三七总皂苷诱导造血细胞基因表达谱的体外实验研究

目的采用cDNA芯片技术分析三七总皂苷（PNS）诱导造血细胞的基因表达谱,探讨上调基因与细胞增殖、分化的相关性。方法选择增殖、分化相关重要的功能基因480个,制备cDNA膜芯片。人造血细胞巨核系CHRF-288、粒系HL-60和红系K562细胞经PNS处理后,分别提取mRNA,经逆转录后用[a-^33P]dATP标记,与芯片的cDNA杂交。结果PNS诱导表达上调3倍以上的基因按功能分11类,包括甲基和乙酰化转移酶、诱导分化、抑制凋亡、转录调控蛋白、周期蛋白、信号传递介导蛋白和激酶、受体、DNA和RNA聚合酶,以及大鼠肉瘤（RAS）基因家族等。PNS诱导CHRF-288、HL-60和K562细胞后,mRNA表达水平上调3倍以上的基因分别为78条、89条和59条,占检测基因总数的16．3％、18．5％和12．3％。结论PNS诱导上调的基因均与细胞增殖和分化相关,与我们报道的血液病动物模型、造血干／祖细胞、基因转录调控和蛋白激酶等研究结果相符,为PNS的作用提供了基因表达谱方面的有力证据。     

遗传与智力发育

智力是一种复杂性状,许多遗传因素与环境都可以对智力发育产生影响.基因对智力影响的数量效应以及作用特点仍未完全确定.近几十年来,遗传学研究提示许多基因及其变异与智力水平之间的关系可以是正向作用,也可以是负向作用.这些复杂的模式都需要进一步研究.     

基因与基因检测

一、基因 基因是DNA(脱氧核糖核酸)分子上具有遗传效应的特定核苷酸序列的总称,是具有遗传效应的DNA分子片段.现在确定人类有27000条基因.基因位于染色体上,并在染色体上呈线性排列.基因不仅可以通过复制把遗传信息传递给下一代,还可以使遗传信息得到表达.每个基因含有一套指导信息,通常编码一个特定蛋白.基因通过它们编码的蛋白质行使其功能,决定人体发展过程.基因决定了蛋白质的生成,不同的基因中,脱氧核糖核酸的顺序不同,所产生的蛋白质也不同,这些蛋白质有的用作细胞的结构成分,有的参与调节细胞的功能,成为细胞生命活动的基本组成部分.     

野生型p53基因对白血病K562细胞的增殖抑制作用

目的:建立携野生型p53基因的K562细胞株,研究该细胞内野生型p53基因的表达并观察其生物学特性。方法:构建重组人p53逆转录病毒载体,导入PA317细胞中进行包装,经过病毒滴度测定,筛选高滴度的产病毒细胞克隆。收集培养上清液中的重组人p53逆转录病毒颗粒,感染K562靶细胞,建立携野生型p53基因的K562细胞株。观察该细胞株的生长方式、形态学和生长速度。SP免疫组化染色法检测p53蛋白表达。进一步用流式细胞仪检测p53蛋白表达率和细胞周期变化;双层软琼脂培养实验检测细胞的增殖潜能改变。以pBabe空载体同时实验,作为各阶段的对照。结果:成功地构建了重组逆转录病毒载体pBabe/p53;获得逆转录病毒生产PA317/p53细胞系,最高病毒滴度为4.64×105CFU/m l;获稳定表达p53基因的K562/p53靶细胞,免疫组化结果证实该细胞内有野生型P53蛋白表达,流式细胞仪检测到野生型P53蛋白表达率为1.32%;与对照K562/pBabe细胞比较,K562/p53靶细胞的生长速度下降;软琼脂集落生成的下降率为27.14±4.49%(P<0.05);增殖指数下降,S期比例下降(P均<0.01)。结论:制备了携p53基因的高滴度逆转录病毒,建立携野生型p53基因的K562/p53细胞株,证实表达的野生型p53蛋白对该细胞有抑制作用。     

煤尘致家兔肺部早期病变的形态学观察

近年来,煤尘致肺纤维化的观点已为多数学者接受;但也有人仍持不同见解。作者曾用体外细胞培养法证实煤尘通过促使肺泡巨噬细胞释放溶酶体酶和(或)促纤维母细胞增殖因子,以及直     

线粒体遗传性疾病

线粒体疾病是一类异质性临床疾病,它是线粒体呼吸链功能障碍的结果.该疾病可能是由于核DNA或线粒体DNA(mtDNA)发生突变所致.某些线粒体疾病仅影响某种器官(如Leber遗传性视神经病变仅影响眼睛,但大多数还是涉及多种器官系统,而且常常表现出显著的神经病学和肌病特征.     

蒙药伊赫哈日-12对醉酒小鼠血液酒精含量的影响

目的:观察蒙药伊赫哈日-12对醉酒小鼠血液酒精含量的影响。方法:制备醉酒小鼠模型,采用葛花解酲汤及伊赫哈日-12灌胃干预,以蒸馏水为对照,以小鼠全血乙醇含量为观测指标,分析比较各方对小鼠全血乙醇含量的影响作用。结果:伊赫哈日-12可以明显降低饮酒后各时段全血酒精含量,与模型组比较差异具有显著性(P0.05);蒙药伊赫哈日-12可以取得与中药葛花解酲汤相一致的效果,两者比较无显著性差异(P0.05)。结论:伊赫哈日-12可以有效降低实验性醉酒小鼠血液酒精含量。     

2001~2011年中国中西部城市地区急性心肌梗死患者住院期间他汀应用变化趋势及影响因素—— China PEACE 回顾性急性心肌梗死研究

目的 了解2001至2011年间中国中西部城市地区急性心肌梗死(AMI)患者住院期间他汀类药物的使用情况和变化趋势,并探讨其使用的影响因素。 方法 通过两阶段随机抽样设计,获得中国中西部城市地区AMI患者代表性样本。第一阶段,采用简单随机抽样确定协作医院。第二阶段,选取2001、2006和2011 3个特定年份,在协作医院中采用系统随机抽样方法,抽取研究病历,提取临床信息。对每年度分别进行加权处理。采用二元Logistic回归模型分析影响他汀使用的因素。 结果 共计31家医院3354份AMI病历纳入研究。2001、2006和2011年,AMI患者院内他汀的使用率随着年份递增而大幅增加,分别为19.7%、79%、91.1%(趋势P值<0.001)。不同低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)水平的患者院内接受他汀治疗率均随年份递增显著增加。主要他汀类药物的使用类型所占比例变化明显,2001年洛伐他汀使用比例最大,2011年阿托伐他汀成为最常用的他汀类药物。多因素模型分析中,吸烟患者较不吸烟患者更容易接受他汀类药物治疗(OR 1.6,5%CI 1.07~1.73, P=0.011)。 结论既往10年间,中国中西部城市AMI住院患者的他汀使用情况明显改善,指南对于他汀的推荐在临床实践中得到快速普及,但仍存在改善空间。     

三七皂苷对造血细胞AP-1家族转录调控蛋白NF-E2,c-jun和c-fos的诱导作用

为了进一步研究三七总皂苷(PNS)对转录调控蛋白AP-1家族的主要成员NF-E2、c-jun和c-fos转录因子的诱导作用，探讨PNS在造血细胞内的信号传递途径，选用人粒系HL-60、红系K562、巨核系CHRF-288和Meg-01 4个细胞株作靶细胞，经PNS刺激处理后提取细胞核蛋白，分别用人抗NF-E2、c-jun和c-fos抗体与核蛋白作Western blot杂交试验，并用^32P标记的具有与NF-E2、c-jun和c-fos转录因子共同结合位点的AP-1双链寡核苷酸探针作电泳带移动阻滞试验(EMSA)。结果表明：①western blot显示PNS诱导HL-60，K562，CHRF-288和Meg-01 4株细胞的NF-E2和c-jun转录因子蛋白水平分别是未经处理细胞的1．5-2．5倍和2．0—3．0倍。诱导的c-fos蛋白在K562，CHRF-288和Meg-01 3株细胞分别提高2．0—3．0倍，但HL-60细胞的c-fos在PNS处理后无明显变化；②EMSA显示AP-1转录调控蛋白与DNA结合复合物的特异性条带，经PNS诱导后4株细胞的AP-1蛋白与DNA复合物条带密度明显高于未经处理的细胞。结论：PNS在造血细胞内对基因的转录调控涉及到AP-1家族转录因子成员NF—E2、c—jun和c—fos，通过诱导这些转录因子量的增加，与特异性DNA促进子结合的活性增高而调控与细胞增殖分化相关的基因的表达。     

人参皂甙治疗难治性血液病及对造血相关基因的转录调控

目前国内外用于治疗难治性血液病的强的松、雄激素和输血等常规疗法效果差且副作用明显,寻找高效低副作用的新药很有必要。本项目系与澳大利亚新南威尔士大学国际合作项目,受澳政府资助,又是国家中医管理局的重点课题,共有论文20篇,获浙江省科技进步三等奖和省中医药科技