白血病细胞HOX A基因亚群启动子区域异常甲基化的研究

目的 研究HOX A基因启动子区域CpG岛在多种白血病细胞系和白血病患者骨髓细胞中的甲基化特点和全反式维甲酸(ATRA)对其甲基化的影响.方法 选取11种白血病细胞系、3种白血病45例患者治疗前后骨髓细胞以及2名正常成人外周血白细胞,常规提取DNA并用重亚硫酸盐法处理.然后用PCR法扩增目标序列,采用焦磷酸测序法测定其中CpG位点的甲基化,以5-杂氮-2'-脱氧胞苷(DAC)或ATRA处理HL-60和K562细胞后测定以上片段的甲基化.结果 所检测的HOX A基因亚群在正常白细胞均无甲基化,HOX A1在所有标本均无甲基化,HOX A4、A6、A7、A9、A10和A11均存在多个CpG位点的甲基化甚至高甲基化,其中T细胞白血病细胞系和B细胞白血病细胞系CpG位点甲基化比例(分别为71.4%和85.7%)明显高于其他组细胞;HOX A4在所有细胞系中均存在甲基化,HOX A6和HOX A7在绝大多数细胞系中存在甲基化,HOX A10和HOX A11在K562和HL-60细胞中存在甲基化(38%～86%),HOX A9在髓系白血病细胞系中多表现为低甲基化,HOX A11在B细胞白血病细胞系中为高甲基化(均>50%).治疗缓解后的急性髓系白血病及急性淋巴细胞白血病患者比治疗前HOX A4、A6甲基化水平明显减低,而慢性粒细胞白血病患者HOX A6和A9甲基化水平明显减低.用ATRA处理后HL-60细胞HOX A4、A6和A10甲基化水平明显减低,而K562细胞仅HOX A6甲基化减低.结论 白血病细胞在HOX A基因亚群启动子区域多呈现异常甲基化,且部分基因亚群表现为不同种类白血病特异性高甲基化;ATRA可以通过多种途径降低白血病细胞系,尤其是HL-60细胞部分HOX A基因亚群CpG甲基化水平.     

HA-1树突状细胞核酸疫苗的构建及其特异性CTL的诱导

本研究以次要组织相容性抗原HA-1为靶点，构建HA-1树突状细胞核酸疫苗用于造血干细胞移植后抗白血病治疗。体外培养移植供者树突状细胞，用流式细胞术、混合淋巴细胞反应检测其免疫活性，通过电转法将HA-1基因转染树突状细胞，构建树突状细胞核酸疫苗。48小时后检测HA-1蛋白表达情况。将转染后的树突状细胞与同基因淋巴细胞共孵育诱导特异性CTL，应用LDH释放实验检测其体外杀伤活性。结果表明：经外周血单核细胞诱导的树突状细胞表达树突状细胞表型，能刺激同种淋巴细胞增殖。电转48小时后，Western blot可检测到HA-1蛋白表达。诱导的CTL体外杀伤活性高于对照组。结论：次要组织相容性抗原HA-1可作为造血干细胞移植后抗白血病治疗的靶点。     

人工抗原呈递细胞诱导CML28特异性T淋巴细胞杀伤急性白血病细胞的研究

目的 探讨以人工抗原呈递细胞模拟树突细胞(DC)体外诱导特异性T淋巴细胞活化、增殖,观察特异性T淋巴细胞杀伤白血病细胞的效应.方法 用慢性粒细胞白血病细胞特异性抗原肽(CML28)作为目标肽,并以磁珠同时负载人工合成的HLA-A2-Ig二聚体-抗原肽(CML28)复合物以及B7-1分子,作为诱导T淋巴细胞的活化、增殖的双信号分子,模拟抗原呈递细胞的生物功能,建立一种人工抗原呈递细胞;从HIA-A2健康骨髓捐献者骨髓或外周血中分离出单个核细胞作为效应细胞,并与人工抗原呈递细胞共孵育,以流式细胞术检测特异性T淋巴细胞活化、增殖程度.以初治急性白血病细胞作为靶细胞,将特异性T淋巴细胞与白血病细胞分别以5:1,10:1,20:1,40:1,80:1比例共孵育4 h,用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测杀伤急性白血病细胞的效果.结果 以该人工抗原呈递细胞刺激T淋巴细胞后,其CML28特异性T淋巴细胞比例明显增高,实验组中抗原肽ALFCGVACA、FLQGDTSVL、DLMSSTKGL、VLTFALDSV所诱导的特异性T淋巴细胞比例分别为(13.5±1.6)%、(15.2±1.5)%、(14.7±1.8)%、(34.3±3.5)%,与对照组[(2.2±0.4)%]比较,差异均有统计学意义(P<0.01).当效应细胞与靶细胞分别以5:1,10:1,20:1,40:1,80:1混合后,随着效应细胞的增加,诱导杀伤急性白血病细胞效率也明显增强,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 以磁珠为平台的人工抗原呈递细胞能有效模拟人抗原呈递细胞,诱导T淋巴细胞特异性杀伤白血病细胞,为白血病的免疫治疗提供了一种新的途径.     

川芎嗪改善免疫诱导再障不鼠骨髓微环境的作用研究

目的：探讨川芎唪对再生障碍性贫血（再障）骨髓微环境的可能作用及其机制．方法：建立免疫介导的再障小鼠模型，胃饲川芎嗪注射液４ｍｇ／次，１天２次，第１０天用氧分压传感针测定活体尺骨骨髓氧分压（ＰｂＯ２ ），再观察其骨髓切片组织学，体外成纤维细胞集落形成单位（ＣＦＵ－Ｆ），培养基质细胞层的粘附能力．结果：川芎唪治疗组尺骨中段ＰｈＯ２１０．３２±１．２７ＫＰａ较正常组（１２．３５±１．０５Ｋｐａ）低，Ｐ＜０．０１；而显著高于对照的再障组（４．３２±２．８６ＫＰａ）Ｐ＜０．００１．再障组骨髓微血甲扩张、断裂、淤血，造血组织容量百分率２４．９±９．６％．川芎嗪组微血管较清楚、完整、无断裂及淤血，造血组织容量百分率为５２．８±１５．６％．再障胡ＣＦＵ－Ｆ１２．５±７．３明显低于川芎嗪组（３１．５±１０．６），ｐ＜０．０１．川芎嗪组体外培养基质细胞层粘附正常小鼠骨髓有核细胞的能力为７２．７±７．８％，与正常组（７３．４±３．４％）无差异，明显高于再障组（５６．２±９．８％），Ｐ＜０．０１．结论：川芎嗪能促进再障小鼠骨髓微血管的修复，增加微环境供氧，促进基质细胞生长及其粘附功能．川芎嗪通过改善骨髓微环境而使骨髓造血细胞增生．     

两性霉素B治疗免疫功能低下患者侵袭性真菌感染

目的：观察国产两性霉素B对免疫功能低下患者侵袭性真菌感染（IFI）的临床疗效及安全性。方法：81例免疫功能低下合并侵袭性真菌感染患者使用普通两性霉素B,剂量为5～50mg／d,用药7～66d,平均24．5d,每位患者平均累积剂量605mg。结果：两性霉素B临床总有效率为75．7％0,真菌清除率为66．7％,不良反应发生率寒战、发热58．0％,低血钾44．4%,消化道18．5％,肾功能损害14．8％。结论：国产两性霉素B抗真菌谱较广,疗效好,但须合理用药,定期监测肝肾功能、血钾水平。     

流动人口管理者对艾滋病和VCT知识和态度的定性研究

目的 为了解流动人口相关管理人员对艾滋病和自愿咨询检测(VCT)的知识和态度,为开展VCT工作提供依据. 方法 在上海某区采用多阶段抽样,选取流动人口相关管理人员28人,采用个人深入访谈法,了解他们对艾滋病和VCT的相关知识和态度. 结果 该人群对艾滋病防治的知晓率低,但是愿意支持艾滋病宣传干预工作;对艾滋病存有恐惧心理,同时对艾滋病病毒(HIV)感染者有着较为严重的歧视情节;对VCT的知晓率较低,多数人认为周围的流动人口不会感染HIV,没有必要做HIV检测,也存在对检测者的歧视心理. 结论 应进一步加强针对该类人群的艾滋病宣传教育,消除该人群对HIV感染者和检测者的歧视,为流动人口创造好的艾滋病防治环境.     

以痛性红斑为首发症状的骨髓增生异常综合征1例

患者,女,24岁.于2007年2月因"双下肢红斑结节伴疼痛1周"住我院皮肤科,皮肤活检显示:"角化过度,皮突大部分消失.真皮血管周围少量淋巴细胞浸润,未见皮下组织".确诊为"结节性红斑".当时查血常规WBC 5.05×109/L,N 4.12×109/L,L 0.92×109/L,Hb 96 g/L,PLT 101×109/L,给予抗感染(阿齐霉素0.5 g静脉滴注qd),止痛对症(消炎痛50 mg bid)及活血化淤(复方丹参)治疗1周后红斑消失,"治愈"出院.出院2月余后无明显诱因再次出现双下肢的红斑,结节,如蚕豆至核桃大小不等,压痛明显,伴夜间发热,盗汗,同时感咽喉疼痛,咳嗽及关节疼痛,门诊以"结节性红斑"再次收住我院.     

甲状腺结节再次手术38例临床分析

1997年6月～2007年6月,我院共收治甲状腺结节再次手术患者38例,现对其临床资料总结报告如下.     

社区卫生服务机构艾滋病防治对象对HIV检测接受意愿调查

目的了解社区卫生服务机构艾滋病防治对象对艾滋病病毒（HIV）检测的接受意愿及影响因素。方法采用自行设计的调查问卷,在北京、上海等8个城市的社区卫生服务机构,对重点科室（妇产科、皮肤科等）的就诊人员、男男性行为人群（MSM）和娱乐场所女性工作人员进行调查。调查内容包括一般社会人口学信息、艾滋病相关知识、HIV防治服务接受意愿及利用情况等。结果共调查了755人,其中29人HIV阳性。在726名HIV阴性人员中,555人（76．4％）表示愿意接受社区卫生服务机构免费提供的HIV检测服务。多因素Logistic回归分析显示,平均月收入较高（1000～1999元、2000-2999元）、知晓艾滋病知识和以前接受过HIV检测的服务对象,更愿意接受HIV检测,其比值比（OR）和95％可信区间（CD分别为2．51（1．18～5．37）、2．35（1．28～4．32）、2．07（1．14～3．77）、1．85（1．25～2．75）。结论调查对象对社区卫生服务机构开展的HIV检测服务有较高的接受意愿,但也存在诸如担心歧视、个人隐私暴露和业务能力不高以及自身艾滋病知识欠缺等因素的影响,因此在社区卫生服务机构开展HIV检测需要加强受检者隐私保护,同时要扩大HIV防治宣传和提高社区医生的HIV咨询检测知识和技能水平。     

HIV单阳家庭感染者对早期抗病毒治疗可接受性的调查

目的了解艾滋病病毒（HIV）单阳家庭感染者对早期治疗的接受意愿及其影响因素。方法采用自行设计的调查问卷,对浙江、湖南部分地区的HIV单阳家庭感染者进行调查,包括一般人口学信息、艾滋病相关知识与行为、对于早期治疗的认知和态度等。结果共调查HIV单阳家庭感染者207人,平均年龄为（39.8±9.9）岁,早期治疗的可接受率为71.5%（148人）,影响其接受早期治疗的因素为：认为早期治疗可以延缓疾病发展、认为早期治疗可以预防配偶感染和配偶支持治疗,优势比（OR）（95%可信区间）分别为2.04（1.30～3.19）、5.69（2.22～14.63）、3.40（2.12～5.48）。结论 HIV单阳家庭感染者对早期治疗的可接受性较高。对于早期治疗的认识、配偶态度和医生的宣教,是接受意愿的主要影响因素。