反义VEGF165真核表达载体的构建和表达

目的 进行抗血管生成治疗人脑胶质瘤实验,构建和鉴定携带人反义VEGF165基因的真核表达载体。方法 将VEGF165cDNA反向克隆入pcDNA3,构建CMV启动子控制的真核表达载体pcDNA-AVEGF165,用酶切鉴定结果;应用该载体转染人脑胶质瘤细胞SHG44,G418筛选阳性克隆;Western blot和免疫组化检测转染前、后瘤细胞的VEGF表达。检测转染前、后瘤细胞的生物学性状。结果 获得反向构建的pcDNA-AVECF165真核表达载体,VEGF165反义RNA阻断了SHG44细胞的VEGF表达,该细胞生物学性状不受外源基因的表达影响。结论 成功构建的反义VEGF165真核表达载体,为人脑胶质瘤的反义基因治疗提供了必要的条件。     

人内皮抑素基因的克隆与测序

目的　获得人内皮抑素 (endostatin)功能区段基因片段 .方法　从人肝组织提取 m RNA,用反转录聚合酶链反应技术克隆 endostatin基因 ,2 0 g· L- 1 脂糖凝胶电泳后将其重组入 p UC19载体 ,双脱氧末端终止法测定其核苷酸序列 .结果　经 Genbank分析证实 ,所获得的 5 5 2 bp基因片段属于endostatin功能区段基因 ,序列正确 .结论　本研究为应用endostatin基因进行实体瘤抗血管生成治疗奠定了基础     

一起因加工动物内脏引起的布鲁氏菌病聚集性疫情分析

目的 调查一起由加工动物内脏导致的布鲁氏菌病聚集性疫情, 为布鲁氏菌病预防与控制提供借鉴。方法 通过对医院、村庄进行主动搜索,检索医疗机构上报的传染病报告信息管理系统等方式获得该区的人间布病病例,采取现场查看、当面访谈和电话调查的方式开展病例个案调查,同时完成病例标本实验室检测。结果 本起布病疫情共报告2例确诊病例和9例隐性感染者。虎红平板凝集实验、试管凝集实验（SAT）均为阳性。结论 根据患者临床表现、流行病学调查以及实验室检测结果,该起布鲁氏菌病聚集性疫情是由加工羊内脏引起的。应强化生物安全意识,落实防护措施。     

南昌市 2010—2020年流行性感冒监测结果分析

目的 分析2010—2020年度南昌市流行性感冒（简称“流感”）的流行病学特征及病原学分布规律,为防控提供科学依据。方法 收集南昌市2010—2020年度南昌大学第一附属医院、江西省儿童医院、南昌市第三医院3家流感监测哨点医院的流感监测数据、病原学监测数据和暴发疫情资料,利用SPSS 22.0软件进行χ2检验。结果 南昌市2010—2020年度流感样病例（influenza-likeillness,ILI）各年度总体趋势先降后升,≤4岁年龄组构成比占比最高,占49.04%(155 064/316 223);共检测ILI样本25 813份,流感病毒核酸检测阳性检出4 045份,阳性检出率为15.7%,不同年度阳性检出率差异有统计学意义（χ2=388.44,P<0.001）,且各年度流感优势毒株不同;共报告54起流感样病例暴发疫情,绝大部分发生在托幼机构和中小学,其中26起是由B型流感导致。结论 2010—2020年度南昌市流行性感冒疫情冬春季高发,每年的流行毒株各不相同,呈交替或混合流行,托幼机构和中小学是较易发生流感疫情的场所,应加强流行性感冒监测和防控并提高重点人群流感疫苗接种...     

南昌市巩固灭鼠成果技术措施研究

南昌市城区辖东湖、西湖、青云谱3个区,设有31个街道办事处,总人口约109万,面积65ｋｍ2,新旧建筑物参差相间,灭鼠难度较大。1987年1月全市开展大面积灭鼠活动,一举达标,以后逐年开展此项活动,1990年10月通过省爱卫会的考核验收,1991年9月获“全国灭鼠先进城区”称号,1998年4月通过全国爱卫会的复查。本文根据1979～1998年的灭鼠成果,对南昌市创建和巩固“全国灭鼠先进城区”的技术工作进行了分析和探讨。1　鼠情调查1.1　鼠种构成　1979年在南昌、新建两县各选择1个乡进行鼠类生态学调查,野外全年布放24000夹次,捕获鼠类554只,捕获率为2.31%…     

人源性脑胶质瘤噬菌体抗体库的构建

为构建人源性脑胶质瘤噬菌体抗体库 ,从脑胶质瘤患者外周血淋巴细胞 (PBL)中提取细胞总RNA ,经逆转录后用套式PCR分别扩增抗体轻链Vκ和重链VH基因。先构建Vκ基因库 ,并使连接Vκ和VH基因的linker与Vκ基因连接 ,再将VH基因克隆入Vκ基因库 ,即构建成功单链抗体 (ScFv)库。随机挑取菌落鉴定 ,测序表明从PBL中扩增出人源性Vκ和VH基因 ,并构建了库容量约为 2× 10 6的ScFv噬菌体抗体库。随机挑取克隆的测序表明 ,测定的VH基因与Kabat的抗体基因库中人抗体VH基因有较高的同源性 ,证明所克隆的基因属人抗体可变区基因。结果表明实验构建成人源性脑胶质瘤噬菌体抗体库 ,为进一步筛选人源性抗脑胶质瘤抗体奠定了基础     

外源性PTEN基因稳定转染对SHG44细胞周期和增殖的影响

以PTEN基因真核表达载体体外转染SHG44细胞,筛选稳定转染的细胞克隆并扩增培养,以原位杂交、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况,并研究了PTEN基因对胶质瘤细胞周期、超微结构、生长速率等特性的影响,观察导入人PTEN基因对SHG44细胞裸鼠致瘤能力的影响。结果表明,稳定转染PTEN基因的SHG44胶质瘤细胞中PTEN基因和蛋白均稳定表达,细胞周期明显改变,细胞从G1期到S期发生抑制,细胞超微结构有退行性改变,细胞增殖活性及裸鼠致瘤能力显著降低。提示转染外源性PTEN基因可阻止SHG44胶质瘤细胞由G1期进入S期,并抑制肿瘤细胞增殖。     

Angiostatin K(1-3)基因的原核表达和活性鉴定

将入ＡｎｇｉｏｓｔａｔｉｎＫ（１－３）基因在原核细胞表达并鉴定其活性。构建和鉴定ＡｎｇｉｏｓｔａｔｉｎＫ（１－３）原核表达载体并在大脾性杆菌ＤＨ５α内表达,诱导表达蛋白用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定,采用人脐带静脉内皮细胞抑制实验和鸡胚绒毛膜尿囊膜试验验证其活性。ＡｎｇｉｏｓｔａｔｉｎＫ（１－３）功能区基因在原核细胞获得成功表达,目的蛋白牛菌全总蛋白１５．７％。该表达蛋白捅抑     

绿色荧光蛋白转染胶质瘤细胞的体内实验研究

 目的　利用体外转染绿色荧光蛋白 (Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)基因的胶质瘤细胞建立大鼠移植模型 ,并探索利用该模型研究肿瘤体内侵袭的可行性。方法　携有EGFP基因的 p EGFP- N3质粒体外转染 C6胶质瘤细胞 ,筛选稳定表达 GFP的细胞克隆并以立体定向法植入 SD大鼠脑实质内建立肿瘤移植模型。 4周后处死大鼠并制作连续石蜡切片 ,相邻切片分别作 HE、免疫组化染色和荧光显微镜检测。结果　GFP于体内稳定表达 ,在荧光显微镜下可较容易区分肿瘤细胞和非肿瘤细胞 ,并能检测到侵袭至远端的单个肿瘤细胞 ,其检测效率明显高于HE和免疫组化染色。结论　EGFP基因体外转染 C6胶质瘤细胞并建立大鼠脑内肿瘤移植模型 ,是研究胶质瘤体内侵袭的有效模型和方法。     

整合素β1 基因在人脑胶质瘤中的表达与临床意义

 目的　检测脑胶质瘤中整合素 β1基因表达 ,阐明其临床意义。方法　应用免疫组化和原位杂交法 ,分析 53例人脑胶质瘤整合素 β1基因表达 ,对患者随访并比较其预后。结果　整合素β1蛋白阳性率 ,在 ～ 级脑胶质瘤分别为 36.3%、38.5%、72 .2 %和 81 .8% ,高级别 ( ～ )高于低级别 ( ～ ) (P<0 .0 5) ,其 m RNA表达同其蛋白表达。高表达整合素β1的患者预后较差。结论　整合素β1的高表达与脑胶质瘤分化程度低、侵袭性强密切相关 ,是预测患者预后的较好标示物。