猪囊虫DNA疫苗在猪体内的组织分布及其安全性探讨

研究猪囊虫DNA疫苗pVAX-S-△c-3n在仔猪体内的组织分布情况，并对其安全性进行分析。将猪囊虫DNA疫苗以肌注方式免疫仔猪，分别于接种后1d，7d，4w，8w，12w分离各组织，提取组织总DNA，用PCR法扩增质粒上抗原基因的部分序列，分析质粒DNA在不同组织内的分布及随时间变化的情况。结果表明接种后第一天，除了脑，其余组织都能检测到质粒，但随时间延长，仅注射部位能检测到质粒，且数量不断下降。肌注质粒在猪体内注射部位以外的组织中较短时间就被清除，因此质粒与染色体发生整合的可能性不大。     

杆状病毒早期启动子载体的构建及报道基因的表达

目的 :用苜蓿尺蠖核多角体病毒 (Ac NPV)的 IE1基因启动子构建杆状病毒早期基因启动子载体。　方法 :以 Ac NPV p10基因为侧翼序列 ,并将新霉素抗性基因 (neo)插入 IE1基因启动子下游 ,得到转移载体 p Ac PIneo。将它和野生型 Ac NPV DNA共转染昆虫细胞 Sf9,由于 neo基因的表达 ,通过 G418的选择和富集作用 ,得到重组病毒 v Ac PIneo的纯培养。　结果 :用酶切和 Southern印迹杂交证明 ,neo基因整合于 Ac NPV基因组的 p10基因位相。　结论 :成功地构建了杆状病毒早期启动子载体 ,neo基因在受染细胞内从早期到晚期均可发生转录     

原核和真核细胞表达HBeAg的应用研究

目的：将原核细胞和真核细胞分别克隆表达生产的HBeAg,经适当纯化后进行检测分析,并在乙型肝炎抗HBe检测中进行应用和比较。方法：分别用大肠杆菌和家蚕细胞表达生产HBeAg,并用Saphacryl S-200柱层析进行纯化;紫外分光光度法测定表达产物的蛋白含量;EIA法测定HBeAg和HBcAg效价及评估HBeAg的应用效果。结果：原核细胞HBeAg：比活性为10000／mg,HBeAg/HBcAg＝50,用于抗HBe的检测时特异性为96％,灵敏度符合国家卫生部panel要求,真核细胞HBeAg：比活性为160000／mg,HBeAg/HBcAg＝5000,用于抗HBe的检测时特异性为100％,灵敏度高于国家卫生部panel要求的1－2个滴度。结论：真核细胞表达的HBeAg比活性高HBcAg含量低,在抗HBe检测时的应用效果优于原核细胞。     

染性法氏囊病病毒分离株变异的研究

为了了解我国传染性法氏囊病病毒(IBDV)的变异现状,并为研究高效疫苗打下基础,用琼脂糖凝胶电泳,SDS-PAGE和序列分析等分子生物学方法,分析IBDV病毒RNA,结构蛋白的变异情况。结果表明⑴3种不同源IBDV均由双节段RNA组成,大小基因片段的电泳迁移率各病毒间无差异;⑵不同源IBDV的结构蛋白带谱相同,但各蛋白带的百分含量有差异;⑶IBDV血清Ⅰ型不同亚型的JS3和JS4毒株主要保护性抗原VP2高变区核酸序列的同源性最高达98%,与已发表的vvIBDV,IBDV变异株,IBDV经典株及IBDV弱毒株核苷酸序列同源性在92%～98%之间。根据IBDV的大开放读框推导出该片段编码蛋白的氨基酸序列,JS3和JS4的同源性最高达97%,与上述其它毒株的同源性在91%～97%之间;七肽区的氨基酸序列,在强毒株完全相同,而在弱毒株有一个丝氨酸突变成其它氨基酸。     

survivin基因shRNA真核表达载体的构建及其对人胃癌细胞株中survivin表达的影响

背景:胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成员,在胃癌组织中高表达。目的:构建survivin基因短发夹RNA(shRNA)真核表达载体并观察其对人胃癌细胞株BGC823和SGC7901中survivin表达的影响。方法:根据GenBank中survivin基因序列设计并合成能转录shRNA的双链DNA序列,插入含有绿色荧光蛋白(GFP)基因和U6启动子的真核表达载体pRNAT-U6.3中,构建重组载体pRNA-shSUR。重组载体经鉴定后转染胃癌细胞株BGC823和SGC7901,以转染pRNA-shControl作为阴性对照。荧光显微镜下观察转染情况,蛋白质印迹法检测survivin蛋白表达,Annexin V-FITC/PI双染法检测胃癌细胞凋亡情况。结果:成功构建了针对survivin基因的shRNA表达载体。转染胃癌BGC823和SGC7901细胞48 h后,与阴性对照组相比,pRNA-shSUR组GFP表达增强,survivin蛋白表达受到明显抑制(P<0.05),胃癌细胞早期凋亡率明显增加。结论:成功构建靶向survivin基因的特异性shRNA真核表达载体,转染胃癌细胞后可抑制survivin蛋白表达并促进细胞凋亡,为进一步研究survivin基因与胃癌生物学行为以及化疗耐药等的相关性奠定了基础。