血浆可溶性P-选择素在原发性肝癌患者中的临床意义

探讨血浆可溶性P—选择素(sP-selectin)在原发性肝癌患者中的临床意义。应用ELISA法检调139例原发性肝癌患者血浆sP-selectin的水平。原发性肝癌患者血浆sP-selectin含量明显高于正常对照组(P＜0．01)，其中临床Ⅱ期患者高于临床I期患者，而临床Ⅲ期患者又高于临床Ⅱ期患者。术后第15d，患者血浆sP-selectin含量较术前明显降低(P＜0．01)，但仍明显高于正常对照组(P＜0．01)。术后第30d，患者血浆sP-selectin含量较术后第15d进一步降低(P＜0．01)，与正常对照组比较差异无显著性(P＞0．05)。提示原发性肝癌患者血浆sP-selectin水平明显高于正常人，而且其水平与病情呈正相关。手术切除肝癌可降低患者血浆sP-selectin水平。血浆sP-selectin的检测及动态观察可能对原发性肝癌的辅助诊断、病情发展的判断、疗效观察以及预后估计具有一定的临床意义。     

树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外对自体肝癌细胞杀伤活性的研究

目的:探讨树突状细胞(DC)激活的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)体外对自体肝癌细胞杀伤活性.方法:从肝癌患者外周血获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)和肿瘤抗原激活DC,然后用DC来激活TIL,观察TIL在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性.结果:DC激活的TIL具有很高的对自体肝癌细胞杀伤活性,杀伤率为(89.39±3.05)%,明显高于未经DC激活的TIL、CD激活的T淋巴细胞和未经DC激活的T淋巴细胞对自体肝癌细胞的杀伤率.结论:肝癌患者外周血DC能诱导TIL产生高效而特异的抗肝癌免疫.     

真核表达载体pEGFP-GPC3的构建及表达

目的:构建磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)真核表达载体pEGFP-GPC3,并在小鼠树突状细胞(DC)表达.方法:将质粒pCMV-SPORT6-GPC3和载体pEGFP-N1分别进行双酶切获得目的基因GPC3片段和空载体,回收纯化后用T4连接酶将两者连接并转化E.coli DH5α菌株,用EcoR I、BamH I双酶切鉴定后通过脂质体法转染到DC中,然后进行荧光检测和Western blot分析.结果:构建的真核表达载体pEGFP-GPC3,转染DC后,荧光显微镜下可见转染的DC中有EGFP-GPC3融合蛋白的表达,Western blot分析发现有相对分子质量(M,)大小约为67 000的蛋白条带.结论:成功地构建了真核表达载体pEGFP-GPC3并在转染DC后能在其中表达,为进一步研究GPC3基因的功能提供实验基础.     

肝细胞性肝癌组织CD133+细胞肿瘤干细胞特性的研究

目的 越来越多的研究表明,肝癌细胞系中能检测到肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)的存在.本研究旨在探讨从肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织样本中分离获得的CD133+细胞是否具有CSCs特性.方法 将2014-02-01-2015-06-30广西医科大学附属肿瘤医院肝胆外科25例手术获得的新鲜HCC组织和对应癌旁组织,采用酶消化法分别消化成单个肝癌细胞和单个肝细胞,利用流式细胞术检测部分单个肝癌细胞和单个肝细胞CD133的表达率.用剩余的单个肝癌细胞进行原代培养,流式细胞术将培养获得的肝癌细胞分选为CD133+和CD133-细胞,通过平板克隆形成实验、肿瘤球形成实验和裸鼠移植瘤形成实验对比分析这两组细胞的CSCs特性.结果 25例HCC组织中CD133的表达率为3.8％～8.3％,平均值为(5.8±1.6)％,而癌旁组织CD133的表达率为0.1％～0.4％,平均值为(0.2±0.1)％,两者比较差异有统计学意义,t=17.12,P＜0.001.CD133+和CD133-细胞的平均克隆率分别为(25.2±0.8)％和(7.6±0.8)％,两者比较差异有统计学意义,t=81.95,P＜0.001.CD133+和CD133-细胞的平均成球率分别为(20.3±0.6)％和(12.5±1.4)％,两者比较差异有统计学意义,t=68.17,P＜0.001.CD133+细胞的裸鼠移植瘤形成能力明显高于CD133-细胞.结论 从HCC组织样本中分离获得的CD133+细胞具有明显的CSCs特性.     

冷冻瘤苗刺激的肿瘤浸润性淋巴细胞体外增殖及抗肿瘤活性研究

目的　研究两种不同肿瘤组织中分离的肿瘤浸润性淋巴细胞在冷冻瘤苗刺激下的增殖反应和抗肿瘤作用。方法　利用冷冻瘤苗刺激从肝癌组织、头颈恶性肿瘤组织手术标本中分离得到的TIL ,在培养 3 0天后 ,观察TIL的增殖反应及抗肿瘤活性。结果　冷冻瘤苗刺激后的TIL与未经冷冻瘤苗刺激的TIL相比 ,扩增倍数无显著差异。但抗肿瘤活性显著提高。结论　冷冻瘤苗刺激可使TIL的肿瘤杀伤活性大为增强 ,但并不能使TIL细胞更有效地扩增。     

负载CD133+肝癌细胞RNA树突状细胞疫苗的免疫活性北大核心CSCD

目的探讨负载人肝细胞性肝癌(HCC)组织来源的CD133+肝癌细胞RNA树突状细胞(CD133+HCC RNA-DC)疫苗的免疫活性。方法采用酶消化法从人HCC组织中分离出肝癌细胞,利用流式细胞术分选出CD133+肝癌细胞,制备负载CD133+肝癌细胞RNA树突状细胞疫苗,最后用流式细胞术检测DC的表型,ELISA法测定DC分泌IL-12水平,采用混合淋巴细胞反应法检测DC在体外刺激自体淋巴细胞增殖的能力。结果 CD133+肝癌细胞RNA树突状细胞的HLA-ABC、HLA-DR、CD86、CD80、CD83表达水平分别是(96.52±2.02)%、(92.17±3.04)%、(94.25±3.28)%、(55.14±1.67)%、(40.53±2.31)%,与肝癌细胞RNA树突状细胞和成熟DC比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。CD133+肝癌细胞RNA-DC、肝癌细胞RNA-DC、成熟DC和未成熟DC分泌IL-12的量分别为(421.50±3.12)、(418.20±1.10)、(324.20±2.19)和(102.47±4.60)pg/ml,前两者之间差异无统计学意义(P=0.14),前两者均高于后两者,差异有统计学意义(P<0.05)。CD133+肝癌细胞RNA-DC与肝癌细胞RNA-DC刺激自体T淋巴细胞增殖能力分别均强于成熟DC和无DC刺激的自体T淋巴细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CD133+肝癌细胞RNA树突状细胞疫苗具有成熟表型,能够在体外有效刺激自体T淋巴细胞增殖。     

169例BCLCB期肝细胞癌切除术预后因素分析

目的探讨BCLCB期肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者手术切除预后的影响因素。方法收集2003年3月至2007年9月169例BCLCB期HCC手术切除患者的临床病理资料,采用Kaplan-Meier法计算术后累积生存率,以Log-rank显著性检验初步筛选出可能影响HCC预后的相关因素,应用Cox回归分析进一步明确影响预后的独立因素。结果 BCLCB期HCC患者术后1、3、5年累积生存率分别为76.3%、46.0%、38.8%。单因素分析表明术前谷丙转氨酶（ALT）、肿瘤包膜、肿瘤数目、肝硬化和术后辅助治疗影响HCC术后累计生存率（P〈0.05）。多因素分析表明肿瘤包膜、肿瘤数目、肝硬化和术后辅助治疗是影响HCC术后生存率的独立因素（P〈0.05）。结论手术切除是BCLCB期HCC患者有效的治疗手段,肿瘤包膜、肿瘤数目、肝硬化和术后辅助治疗是其预后的独立影响因素。     

E-cadherin和β-catenin在肝细胞癌中的表达及意义

[目的]探讨上皮型钙黏素（E-cadherin）和β-连环素（β-catenin）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其与临床病理特征的关系。[方法]采用免疫组织化学方法检测61例HCC组织及其癌旁肝组织中E-cadherin和β-catenin蛋白的表达,分析其表达与HCC临床病理特征的关系。[结果]E-cadherin和β-catenin蛋白在癌组织中的异常表达率分别为34.43%和67.21%,而在癌旁肝组织中的异常表达率分别为14.75%和26.23%,癌组织与癌旁组织比较差异有显著性（P〈0.05）。E-cadherin表达与门脉癌栓、术后复发、肿瘤大小、肿瘤分化、肿瘤个数有关。β-catenin异常表达在不同肿瘤个数及不同肿瘤分化状况下差异有显著性。[结论]E-cadherin和β-catenin的异常表达可能与HCC的发生及术后的复发及转移有关,可能作为监测HCC恶性程度和判断预后的指标。