siRNA干扰人胃癌细胞系IGFBP2表达的实验研究

目的：利用慢病毒包装系统构建IGFBP2基因靶向的表达载体,转染到胃癌细胞株SGC-7901中,检测该细胞中基因表达的沉默效果,同时初步观察基因表达抑制后对细胞生物学行为的影响。方法：用反转录聚合酶链式反应检测各组细胞系中m-RNA（IGFBP2,IGF和IGFR）表达,同时利用western blot技术检测干扰前后IGFBP2、IGF和IGFR的蛋白表达水平,最后用MTT方法检测细胞转染前后的增殖情况。结果：①初步筛选得到27个候选片段,对这些候选序列通过同源序列检索和进一步优选,最终确定5’target 564-582位（ggttgcaga-caatggcgat）5’target923-943位（gcctgtacaacctcaaacagt）为靶序列,并选择一无关对照的发卡样DNA序列。②成功构建重组子PLL3.7 1,PLL3.7 2和PLL3.7 Con,利用酶切筛选和测序验证,分析其序列与设计完全一致。③转导48h后用荧光显微镜观察胃癌细胞可看见大量eGFP表达,经筛选转染细胞得到siRNA稳定表达的细胞系。④转染IGFBP2靶向siRNA（PLL3.7 1,PLL3.7 2）SGC-7901细胞,IGFBP2基因的表达水平明显降低,RNA水平上IGFBP2有73.9%的下调,在蛋白水平上有约77.8%的下调;转染无关siRNA（PLL3.7 Con）的SGC-7901细胞,IGFBP2 mRNA表达水平不降低。⑤从细胞增殖实验结果看,转染后的细胞生长比未转染的细胞要快。结论：①成功地构建出针对IGFBP2的siRNA表达载体PLL3.71,PLL3.72和无关siRNA表达载体PLL3.72Con,靶向siRNA表达载体转染胃癌细胞SGC-7901后能显著降低细胞中的IGFBP2表达。②通过siRNA沉默降低IGFBP2的表达后,将促进肿瘤细胞SGC-7901的生长。     

乙酰肝素酶mRNA在肝细胞癌中的表达及点突变研究

目的 探讨乙酰肝素酶（HPA）mRNA在肝细胞癌（HCC）中的表达及点突变的意义。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测33例HCC中HPA的表达，用T—A克隆测序法检测其扩增产物有无突变，并与HCC临床病理学指标分析。结果 有16例癌组织HPA表达阳性，阳性率（48．5％）显著高于癌周肝组织（P〈0．01）。术后转移复发组HPA阳性率显著高于无转移复发组（P〈0．01）。7例PCR产物测序发现有4例均存在2处点突变，其中一处为有义突变，突变率为57．1％。结论 HCC中HPAmRNA表达率增高，可作为HCC术后预测转移复发的一个重要指标。HPA基因点突变可能是其表达率增高的原因之一。     

泛素连接酶hrd1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究泛素连接酶hrd1(hydroxymethylglutaryl reductase degradation 1,hrd1)在胃癌及癌旁组织中的表达水平,以此探讨hrd1在胃癌发生发展中的意义。方法:收集临床胃癌组织及距癌灶边缘5cm以上胃壁组织,应用免疫组织化学SP法研究63例胃癌(实验组)及其癌旁正常组织(对照组)中hrd1蛋白的表达水平,应用荧光定量PCR(Q-PCR)方法分别检测实验组及对照组hrd1基因表达水平,并用统计学方法分析hrd1表达水平与胃癌临床病理参数之间的关系。结果:免疫组化及Q-PCR结果均显示,胃癌组织中hrd1表达水平明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。hrd1在癌灶≥5cm的胃癌组织中表达水平高于癌灶<5cm的胃癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中hrd1的表达与肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结有无转移和临床分期均无关(P>0.05)。结论:泛素连接酶hrd1在胃癌组织中表达明显高于癌旁正常组织,提示hrd1可能与胃癌的发生有关。     

胃癌及癌前病变中P16蛋白表达的研究

目的:研究胃癌及癌前病变中P16蛋白表达的情况,探讨p16基因在胃癌发生、发展中的作用。方法:收集正常胃粘膜组织标本43例,肠上皮化生组织标本35例,异型增生上皮组织标本50例及新鲜胃癌组织标本40例,采用免疫组化SP法检测以上组织的P16蛋白的表达情况。结果:P16蛋白表达的阳性率分别为:正常胃粘膜86%,肠上皮化生69%,轻、中、重度异型增生分别为83%、71%和35%,胃癌为23%(肠型29%、弥漫型19%)。其中正常胃粘膜、肠上皮化生、轻、中度异型增生间差异无显著性(P>0.05);重度异型增生和胃癌间差异无显著性(P>0.05);但两大组间差异有显著性(P<0.05)。结论:P16蛋白表达异常是胃癌发生的早期事件,且随着胃癌的发展而逐步增加。     

胃癌阴性淋巴结的微转移检测的临床意义

目的 探讨胃癌淋巴结微转移与临床病理参数的关系及其临床意义。方法 采用免疫组织化学方法，用细胞角蛋白CK19，细胞角蛋白CK20及CD44v6检测53例常规病理检查无淋巴结转移的胃癌周围淋巴结509枚。结果 53例胃癌患者中21例有淋巴结微转移（39．6％）。微转移与浸润深度有关；深层组织的微转移阳性率高于浅层（P＜0．05），PT3，PT4患者阳性率明显高于PT1，PT2患者。低分化癌微转移阳性率明显高于高分化癌（P＜0.05)。结论 对常规检查淋巴阴性的胃癌，微转移检测可能对准确地确定临床分期、指导治疗、判断预后有积极临床意义。     

二级脾蒂离断原位巨脾切除术的临床应用

目的探讨二级脾蒂离断原位巨脾切除术的临床应用价值。方法分析本院2000年4月至2008年6月所有采用二级脾蒂离断原位巨脾切除术75例患者的临床资料。结果75例手术平均出血量50ml,手术过程中无需异体输血,术后无胰漏、膈下感染、高热、胃肠瘘等严重并发症发生。结论二级脾蒂离断术是一种安全、有效的巨脾切除手术方式。     

循证医学在临床实践中的意义

循证医学 (Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｂａｓｅｄｍｅｄｉｃｉｎｅＥＢＭ )是加拿大麦克玛斯特大学Ｓｓｃｋｅｔｔ教授在长期的临床流行病实践的基础上 ,于 1992年正式提出的概念[1] 。1993年英国牛津正式成立国际Ｃｏｃｈｒａｎｅ(柯克朗 )协作网。我国 1996年在华西医科大学开始筹建中国Ｃｏｃｈｒａｎｅ中心 ,1997年 7月获得卫生部批准 ,1999年 3月正式注册成为国际Ｃｏｃｈｒａｎｅ协作网的第 13个成员国 (ｈｔｔｔｐ :/ /ｗｗｗ .ｃｄ12 0 .ｃｏｍ)。目前 ,ＥＢＭ正强劲地推动着全球医学从经验医学模式向循证医学模式转变[2 ] 。1　临床医生为…     

结直肠癌中CD_(44) V_6 PCNA的表达及其与浸润转移的关系

目的　探讨CD44V6和PCNA在结直肠癌中的表达及其与肿瘤浸润转移的关系。方法　应用免疫组织化学S P法检测 87例结直肠癌组织中CD44V6和PCNA的表达情况。结果　 87例结直肠癌组织中CD44V6蛋白的表达阳性率为 5 8.6 % ,PCNALI为 5 6 .5 1± 18.82。CD44V6阳性表达率和PCNALI在侵及浆膜层者明显高于侵及肌层者 ,淋巴结转移阳性组高于淋巴结转移阴性组 ,DukesC、D期明显高于A、B期 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。PCNA高LI者CD44V6阳性率明显高于PCNA低LI者 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　CD44V6和PCNA在结直肠癌浸润转移过程中发挥重要作用 ,可作为反映结直肠癌恶性程度的生物学标记物。