雌孕激素对大鼠成骨细胞胰岛素样生长因子-1 mRNA及其蛋白表达的影响

目的 研究17β-雌二醇（E）、孕酮（P）和E、P联合应用对体外培养的大鼠成骨细胞（OB）胰岛素样生长因子－1 mRNA及其蛋白表达的影响。方法 分离并培养大鼠OB,传代后分4组：对照组培养液中不含激素，E组含E10^-8M,P组含P10^-7M,E P组含E10^-8M＋P10^-7M，每48小时换液一次，共3次。用RT－PCR方法测定OB中IGF-1 mRNA含量，用ELISA法测定无血清培养液中游离IGF－1浓度。结果 E组IGF－1 mRNA含量低于对照组（P＜0.01），而P组与对照组相似（P＞0.05）；E组及P组培养液中游离IGF－1浓度皆分别低于对照组（P＜0.01）；E＋P组IGF－1 mRNA含量及游离IGF－1浓度与对照组之间比较无统计学差异（P＞0.05）。结论 OB能合成IGF－1；E、P均降低体外大鼠OB培养液中游离IGF－1浓度，E抑制IGF－1mRNA基因转录，P作用于转录后的环节；E＋P则能逆转E或P的上述单独作用。     

40岁以上高龄女性体外受精-胚胎移植妊娠结局分析

目的:探讨40岁以上高龄女性体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的妊娠结局,旨在为高龄女性提供生育咨询以及为改善高龄女性个体化辅助生殖治疗结局提供临床依据。方法:选择我院生殖中心2015年1月—2017年12月女方年龄≥40岁且使用自身卵子行体外受精的共2 467个治疗周期资料,对各项临床数据进行回顾性分析。结果:40岁及以上行辅助生殖治疗的患者,随着女性年龄增加获卵数明显减少(40～48岁女性平均获卵数分别为2.97、2.69、2.17、2.01、1.77、1.61、1.68、1.29和1.00,44～48岁与40～43岁依次组间比较均P0.05),尤其是44岁以上女性胚胎发育潜能明显降低(40～48岁囊胚形成率分别为48.90%、43.72%、33.67%、34.29%、24.39%、21.14%、26.32%、16.67%和0%,44～48岁与40～43岁组间依次比较均P0.05)。共有518个周期行新鲜胚胎移植,结果显示,随女性年龄增加,临床妊娠率(40～48岁临床妊娠率分别为26.92%、21.15%、20.79%、10.96%、18.87%、11.11%、5.88%、0%和0%,43～48岁与40～42岁组间依次比较均P0.05)、种植率(40～48岁种植率分别为23.65%、19.51%、17.70%、8.54%、7.49%、10.81%、5.56%、0%和0%,43～48岁与40～42岁组间依次比较均P0.05)和活产率均显著降低(40～46岁活产率分别为18.46%、10.58%、9.90%、5.48%、5.66%、2.78%和5.88%,43～46岁与40～42岁组间依次比较均P0.05),43岁以上者结局更差。44岁以上女性自然流产率明显增高(40～45岁流产率分别为31.43%、50.00%、52.38%、50.00%、70.00%和75.00%,44～45岁与40～43岁组间依次比较均P0.05)。46岁女性仅1例妊娠并分娩,47岁和48岁女性均无成功妊娠。与抗苗勒管激素(AMH)1.0 ng/mL组相比,AMH≤1.0 ng/mL组妊娠率、种植率及活产率均显著下降(27.04%vs. 14.74%,22.99%vs. 13.50%,15.88%vs. 7.37%;均P0.05),流产率明显升高(41.27%vs. 50.00%,P0.05)。结论:≥40岁高龄女性随年龄增长生育力逐渐降低。40～43岁年龄段女性助孕仍有一定的价值,尤其是卵巢仍有一定储备者(AMH1.0 ng/mL),但44岁以上女性原则上不再建议ART助孕,对于46岁以上卵巢功能衰竭的女性强烈建议卵子捐赠或收养。     

人SET基因小分子干扰RNA重组腺病毒载体的构建与鉴定

目的SET基因表达产物是SET／TAF-1β蛋白,功能涉及基因表达调控、染色质修饰、翻译后修饰等生物过程,多水平、多通路地调节靶因子,其表达异常与多种疾病相关。为研究SET基因与临床多种疾病发生发展的关系,文中构建表达人SET基因的小分子干扰RNA（siRNA）重组腺病毒载体。方法根据siRNA靶序列设计并合成2条互补的64 bp寡核苷酸。pShuttle-H1穿梭质粒经BglⅡ、HindⅢ双酶切后,与退火的寡核苷酸连接,构建穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA。该穿梭质粒经Not Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后与pAdTrack-CMV连接,构建含有绿色荧光蛋白（green fluorescense protein,GFP）报告基因的穿梭质粒PATC—H1-siRNA。分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒PATC—H1-siRNA转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组。Pac Ⅰ酶切线性化重组质粒pAd—H1-siRNA后,转染AD293细胞进行病毒包装和扩增。根据GFP报告基因的表达观察重组病毒的产生和感染效率,用Western blot检测人SET蛋白的表达水平。结果穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA经双酶切和测序证实构建成功;重组腺病毒载体经AD293细胞包装后可观察到GFP表达;获得的重组腺病毒载体感染AD293细胞。经Western blot检测,SET基因腺病毒载体（AdH1-SiRNA／SET）感染组与未感染腺病毒载体组（空白对照）和感染对照腺病毒载体组（AdH1-SiRNA／NS）相比,SET蛋白表达水平显著降低（P〈0．05）,抑制效率为50％～70％。结论成功构建了表达人SET基因的siRNA重组腺病毒载体AdH1-siRNA／SET,并在AD293细胞中验证其抑制SET蛋白表达的作用,为进一步研究SET基因参与多种疾病的发生发展提供了材料。     

热休克蛋白27在调控细胞凋亡过程中的作用

热休克蛋白是一类广泛存在于生物体内、生物进化高度保守、在生理和应激条件下均能表达的蛋白质家族。HSP27是该家族中重要成员之一,它的表达与应激条件下增加细胞的存活率相关。HSP27通过与凋亡通路中的一些重要蛋白相互作用参与细胞凋亡的调控。     

白细胞介素1受体Ⅱ型在子宫内膜异位症发生机制中的作用

目的:研究白细胞介素1受体Ⅱ型(IL-1RⅡ)在子宫内膜异位症(EMs)发生机制中的作用.方法:体外培养子宫内膜细胞经过可溶性IL-1RⅡ或IL-1RⅡ重组腺病毒(rAd-RⅡ)作用12 h后收集细胞培养液,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中IL-6和IL-8的水平.另外应用二维电泳和质谱分析鉴定rad-RⅡ作用后的差异表达蛋白.结果:2.μg/mL的可溶性IL-1RⅡ显著抑制了内膜细胞IL-6和IL-8的分泌.rAd-RⅡ感染内膜细胞后IL-1β刺激IL-8的分泌比磷酸盐缓冲液(PBS)和LacZ重组腺病毒(rAd-LacZ)对照组显著降低,而IL-6表达无显著差异.二维电泳分析有62个差异蛋白点,质谱分析鉴定出34个差异蛋白,大多数蛋白和细胞代谢与增殖相关.结论:IL-1RⅡ能阻断IL-1β对内膜基质细胞的作用,可能为EMs治疗提供新策略.     

葡聚糖微球栓塞治疗子宫肌瘤疗效的初步观察

目的 分析葡聚糖微球动脉栓塞治疗子宫肌瘤的相关技术因素、评估该技术治疗50例患者的初步临床疗效。方法 从1999年4月～2001年10月共对50例子宫肌瘤患者采用葡聚糖微球行超选择性子宫动脉栓塞治疗。患者的临床表现为月经过多、尿频、不孕和下腹坠痛等症状。所有病例均采用右侧股动脉径路、单支猎人头导管双侧子宫动脉插管技术，栓塞用葡聚糖微球(直径225～450μm)和3～5条明胶海绵条块。栓塞后每月行临床和B超随访以观察疗效。结果 超选择插管及栓塞成功率均为100％。栓塞后92％的患者疼痛控制良好，随访3个月48例(96％)患者临床症状改善；2例无效，占4％。B超随访资料完整的38例显示：肌瘤体积随时间推移进行性缩小，术后6个月，5例肌瘤消失，肌瘤体积平均缩小68％。结论 葡聚糖微球栓塞治疗子宫肌瘤是一种微创性的治疗手段。可致使肌瘤实体进行性缩小、临床症状改善，是子宫肌瘤临床治疗的又一选择。     

一种新型宫腔测量装置的研制和临床应用

本文介绍一种新型宫腔测量装置,应用电阻应变原理制出新型传感器,随着在宫腔内移动,传递出电信号由微处理机进行数据处理并绘制图象,打印结果。临床上选择22例患者进行宫腔测量,部分与X 线碘油造影校正值比较,两者结果无显著性差异(P>0.05)。测量绘制的图形能较好地、快速反映宫腔形态,有助于研究正常宫腔的解剖和生理,还可诊断宫腔异常形态,对研制、选择和放置宫内节育器更是一种非常有价值的方法。     

NR4A1对小鼠卵巢颗粒细胞脂肪代谢相关调控因子的调节作用

目的观察NR4A1对小鼠卵巢颗粒细胞中脂肪代谢相关调控因子脂联素受体2（Adipo—R2）、解偶联蛋白2（UCP2）、B类清道夫受体（CD36）的调节作用。方法分别构建NR4A1超表达腺病毒载体（AdCMV～NR4A1）及干涉腺病毒载体（AdHl－siRNA／NR4A1）。体外培养小鼠卵巢颗粒细胞,贴壁生长至90％时,分为病毒感染组、胰岛素（100nmol／L）与胰岛素增敏剂（10μmol／L）组和病毒＋胰岛素组。Trizol裂解细胞提取总RNA,实时荧光定量PCR法检测颗粒细胞中Adipo—R2,UCP2,CD36的mRNA表达水平。结果在小鼠卵巢颗粒细胞中超表达NR4A1能够促进Adipo—R2,UCP2,CD36基因的转录（P〈O．05）,RNA干扰NR4AI后则可以抑制以上基因的表达（P〈0．05）;胰岛素可以促进UCP2,CD36基因的表达（P〈O．05）,而对Adipo—R2的作用不明显;另外胰岛素增敏剂曲格列酮也能够促进Adipo—R2,UCP2,CD36的表达（P〈0．05）;RNA干扰NR4A124h后,再向细胞中加入生理剂量（100nmol／L）胰岛素30rain后Adipo—R2,UCP2,CD36的表达水平与单独干涉组比均可逆转升高（P〈O．05）,其中UCP2的表达水平可升高到胰岛素组同样的水平,但Adipo—R2,CD36的逆转升高水平并没有达到仅加入胰岛素时的升高水平（P〈O．05）。结论NR4A1对Adipo—R2,UCP2,CD36具有正向调节作用,同时与胰岛素或胰岛素增敏剂可能有协同调节作用,进而发挥对脂肪代谢的调控。     

男女新生儿脐带血血清蛋白质组的比较

为发现不同性别新生儿之间蛋白质表达谱的差异,利用胰蛋白酶对上述血清蛋白分别进行酶解,并通过反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对肽段混合物进行了分离,进一步通过电喷射离子化串联质谱法(ESI-MS/MS)鉴定了分离的肽段。本研究中共鉴定出837种非冗余蛋白质,其中不同类型血清中共有的蛋白质有282种,另有239种和213种分别属于男性新生儿和女性新生儿特有蛋白质。对其中53种差异蛋白质进行了分析,初步探讨了它们在胎儿生长发育以及性别分化过程中的作用。     

人SET基因重组腺病毒载体在小鼠颗粒细胞的表达

目的 以原代培养的小鼠卵巢颗粒细胞为模型,观察人SET基因重组腺病毒载体在卵巢颗粒细胞的感染效率和基因表达效果.方法 分离并培养小鼠颗粒细胞.扩增人SET基因重组腺病毒载体AdCMV-SET和对照重组腺病毒载体AdCMV,感染原代培养的小鼠颗粒细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)检测感染效率;qRT-PCR方法检测SET mRNA表达;Western blot方法检测SET蛋白的表达水平.结果 获得的重组腺病毒载体体外感染小鼠颗粒细胞,24 h观察到GFP表达.与AdCMV感染组相比,AdCMV-SET感染组SET mRNA表达水平显著增高(P＜0.05).与空白对照组(Mock)及感染AdCMV组相比,AdCMV-SET感染组SET蛋白水平显著增高(P＜0.05).结论 构建的人SET基因重组腺病毒载体能高效感染小鼠颗粒细胞、并有效表达,对细胞活率无影响.