妊娠早期超低剂量脂多糖注射诱发子痫前期大鼠模型

目的 在妊娠甲期利用脂多糖建立孕鼠子痫前期模型,为子痫前期发病机制探索奠定基础. 方法 研究第1步是探索脂多糖诱导孕鼠子痫前期模型的合适剂量:24只妊娠大鼠随机分为6组(n=4),其中5组分别于妊娠第5天尾静脉缓慢注射2 ml的脂多糖溶液,其脂多糖剂量分别为0.3、0.5、0.7、1.0、2.0 μg/kg,另1组注射2 ml生理盐水为对照组.采用配对或两独立样本t检验比较各组血压、尿蛋白总量和胎盘病理变化,确定最合适脂多糖造模剂量.第2步是应用所选脂多糖的合适剂量造模.模型组:取19只孕鼠于妊娠第5天尾静脉注射最佳剂量脂多糖,其中15只于妊娠第20天处死取样,另4只喂养至产后第10天.正常妊娠组:取15只孕鼠于妊娠第5天尾静脉缓慢注射生理盐水2 ml.3只交配但未成功受孕的大鼠作为未孕组.采用方差分析及LSD两两检验比较妊娠期及产后血压、尿蛋白总量及胎盘重、胎仔重及病理变化,探讨模型的子痫前期表型特点.结果 第1步研究结果:脂多糖0.3 μg/kg组胎盘重量比对照组增加;0.7、1.0 μg/kg组于妊娠第12天尿蛋白总量达峰值后又下降;脂多糖1.0、2.0 μg/kg组均有1只孕鼠(1/4)于妊娠第16天阴道大量流血死亡;只有脂多糖0.5 μg/kg组血压和尿蛋白总量呈明显上升趋势,且胎仔体重较对照组减低,故选脂多糖0.5 μg/kg作为最佳造模剂量.第2步研究结果:模型组大鼠较正常妊娠组于妊娠第6天始血压增高[(124.89±1.79) mm Hg与(119.02±1.80) mm Hg,LSD检验,P=0.03]、妊娠第9天始尿蛋白总量增加[(2.02±0.29) mg与(1.11±0.18) mg,LSD检验,P=0.00],妊娠第20天吸收胚胎数目增多[3.6％(7/194)与0.0％(0/200),Fisher精确概率法,P=0.01],胎盘出血发生率增高[4.1％(8/194)与0.0％(0/200),Fisher精确概率法,P=0.00],胎儿生长受限发生率增加[13.9％(27/194)与6.0％(12/200),X2=6.92,P=0.01],病理组织学显示胎盘明显炎症细胞浸润,肾小球系膜细胞增多、肾小管上皮细胞肿胀脱落.模型组分娩后第6天血压及尿蛋白总量恢复至基础值,未孕组大鼠血压及尿蛋白总量无改变. 结论 妊娠早期尾静脉注射脂多糖0.5μtg/kg可成功诱导大鼠出现子痫前期表型.     

猪囊虫DNA疫苗pEP1的生物安全性研究

猪囊虫核酸疫苗pEP1能在猪体内产生较高滴度的保护性抗体,具有较高的免疫保护率,本研究就核酸疫苗pEP1的生物安全性问题进行了深入探讨.首先,将核酸疫苗pEP1以肌注方式免疫仔猪,分别于接种后1天、7天、4周、8周分离各组织,提取组织总DNA,利用PCR技术分析质粒DNA在各组织的分布.研究发现,在疫苗接种后第1天几乎所有组织都能检测到质粒DNA,随着时间的延续,仅在注射部位检测到质粒的存在,说明肌注DNA疫苗在注射部位以外组织中很快被清除.其次,对残存质粒的注射部位组织进行细胞基因组整合可能性分析,并未发现质粒DNA整合入宿主细胞基因组中.同时采集猪舍周围样品,PCR法分析DNA疫苗上的CMV启动子基因、抗性基因和抗原表位基因在环境中发生转移和扩散的可能性,结果显示疫苗质粒并没有转化整合环境细菌.因而我们认为该猪囊虫核酸疫苗对猪体和环境都是安全的,具有很好的应用前景.     

腺病毒介导的小鼠可溶性endoglin和可溶性血管内皮生长因子受体-1重组蛋白的构建和功能初步鉴定

目的 构建腺病毒介导的小鼠可溶性endoglin(sEng)和可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)重组蛋白,观察其对内皮细胞管化及滋养细胞迁移的影响.方法 提取小鼠胎盘组织总RNA,通过RT-PCR获得sEng和sFlt-1 cDNA,插入到穿梭载体pAdTrack-CMV中,获得pATC-sEng和pATC-sFlt-1质粒,转化其至pAdeasy-1受体菌,选阳性克隆转染293A细胞,获得Ad/sEng和Ad/sFlt-1,制备高滴度病毒液.用病毒感染COS7细胞,检测sEng和sFlt-1蛋白表达,并通过成管和划痕实验观察两种蛋白对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)管化和BeWo细胞迁移的影响.结果 成功获得sEng和sFlt-1重组腺病毒,其滴度分别为2.2×1011pfu/ml和2.0×1011pfu/ml.感染COS7细胞后,sEng和sFlt-1蛋白均较高表达,并能抑制HUVEC管化及BeWo细胞迁移,两者有协同作用.结论 构建的腺病毒介导的小鼠sEng和sFlt-1重组蛋白对血管生成和滋养细胞迁移有明显抑制作用.     

重度子(癎)前期和正常妊娠胎盘中微小RNA-155及富含半胱氨酸蛋白61的差异表达

目的 探讨微小RNA-155(microRNA-155,miR-155)和富含半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich 61,CYR61)在重度子(癎)前期和正常妊娠胎盘中差异表达的意义. 方法取18例重度子(癎)前期患者(孕36～40周)胎盘和同期分娩且孕周匹配的18例正常产妇胎盘,从mRNA水平检测miR-155和CYR61 mRNA的表达情况,并在蛋白水平检测CYR61的表达情况. 结果 与正常产妇胎盘相比,重度子(癎)前期组胎盘的miR-155表达水平明显增高(165.7±16.4和527.9±49.1,t=7.00,P＜0.01);而CYR61 mRNA表达水平及蛋白表达水平均降低(31.7±2.7和16.4±1.2,t=5.10,P＜0.01;36.4±1.5和19.7±1.2,t=36.26,P＜0.01).重度子(癎)前期和正常妊娠胎盘组织中的miR-155与CYR61 mRNA的检测结果的相关性分析显示,两组内两者表达均呈负相关(r=-0.52,P＜0.05;r=-0.57,P＜0.05). 结论重度子(癎)前期患者胎盘中miR-155的上调,可能与促血管生成因子-CYR61的表达下降有关.miR-155、CYR61可能共同参与了子(癎)前期胎盘血管缺陷的发生.     

信号肽和辅助性T细胞表位以及GST表位增强猪带绦虫保护性抗原诱导免疫应答的初步研究

目的：研究信号肽和辅助性T细胞表位以及GST表位增强猪带绦虫保护性抗原诱导的免疫应答。方法：在猪绦虫融合抗原pCC27(本室从六钩蚴cDNA表达文库筛选的三个保护性抗原经拼接所得)基因片段5′末端引入人IL-2信号肽、一个通用型辅助性T淋巴细胞表位，谷胱甘肽还原酶的T和B淋巴细胞表位(TGG)，经pGEX4T-2表达鉴定，序列分析后构建成DNA疫苗，通过肌肉注射途径将这种DNA疫苗免疫小鼠。结果：这种含辅助表位的DNA疫苗诱导的免疫应答效果明显超过对照组，对绦虫卵攻击的保护率为90％。结论：构建了含绦虫融合抗原pCC27及TGG的核酸疫苗，动物试验结果表明．TGG表位既可提高IgG、IgG1、IgG2a的水平，又进一步增强Th1和Th2细胞间的平衡关系。免疫小鼠对绦虫卵的攻击具有很好的保护作用。     

白血病抑制因子影响人子宫内膜间质细胞血管内皮生长因子表达的体外研究

目的 探讨白血病抑制因子(LIF)在体外条件下对人子宫内膜间质细胞(hESCs)血管内皮生长因子(VEGF)生成的影响,以及VEGF在体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUvECs)形成管腔的能力.方法 体外培养分泌期hESCS,加不同浓度LIF处理24 h.半定量RT-PCR方法检测hESCs VEGF mRNA的表达;Western blot方法检测hESCs细胞沉淀中VEGF蛋白的表达以及培养上清中VEGF蛋白的分泌;收集各组hESCs的培养上清,加入在Matrigel上平铺生长的HUVECs细胞中,观察HUVECs在体外形成管腔的能力.结果 与对照组相比,LIF处理组能明显增加hESCs VEGF mRNA水平的表达,明显增加hESCS VEGF蛋白的表达和分泌;hESCs经LIF处理后的培养上清,能明显增加HUVECs形成新生血管的能力.结论 LIF可能通过增加hESCs VEGF的表达参与调控胚胎着床过程中的血管形成.     

用辅助性T细胞表位增强猪带绦虫DNA疫苗的免疫保护反应

在猪绦虫融合抗原pCC27(本室从六钩蚴cDNA表达文库筛选的3个保护性抗原经拼接所得)基因片段5′末端引入1个通用型辅助性T淋巴细胞表位、2个谷胱甘肽还原酶的辅助性T淋巴细胞表位(TGG)，构建成DNA疫苗。通过肌肉注射途径将这种DNA疫苗免疫小鼠和仔猪。动物试验结果表明，TGG表位可提高小鼠血清pCC27抗体IgG、IgG1、IgG2a的水平，且长时间保持较高应答水平。用该疫苗免疫仔猪获得了89％的保护率。     

EGFR纳米抗体抑制雌激素依赖的人子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖与迁移

纳米抗体是骆驼来源的一种轻链缺失的抗体,具有与单克隆抗体相似的抗原结合特异性和亲和力,此外还具有分子量小、稳定性好、易于制备等优点,因而具有巨大的生物医药应用价值。本研究利用基因工程技术在大肠杆菌中成功制备出了高纯度的EGFR纳米抗体(antiEGFRnano)。CCK-8法检测细胞增殖及迁移实验(细胞划痕实验和Transwell法检测)证明,重组的EGFR纳米抗体具有显著的抑制子宫内膜癌细胞增殖及迁移的活性,这为靶向EGFR治疗子宫内膜癌提供了一种全新的思路和方法。     

家蚕核多角体病毒载体稳定高效表达ＨＢeＡg条件及其初步应用的研究

利用已构建的含有HBeAg基因的重组家蚕核多角体病毒rBmHBe，摸索了HBeAg在家蚕细胞中表达的最佳条件组合，细胞接种密度（3.2～6.4）×10     

汉坦病毒和恙虫病东方体复合感染的组织细胞培养研究

目的了解汉坦病毒（HV）和恙虫病东方体（Ot）在宿主体内共生情况.方法采用Vero E6细胞体外培养法研究HV、Ot在宿主细胞内共生特征.结果5组感染Vero E6细胞体外培养检测结果发现：先后、同时和单纯实验感染的5组细胞中,HV和Ot先后、同时接种感染组在细胞传至第3代时检测均见有HV和Ot的双重感染,阳性率随传代次数增加而增加.而HV和Ot单纯分别感染组细胞传第2代时即可检测到HV和Ot,阳性率亦随传代次数的增加而增加.在传代培养中单纯感染组的阳性率均显著高于先后和同时感染组.其结果均用PCR和RT-PCR进行了基因鉴定.结论研究结果提示HV和Ot可在同一宿主细胞内共生,在感染初期有相互抑制作用;对HV和Ot的流行病学有一定的理论意义.