跨膜型TNF-α突变体（△-28）的正向和反向信号对U937细胞的作用

目的观察跨膜段突变TM-INF-α（△-28mTM-TNF-α）正反向信号诱导U937促炎因子表达的影响。方法△-28mTM-TNF-α质粒分别转染COS-7，检测表达的△-28mTM-TNF-α诱导U937产生NO的量。同样△-28mTM-TNF-α质粒转染U937，sTNFRI激活反向信号后，检测U937促炎因子IL-8以及IL-1β的mRNA转录水平。结果△-28mTM-TNF-α不能够诱导U937产生NO，但被激活并传递反向信号促使U937的促炎因子转录和表达。结论跨膜段突变抑制了TM-TNF-α正向信号但不影响反向信号的传递。     

TM-TNF-α介导的反向信号协同增强sTNF-α对U937细胞的激活作用

目的用sTNFRⅠ预先激活TM-TNF-α介导的反向信号，观测其对sTNF-α激活单核细胞系U937细胞的影响。方法预先用sTNFRⅠ与U937细胞作用30min，洗涤后加入sTNF-α作用不同时间，观测预激活反向信号对sTNF-α刺激U937产生活性氧、胞内促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的转录及IkB-α水平(Western blot)的影响。结果单独用sTNFRⅠ激活的反向信号并不影响U937细胞的功能，而预激活反向信号能协同增强sTNF-α刺激U937细胞产生活性氧，且呈sTNFRⅠ浓度、sTNF-α浓度依赖关系；预激活反向信号协同增强sTNF-α刺激U937炎性细胞因子mRNA(TNF-α、IL-1β、IL-8等)的转录水平；并促进U937细胞IkB-α的降解。结论预先激活TM-TNF-α介导的反向信号协同增强sTNF-α对U937的激活作用，提示反向信号可能参与机体对早期炎症反应的调节。     

利用噬菌体肽库筛选TNF-α表位的相关短肽

目的 从噬菌体肽库筛选TNF－α相关短肽，为临床上治疗肿瘤奠定基础。方法 用可溶性TNF受体Ⅰ（sTNFR Ⅰ）筛选噬菌体随机12肽库，利用细胞毒效应进行生物学效应筛选，再进行单链DNA测序。结果 分别得到若干模拟跨膜型TNF－α（TM－TNF－α）和模拟分泌型TNF－α（S－TNF－α）细胞毒效应的短肽，选择细胞毒效应最好的模拟TM－TNF－α短肽进行人工合成，体外实验显示此肽段对S－TNF－α耐受肿瘤细胞系HL－60具有明显细胞毒效应，且主要引起靶细胞凋亡。另外，利用激光共聚焦显微镜证实该合成肽段不能诱导NF－κB发生核转位。结论 获得模拟TM－TNF－α的短肽，为TM－TNF－α用于临床抗瘤治疗提供新线索。     

87位氨基酸在TM-TNF-α诱导靶细胞凋亡中的作用

目的　研究TM TNF α分子结构与功能的关系 ,阐明其诱导靶细胞凋亡的分子机制。方法　构建定点突变的 87/PheTM TNF pcDNA3.0 ,并瞬时转染Cos 7细胞 ,利用MTT法 ,annexinⅤ ,Westernblot检测TM TNF α突变体的胞毒效应 ,对靶细胞死亡方式及对核转录因子NF κB转位的影响。结果　 87位氨基酸置换后 ,TM TNF α对靶细胞的杀伤率无明显改变 ,但TM TNF α突变体通过促进NF κB核转位 ,诱导靶细胞死亡的方式由凋亡转为坏死。结论　 87位氨基酸是TM TNF α诱导靶细胞凋亡的关键氨基酸残基 ,其所在的结构域可能是诱导凋亡的功能域     

TNF受体封闭肽对大鼠佐剂性关节炎的影响

目的观察肿瘤坏死因子(TNF)受体封闭肽对大鼠佐剂性关节炎的影响。方法注射弗氏完全佐剂建立大鼠佐剂性关节炎模型,在关节局部注射TNF受体封闭肽,观察对大鼠关节肿胀度、关节组织病理改变及腹腔巨噬细胞表达IL-1β mRNA和TNF-α mRNA(RT-PCR)的影响。结果建立了与人类类风湿性关节炎极其相似的大鼠佐剂性关节炎模型;TNF受体封闭肽治疗10 d后,大鼠踝关节肿胀完全受到抑制;关节组织内炎症细胞浸润减少,炎性病理损伤明显减轻;大鼠腹腔巨噬细胞表达的TNF-α mRNA和IL-1β mRNA明显减低。结论TNF受体封闭肽通过抑制佐剂性关节炎TNF-α和IL-1的产生,而发挥抗炎作用,明显减轻关节的病理性损伤,有效抑制关节炎的临床进程。     

全反式维甲酸与VEGF联合应用诱导小鼠胚胎成纤维细胞定向成骨分化

目的研究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)与VEGF联合应用对于小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)定向成骨分化的影响。方法取NIH孕鼠(孕12~15 d)子宫内的胎鼠,去掉头、心、肝等器官后,采用胰蛋白酶消化贴壁法分离培养MEFs。利用HEK-293细胞采用反复冻融法扩增重组腺病毒红色荧光蛋白(recombinant adenovirus-red fluorescent protein,Ad-RFP)及Ad-VEGF。采用ALP染色和ALP定量检测法检测单独ATRA或VEGF以及ATRA和VEGF联合应用培养MEFs第3、5天ALP活性变化。将第3~4代MEFs分为A、B、C、D 4组,分别加入DMSO+Ad-RFP、ATRA、Ad-VEGF、ATRA+Ad-VEGF。实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测第3、7天成骨相关标志物ALP、Ⅰ型胶原、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)及成血管相关标志物VEGF、血管生成素1(angiopoietin 1,ANGPT1)、内皮黏蛋白(endomucin,EMCN)mRNA表达;免疫组织化学染色检测各组第3、5、7天OPN、VEGF蛋白表达;茜素红染色检测各组成骨诱导14、21 d钙盐沉积水平。取15只4~6周龄无胸腺雌性裸鼠,随机分为3组,每组5只,分别于背侧与腹侧皮下注射经ATRA、Ad-VEGF、ATRA+Ad-VEGF处理后的MEFs。植入后5周行X线片观察、大体观察及组织学染色(Masson、HE及番红O-固绿染色),观察各组裸鼠体内异位成骨情况。结果成功分离培养MEFs;扩增后的Ad-RFP及Ad-VEGF成功转染MEFs,转染效率约为50%和20%。ALP活性检测示,单独使用ATRA或VEGF均能增强MEFs中ALP活性,且ATRA作用较VEGF强;ATRA和VEGF联合使用较单独使用显著增强了MEFs中ALP活性(P<0.05)。qRT-PCR检测示,ATRA联合Ad-VEGF使用上调了早期成骨分化相关标志物ALP、OPN、Ⅰ型胶原mRNA相对表达量(P<0.05);7 d时成血管相关标志物VEGF、EMCN及ANGPT1 mRNA相对表达量有所上升(P<0.05)。免疫组织化学染色示,ATRA联合Ad-VEGF不仅增强了OPN蛋白表达,VEGF蛋白表达在第7天也有所增强。茜素红染色示,单独应用ATRA或Ad-VEGF诱导钙盐沉积作用较弱,二者联合应用明显增强了MEFs成骨晚期钙盐沉积的效应。裸鼠体内植入实验结果显示,X线片观察发现与其余两组相比,ATRA+Ad-VEGF组存在明显骨块,且骨块体积较大,组织学染色可见大量胶原及成熟骨小梁、骨基质形成以及胶原骨组织。结论ATRA与VEGF联合应用能诱导MEFs定向成骨分化。     

趋化因子受体CXCR5在肺癌中的表达及其意义

目的:探讨肺癌原发灶中趋化因子受体CXCR5 的表达特点及与其临床病理的关系.方法:对79例肺癌手术切除标本组织采用免疫组化法检测CXCR5 表达.结果:CXCR5在肺腺癌组织100% (46/46)中呈阳性表达,33 例肺鳞癌中仅1 例表达(3.0%) .CXCR5 的表达与肺癌患者的性别、年龄、肿瘤大小无关(P＞ 0.05) ,而与肺癌患者的组织学类型密切相关(P＜ 0.01) .结论:CXCR5表达与组织学类型密切相关.CXCR5在肺腺癌选择性的表达值得进一步进行相关研究.     

脂筏对跨膜型TNF-α信号的影响

目的构建仅定位在脂筏内或外的tmTNF-α突变体,研究脂筏与tmTNF-α生物学功能的关系。方法通过重组PCR,构建C-47A-tmTNF-α-pIRES2-EGFP,cav-tmTNF-α-pIRES2-EGFP重组质粒。采用激光共聚焦观察定位、蔗糖密度梯度离心法提取脂筏、MTT比色法检测胞毒。结果获得了预期突变,且无任何其它点突变,移码及缺失突变的突变体。tmTNF-α部分定位在脂筏内,效应细胞的胞毒与tmTNF-α定位在脂筏内外无关,而破坏靶细胞脂筏结构导致胞毒效应下降,且与ICAM-1相关。结论效应细胞的胞毒与脂筏无关,而靶细胞与脂筏密切相关,该研究有助于进一步认识tmTNF-α介导的生物学功能与脂筏间的关系。     

利用脑电超慢涨落图技术对门诊神经症患者的研究

目的:利用脑电超慢涨落图技术(ET),探讨门诊神经症各年龄段患者脑内神经递质、各导联熵值的差异。方法:采用脑电超慢涨落分析仪,对门诊各年龄段神经症患者检测,分析神经症患者脑内神经递质、各导联熵值的差异和受年龄、性别的影响。结果:0²9岁,5-HT、Ach显著高于正常值(P<0.05);2929岁,5-HT、Ach显著高于正常值(P<0.05);29³9岁,AchR、Ach显著高于正常值(P<0.05),GABA、Glu显著低于正常值(P<0.05);3939岁,AchR、Ach显著高于正常值(P<0.05),GABA、Glu显著低于正常值(P<0.05);39⁴9岁,AchR显著高于正常值(P<0.05),GABA、Glu、NE显著低于正常值(P<0.05);4949岁,AchR显著高于正常值(P<0.05),GABA、Glu、NE显著低于正常值(P<0.05);49⁵9岁,GABA显著低于正常值(P<0.05);5959岁,GABA显著低于正常值(P<0.05);59⁶9岁,Glu显著低于正常值(P<0.05)。各导联熵值与正常值对比发现在正常值范围内,偏高,且随患者年龄的增加而增加,在3969岁,Glu显著低于正常值(P<0.05)。各导联熵值与正常值对比发现在正常值范围内,偏高,且随患者年龄的增加而增加,在39⁴9岁年龄段最高,然后降低。结论:可以根据患者GABA降低做出临床诊断和使用苯二氮类药物;神经症患者的大脑较为混乱。     

应用指数平滑法预测上海市甲型病毒性肝炎发病趋势

目的 应用指数平滑法拟合和预测本市甲肝疫情.方法 分别以1990～2008年按年度和月份的上海市甲肝发病资料数据建立指数平滑模型,以2009年的数据来评价模型的效果.结果 上海市甲肝发病趋势明显下降,年发病数据采用Holt趋势指数平滑模型最佳,按月分布发病数使用Holt-Winters相乘模型拟合为最佳,预测模型具有一定的参考意义.结论 针对上海市甲肝发病的不同类型数据,均可选用不同指数平滑模型拟合,该方法简单易行,为传染病预测提供了参考.