人子宫内膜异位症裸鼠模型的建立及应用

子宫内膜异位症(EMs)是育龄女性常见病,其发病机制不明。人体中很难进行对照研究,限制了EMs的研究进展。目前建立EMs裸鼠模型主要方法为将在位或异位人子宫内膜组织移植到裸鼠体内生长,可保持移植物原有形态和生化活性,在此模型上对EMs病因、发展及治疗等进行研究。对不同方法建立裸鼠EMs动物模型观察病灶形态学、组织黏附、增殖、激素反应及用此模型研究基质金属蛋白酶(MMPs)抑制剂、血管内皮生成因子(VEGF)抑制剂、芳香化酶抑制剂、肿瘤坏死因子α(TNF-α)抑制剂对EMs病灶的作用作一综述。     

人类“卵子库”建设述评

利用低温冷冻技术储存卵母细胞或卵巢皮质作为女性生育力保存的“卵子库”,是辅助生殖技术的项目之一,其临床应用范围包括恶性肿瘤患者的生育力保存、卵母细胞的捐赠、非医疗原因的生育储备等,具有重要的医学和社会意义。本文通过评述“卵子库”建设的技术进展、临床应用、伦理问题,为在我国建立优质、高效、安全、合法的“卵子库”提供专家建...     

子宫内膜异位症患者腹腔液TNF-α,sTNFR的检测

目的探讨细胞因子TNF-α和sTNFR在子宫内膜异位症中的作用。方法利用双抗体夹心法,检测36例子宫内膜异位症不孕妇女（异位症）和30例其他原因所致不孕妇女（对照组）腹腔液中肿瘤坏死因子（TNF-α）和可溶性肿瘤坏死因子受体（sTNFR）的含量。结果Ⅰ、Ⅱ期内膜异位症不孕妇女腹腔液TNF-α的水平较对照组无明显差异．Ⅲ、Ⅳ期内异位症患者与对照组及Ⅰ、Ⅱ期内异位症患者比较,差异均有显著性（P〈0．05）,sTNFR的水平较对照组均明显升高。结论腹腔液中TNF—α、sTNFR水平异常升高可能与子宫内膜异位症的发病有关。     

体外受精-胚胎移植前检测宫颈分泌物支原体及衣原体意义的探讨

目的:分析体外授精/单精子卵胞浆内显微注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)前解脲支原体(UU)和沙眼衣原体(CT)感染与妊娠结局的关系.探讨IVF/ICSI-ET前常规检测宫颈分泌物UU和CT的临床意义.方法:回顾性分析2008年1-12 月首次在该中心行IVF/ICSI-ET,术前进行宫颈分泌物UU 和CT 检测的患者共1 802 例,根据UU 和CT 检测结果,将患者分为UU 和CT均阴性、UU 阳性、CT 阳性3 组,比较各组间受精率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率、种植率、异位妊娠发生率和流产率有无差异以及CT或UU 感染与不孕类型、是否存在盆腔因素病因、阴道清洁度、对移植操作的影响等关系.结果:不孕患者IVF/ICSI-ET治疗时UU感染患者的妊娠结局未受到影响,CT 感染对妊娠结局有负面影响.结论:对于无症状的UU 感染患者IVF术前不必要投入大量抗生素治疗,对于CT感染者建议治愈后进行胚胎移植.     

多囊卵巢综合征患者妊娠期血清、胎盘局部雄激素水平的检测及评价

目的了解多囊卵巢综合征(PCOS)患者行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗后,妊娠期胎盘局部是否存在雄激素水平的升高,并探讨胎盘局部高雄激素水平与PCOS患者不良妊娠结局的关系。方法 17例PCOS行IVF-ET治疗后妊娠患者为观察组,19例非遗传学因素(输卵管因素,流产后继发不孕)行IVF-ET治疗后妊娠患者为对照组,采用放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)对其外周血、胎盘组织局部总睾酮(TT)、性激素结合球蛋白(SHBG)等指标进行测定。并根据外周血雄激素水平,将观察组分为高雄组(n=12)及非高雄组(n=5)。结果 PCOS高雄患者妊娠期外周血及胎盘局部TT、游离睾酮指数(FAI)较对照组及非高雄组明显升高,且有显著性差异(P均0.001);PCOS高雄组SHBG较对照组及非高雄组稍有降低,但无显著差异(P0.05)。结论具有高雄激素血症的PCOS患者胎盘局部雄激素水平升高。     

单细胞微阵列比较基因组杂交技术在胚胎植入前遗传学筛查中的应用

目的 建立利用单细胞微阵列比较基因组杂交(array CGH,aCGH)技术进行胚胎植入前遗传学筛查(PGS)技术平台,并应用aCGH技术进行PGS获得持续妊娠. 方法 采集废弃胚胎来源卵裂球10个,核型正常男性(46,XY)淋巴细胞3个,通过单细胞全基因组扩增后,利用aCGH技术进行染色体非整倍体分析;在此基础上,将aCGH技术应用于临床一例反复流产患者. 结果 3个淋巴细胞及9个废胚来源卵裂球的全基因组扩增成功,1个废胚来源卵裂球扩增失败,扩增成功的样本通过aCGH检测后均获得明确的诊断,3个淋巴细胞分析结果与已知核型一致;临床病例5个胚胎活检的单卵裂球均得到明确诊断,移植1枚正常整倍体胚胎后获得临床持续妊娠. 结论 在胚胎植入前遗传学筛查中,单细胞aCGH技术能全面地评估胚胎染色体组情况,可应用于临床PGS.     

血清钙磷水平与体外受精和卵胞浆内单精子注射结局的相关性初步观察

钙离子震荡是卵激活的重要因素,一些因素通过诱发卵内的钙离子震荡,从而完成受精过程并控制早期胚胎发育.血液中生物活性的钙浓度随着月经周期呈现周期性变化[1],而血清中钙和磷水平密切相关,研究发现排卵前卵泡液中的钙离子浓度与血清中高度接近[2,3].血清钙/磷水平与体外受精和卵胞浆内单精子注射(IVF/ICSI)妊娠结局之间的关系研究较少,本文主要通过回顾性病例研究分析血清钙磷水平与IVF/ICSI妊娠结局的相关性.     

一个X连锁少汗型外胚层发育不良家系的EDA基因c.822G＞T突变分析

目的 对1个少汗型外胚层发育不良家系进行ectodysplasin A(EDA)基因序列分析,为家系成员提供准确病因诊断和遗传咨询.方法 抽取家系中先证者及有血缘关系的家系成员外周静脉血,常规提取基因组DNA,应用聚合酶链式反应、DNA测序技术分析EDA基因编码区序列;选择103名无血缘关系正常人作为对照.结果 在先证者及另1例男性患者的EDA基因第7外显子区域检出c.822G＞T突变,导致第274位的色氨酸变成了半胱氨酸(p.W274C),该突变位点未见文献报道.家系中的5名女性成员中检出c.822G＞T杂合突变,正常男性成员及103名正常对照均不存在此突变.结论 EDA基因c.822 G＞T突变为导致该家系成员少汗型外胚层发育不良的致病突变.     

雄激素对颗粒细胞乳酸生成的抑制作用

目的：观察雄激素对卵巢颗粒细胞乳酸生成的抑制作用,探讨多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）高雄激素状态下的颗粒细胞乳酸生成及其对卵泡发育的影响。方法：体外培养人卵巢癌颗粒细胞系KGN细胞,用不同浓度睾酮（0.1~1 000 nmol/L）处理不同时间（0~48 h）。测定培养上清液中乳酸含量,采用实时聚合酶链反应（real?time PCR）以及蛋白质印迹法（Western blot）分别检测细胞内乳酸脱氢酶A（LDHA）和乳酸脱氢酶B（LDHB）的mRNA及蛋白质表达水平。结果：人卵巢颗粒细胞系KGN细胞经1 000、100、1 nmol/L睾酮处理24 h或者1、10 nmol/L睾酮处理24及36 h后,其乳酸生成量显著减少（P < 0.05）。并且,在100、1 nmol/L睾酮处理24 h后,KGN细胞内LDHA、LDHB的mRNA及蛋白质表达水平显著降低（P < 0.05）。结论：较高浓度雄激素通过抑制卵巢颗粒细胞内LDHA、LDHB的表达从而降低乳酸生成,可能与PCOS卵泡发育障碍相关。     

人胚胎干细胞向下丘脑神经祖细胞的诱导分化受高雄激素影响

目的：研究体外诱导人胚胎干细胞（human embryonic stem cell,hESC）向下丘脑神经祖细胞分化,并以此为细胞模型,观察不同浓度雄激素对下丘脑神经祖细胞分化的影响。方法：鉴定hESC细胞株CCRM22,体外诱导CCRM22向下丘脑神经祖细胞分化,对其进行初步的细胞生物学鉴定;在分化培养基中添加1×10-8mol/L、1×10-7mol/L睾酮（以无水乙醇为助溶剂对照）,收集不同分化时期细胞,比较分化效率;利用RT?qPCR、流式细胞术、免疫荧光检测等方法鉴定分化细胞,并检测生殖功能调控相关基因的表达。结果：CCRM22分化为下丘脑神经祖细胞的效率超过85%,但睾酮处理降低其分化效率;分化细胞表达神经细胞标志物NESTIN以及下丘脑神经祖细胞特异性标志物NKX2.1,同时表达KISS1和雄激素受体（androgen receptor,AR）,且AR的表达水平与睾酮浓度呈正相关。结论：成功诱导hESC分化形成下丘脑神经祖细胞,高浓度睾酮处理抑制hESC向下丘脑神经祖细胞分化,该细胞模型可应用于后续体外研究多囊卵巢综合征女性孕早期高雄激素环境对后代下丘脑神经细胞分化和发育的影响。