不同分离方法对鼠胚胎成纤维细胞生长影响的比较

目的:采用组织块培养法、单细胞悬液法、滤网过滤改良法分离培养鼠胚胎成纤维细胞,比较不同分离方法对其生长形态、生长曲线及细胞周期的影响。方法:实验于2006-03/09在辽宁医学院解剖实验室完成。①选取清洁级昆明种七八周龄雄性小鼠10只,4周龄雌性小鼠20只,雄雌鼠按1∶2合笼,次日晨检查有阴栓者记为孕0.5d,选择孕12.5～14.5d雌鼠断颈处死,取出胎鼠,去除胚胎头部、内脏和四肢,将躯干部用无菌眼科剪剪成1mm3以下的碎块,分别用以下方法进行分离培养。②组织块培养法:将剪碎的组织块吸置于离心管内,加入1mL消化液(含2.5g/L胰蛋白酶和0.4g/L乙二胺四乙酸的磷酸盐缓冲液),吹吸30s,加入等体积的完全培养基(含体积分数为0.1的胎牛血清)终止消化,弃上清液,留下鼠胚组织块沉淀物,按相互距离0.5cm放入培养瓶内,培养箱静置2～4h后,加入适量完全培养基,3d换液一次。③单细胞悬液法:将剪碎的组织块加入1mL消化液,吹打30s,室温下静置3～5min,吸取上层液体,再加入消化液,重复上述操作五六次,最后弃组织块,将收集的上层液离心,1000r/min离心5min,弃上清液,加入完全培养基5mL,吹打均匀后吸至培养瓶内培养。培养条件、换液时间与组织块培养法相同。④滤网过滤改良法:将剪碎的组织块加入1mL消化液,吹打30s,37℃水溶箱中轻摇3～5min,加入完全培养基1mL终止消化,室温下静置1.0～2.0min,用直径5cm、孔径为150目滤网过滤后,将过滤液以1000r/min离心5min;弃上清液,加入适量完全培养基,轻吹30～50下,吸至培养瓶内,37℃、体积分数为0.05的CO2孵箱中培养24h,半量换液,以后3d换液一次。⑤检测不同分离方法对鼠胚胎成纤维细胞生长形态、生长曲线及细胞周期的影响。结果:①鼠胚胎成纤维细胞生长形态观察:组织块培养法第2天可见少量成纤维细胞,细胞生长缓慢,需要七八天才能传代。单细胞悬液法第2天可见成纤维细胞生长,细胞量虽多,但死亡的细胞也较多,细胞活力减弱,四五天后传代。滤网过滤改良法第2天可见成纤维细胞呈长梭形,胞浆饱满,细胞生长迅速,三四天长满培养瓶,三四天传代。②细胞生长曲线检测:组织块培养法培养的细胞第4～8天进入对数生长期,单细胞悬液法培养的细胞第3～5天进入对数生长期,滤网过滤改良法培养的细胞第2～4天进入对数生长期。③细胞周期检测与增殖指数:培养第3天,滤网过滤改良法所得的鼠胚胎成纤维细胞增殖指数最高,达到54.12%,单细胞悬液法、组织块培养法细胞增殖指数分别为53.52%和53.15%,3种方法差异无显著性意义(P>0.05),表明其细胞周期基本相同。结论:滤网过滤改良法可以在较短时间内培养出优质高采的鼠胚胎成纤维细胞。     

人脐静脉内皮下层间充质干细胞的研究进展

间充质干细胞（Mesenchymal stem ceils，MSCs）是一群多分化潜能细胞，目前主要应用于支持造血干细胞生长，还可以作为组织工程上的种子细胞以及基因治疗的靶细胞。问充质干细胞广泛分布于各种不同的组织，如骨髓、外周血、脂肪、脐血、胎肺、胎肾等组织均可分离出MSCs.     

全硫代反义寡核苷酸对卵巢癌细胞生长抑制作用

目的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸（antisense oligodeoxy nucleotides,ASODN）对卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法将实验分为空白对照组、脂质体对照组、端粒酶全硫代正义寡聚脱氧核苷酸（Phosphorathioatesense oligodeoxy nucleotides,PS-SODN）组和不同剂量的全硫代反义寡聚脱氧核苷酸（Phosphorat-hioate an-tisense oligodeoxy nucleotides,PS-ASODN）组;②脂质体介导的细胞转染后,PS-ASODN和PS-SODN分别作用于卵巢癌HO-8910细胞后并培养24、48、72h,分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）、吖啶橙染色法、四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）、流式细胞术检测HO-8910细胞的端粒酶活性、细胞形态、体外增殖、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果ELISA法检测结果显示端粒酶PS-ASODN作用卵巢癌HO-8910细胞72h后端粒酶活性表达为阴性,说明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性;②吖啶橙染色观察细胞形态：PS-ASODN作用的卵巢癌HO-8910细胞有明显凋亡现象,凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩,说明PS-ASODN能够促进卵巢癌HO-8910细胞凋亡;③MTT实验：PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖（P〈0.0l）,并呈一定剂量和时间依赖关系;④流式细胞仪检测细胞凋亡和周期：与空白对照组比较,PS-ASODN组G0/G1期细胞明显增多,差异显著（P〈0.01）;在G0/G1期前出现亚二倍体凋亡峰,表明细胞被阻止在G1/S期。结论PS-ASODN作用于卵巢癌HO-8910细胞后,卵巢癌HO-8910细胞增殖受到明显抑制,并出现凋亡;②PS-ASODN对端粒酶活性的抑制率与PS-ASODN的浓度和作用时间呈依赖关系,即抑制率随着反义寡核苷酸的浓度和作用时间的增加而增大;③以端粒酶RNA模板区为靶点的PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖,其机制可能是通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞的凋亡,PS-ASODN对卵巢癌的治疗具有重要价值。     

神经胶质成熟因子-β对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞活化的影响及可能机制

目的 探讨神经胶质成熟因子-β(GMFB)对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞活化的影响及可能作用机制。方法 采用腹腔注射链脲佐菌素(55 mg·kg^-1)的方法制备雄性SD大鼠的糖尿病模型,并按照随机数字表法分成STZ组、STZ+AAV-GMFB组、STZ+AAV-GMFB+colivelin组,每组15只。另取15只正常大鼠作为CON组。STZ+AAV-GMFB组、STZ+AAV-GMFB+colivelin组大鼠于成模8周后玻璃体内单次注射AAV-GMFB腺病毒载体5μL;STZ+AAV-GMFB+colivelin组大鼠在注射腺病毒基础上给予腹腔注射colivelin(2 mg·kg·d^-1),共注射4周;CON组和STZ组大鼠腹腔注射2 mL生理盐水。成模12周后,免疫荧光染色检测GMFB在Müller细胞中的表达,免疫组织化学染色检测GFAP的表达,ELISA检测视网膜中TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白含量,Western blot检测视网膜中GMFB、p-JAK2和p-STAT3蛋白相对表达。结果 GMFB在STZ组Mülle...     

牵引-推拿结合电针治疗腰椎间盘突出症疗效观察

[目的]观察牵引-推拿结合电针治疗腰椎间盘突出症的临床疗效。[方法]将99例腰椎间盘突出症患者分别施以牵引-推拿结合电针治疗,观察其病情变化。[结果]治愈58例,显效29例,无效3例,总有效率96．9％。[结论]牵引一推拿结合电针治疗腰椎间盘突出症临床效果显著。     

光敏固化复合树脂在口矫中的应用

本文作者利用光敏固化复合树脂的良好粘结性能,将其应用到口矫领域,治疗错过矫正期的畸形牙。临床资料:患者共70名,男性25人,女性45人。年龄从19岁至51岁。畸形牙共92颗,分别为舌向,唇向,颊向错位,转位牙。发育过小牙。锥状斜轴牙。间隙过大等。治疗方法: 1.有牙周炎的患者,先行牙石洁治术。口服三天甲硝唑片剂。呋喃西林含漱液漱口。 2.牙髓失活,然后进行根管治疗,氧化锌丁香油     

人脐带间充质干细胞修复大鼠坐骨神经损伤的实验研究

 目的观察人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）在体内微环境中修复大鼠坐骨神经损伤的效果。方法取80 只SD 大鼠,
制作羊膜管包绕的缺损10 mm的坐骨神经损伤模型。将大鼠随机分为实验组和对照组,每组各40只,实验组羊膜管内注入
hUC-MSCs 悬液50 μL（1.0*105/mL）,对照组注入等量的DF12 培养基。分别于术后4、8、12、16、20 周行肢体一般状态、腓肠肌湿
质量恢复率检测。结果2 周后术侧足底踝关节负重区出现红肿及溃疡,5～10 周时各组大鼠术侧肢体溃疡逐渐愈合,对照组较
实验组红肿及溃疡程度严重,且愈合较慢;实验组术侧腓肠肌恢复率随时相延长而逐步好转,而对照组则逐步下降,2 组间差异
有统计学意义（P < 0.01）。结论直接植入体内的hUC-MSCs 可分化神经样细胞,对坐骨神经损伤可起修复作用。     

CDK4-pRB-E2F1通路在创伤后应激障碍大鼠杏仁核神经细胞凋亡中的作用

目的 探讨CDK4-pRB-E2F1通路在创伤后应激障碍?(PTSD)?大鼠杏仁核神经细胞凋亡中的作用.方法 选取健康雄性成年Wistar大鼠50只,采用单一连续应激?(SPS)?制备PTSD大鼠模型,按照SPS处理后1?d、4?d、7?d、14?d将大鼠随机分为4组,将未做任何处理大鼠作为对照组,每组10只.采用旷场...     

锌对大鼠骨髓间充质干细胞DNA和蛋白质含量及增殖周期的影响

背景:锌通过直接和间接作用对DNA聚合酶和RNA聚合酶产生影响,在细胞的DNA复制、RNA转录、增殖、分化等活动中起重要作用.目的:探讨锌对大鼠骨髓间充质干细胞DNA和蛋白质含量及增殖周期的影响.设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2008-09/12在辽宁医学院完成.材料:清洁级1月龄SD大鼠7只,由辽宁医学院动物中心提供.方法:全骨髓法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传至第3代时,对照组向细胞中加入含体积分数为15%胎牛血清的DMEM培养液,锌处理组向上述培养液中加入硫酸锌,使锌终浓度分别达到0.1,0.2,0.5,1.O,2.0,4.0,6.0 mg/L.胰酶消化后按5×107L-1密度接种,培养21d.主要观察指标:细胞表面抗原的表达,MTT法检测细胞活性,流式细胞仪测定细胞DNA含量、蛋白质含量和增殖周期.结果:第3代细胞表面抗原CD106呈阳性表达.锌对骨髓间充质干细胞活性的促进作用呈量效关系,0.2-4.0 mg/L锌处理组细胞活性显著高于对照组(P＜0.01),尤以质量浓度为2.0mg/L时最为明显:当锌的质量浓度达6.0mg/L时,细胞活性明显降低(P＜0.01).培养7,14,21 d与对照组比较,2.O mg/L锌处理组骨髓间充质干细胞DNA含量、蛋白质含量均显著升高(P＜0.01);细胞增殖指数、S期和G2+M期细胞百分率均明显升高,G0/G1期细胞百分率则显著下降(P＜0.01).结论:O.2～4.0 mg/L锌能促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖、DNA复制和蛋白质合成,且2.0 mg/L为最佳质最浓度.     

人体解剖学多媒体课件的制作及应用

传统的解剖学理论教学一般以教师讲授、板书、绘图为主,借助挂图、模型等形式辅助教学。但由于书写板书、绘图要占用大量课堂时间,挂图图像大小、质量、携带等方面的限制,使得这种教学模式给学生的印象是孤立的、缺乏多元化体系。