ｇ)由上海第二医科大学动物房提供。培养基Ｍ199和ＭＥＭ :ＧＩＢＣＯ。小牛血清 (ＦＣＳ) :杭州四季青公司。其余…     

小鼠半胱天冬酶-12特异性小干扰RNA真核表达载体的构建及鉴定

目的 构建小鼠半胱天冬氨酸蛋白酶-12（Caspase-12）基因特异性小干扰RNA（siRNA）表达载体并检测其表达。方法 参照siRNA模板设计原则，设计并合成3对针对caspase-12不同位点的siRNA，分别在脂质体介导下转染小鼠肝癌细胞株Hepal-6，24h收集细胞；RT-PCR分析不同位点siRNA对靶基因mRNA表达的抑制，筛选出抑制效率最高的位点；将此位点siRNA模板序列插入质粒pRNAT-H1．1Neo中，PCR分析及基因测序进行鉴定；构建成功的重组质粒转染Hepal-6细胞48h和72h后，实时荧光定量PCR分析caspase-12 mRNA表达；Western印迹检测Caspase-12的表达。数据行t检验。结果 RT-PCR分析表明，第-对siRNA（siRNA＊1）对caspase-12基因表达的抑制效率最高；重组质粒pRNAT-H1．1Neo-caspasel2（pRNAT-caspl2）经PCR分析及测序表明，siRNA＊1模板序列成功插入预计位点，且序列正确；pRNAT-caspl2转染Hepal-6细胞48h和72h后，与空质粒对照组相比，caspase-12 mRNA水平分别下降72．5％和59．5％（P〈0．05）；pRNAT-caspl2转染后，caspase-12酶原表达量在24、48和72h分别下调17．1％、37．3％和60．1％，48h和72h的抑制率比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 成功构建小鼠caspase-12特异性siRNA真核表达载体，它对小鼠肝癌细胞caspase-12基因的表达具有显著和特异的抑制作用。     

膦甲酸钠治疗重度慢性乙型肝炎的临床研究

目的探讨膦甲酸治疗重度慢性乙型病毒性肝炎的疗效和安全性。方法208例患者按1：1随机分为治疗组和对照组，治疗组109例，膦甲酸钠注射液3．0g／250ml静脉点滴，每日2次，疗程4周。对照组为99例，等渗盐水250ml静脉点滴，每日2次，疗程4周，随访24周。结果用药4周时，治疗组和对照组的HBV DNA阴转率分别为12．8％和7．1％，随访24周时分别为5．5％和3．0％，差异无统计学意义。治疗组治疗后HBV DNA≤10）拷贝／ml在用药4周．停药随访24周分别为64．2％（70／109）和40．4％（44／109），对照组分别为30．3％（30／99）和22．2％（22／99），x^2值分别为24．466和8．962，P值均〈0．01，差异有统计学意义。HBeAg转阴率用药4周、随访24周，治疗组分别为17．3％（14／81）、22．0％（11／50）；对照组分别为5．8％（5／87）和5．4％（4／74），P值分别为0．0266和0．0096，差异有统计学意义。HBeAg血清转换率用药4周、随访24周，治疗组分别为12．7％（10／79）和16．7％（8／48）；对照组分别为3．7％（3／82）和1．5％（1／69），P值分别为0．0445和0．0034。差异有统计学意义。治疗结束时，应答率分别为60．6％和21．2％，Z=5．6683，P〈0．05。结论膦甲酸钠注射液治疗重度慢性乙型病毒性肝炎有较好的疗效和安全性。     

IL-18、TNFα在脂多糖介导的急性肝坏死发生中的作用研究

目的探讨IL-18、TNFα在急性肝损伤中的作用.方法采用D-氨基半乳糖(D-Gal)900mg/kg与脂多糖(LPS)10μg/kg诱导BALB/C小鼠急性肝坏死动物模型,腹腔内注入D-Gal/LPS后0～9h分别检测血清转氨酶(ALT、AST)、肝组织病理、DNA梯形条带,评估肝损伤情况;用半定量RT-PCR和相应的分析软件分析不同时间点肝组织中IL-18 mRNA、TNFαmRNA表达及ELISA试剂盒检测血浆IL-18、TNFα的蛋白表达.结果D-Gal/LPS给予后4h血清转氨酶明显升高,7h小鼠开始死亡,10h死亡率达80%.肝组织病理学检查发现,5h肝窦扩张、炎性细胞浸润、库普弗细胞增生;7h肝细胞大量凋亡、坏死或肝组织出现大量出血性坏死;5h电镜示肝细胞核仁碎裂、线粒体肿胀或空泡变性;7h核仁边聚,呈半月型,表现为典型的凋亡形态学变化,线粒体大部分空泡变性.DNA电泳显示5h始出现梯形条带.正常情况下肝组织IL-18 mRNA少量表达,经D-Gal/LPS诱导后小鼠肝组织IL-18 mRNA表达量明显增加,表达高峰在LPS刺激后1～2h(与0h比较,P＜0.01);正常情况下肝组织TNFα mRNA不表达或呈微弱表达,但在该模型诱导过程中肝组织TNFα mRNA有不同程度的表达,且其表达的时间模式与IL-18 mRNA不同,TNFα mRNA表达高峰见于LPS刺激后2h和5h(与0h比较,P＜0.01).血浆IL-18、TNFα蛋白表达也与mRNA表达一致.结论本实验诱导的急性肝坏死模型中,肝细胞凋亡和坏死同时存在,在肝细胞坏死的发生过程中细胞因子IL-18 mRNA、TNFα mRNA及其蛋白在肝内的表达量明显增多,其变化早于转氨酶指标和组织学变化,而且在LPS刺激后IL-18 mRNA的表达先于TNFαmRNA,提示IL-18、TNFα均参与了此型肝损伤,且IL-18可能是TNFα的上游细胞因子.