实时荧光定量PCR技术在群体感染性腹泻病原体快速筛查中的应用

目的:建立快速筛查感染性腹泻标本的实时荧光定量PCR法,考察其在群体感染性腹泻病原体快速筛查中的应用.方法:采用国家标准的细菌培养法(或传统ELISA法)对2006年丽水地区发生的总计14起共487例群体感染性腹泻标本进行病原体筛查,同时采用实时荧光定量PCR方法对该487例标本进行检测,比较两者的实验结果,并考察实时荧光定量PCR方法的特异性和灵敏度.结果:实时荧光定量PCR检测结果与传统检测方法的符合率为97.54%,除完全符合的278例标本之外,另有7例采用传统方法检测为阴性的标本用实时荧光定量PCR检测显示为阳性.表明实时荧光定量PCR方法具有更高的灵敏度;特异性和灵敏度实验表明实时荧光定量PCR方法的特异性达100%,灵敏度为102拷贝/ml.结论:实时荧光定量PCR法具有准确性好、灵敏度高、检测快速等优点.是一种理想的群体感染性腹泻病原体快速筛查的方法.     

人感染巴贝西原虫个案分析

1病例资料患者潘某,女,48岁,浙江省丽水市青田县人,农民。2011年10月16日到丽水市中心医院就诊,3周前因受凉后在家中出现发热,自测体温38℃,伴咳嗽、咳少量白色痰液,无胸闷气闭,无畏寒寒战,无全身肌肉酸软不适,无鼻塞流涕,无咯血胸痛,无腹胀腹痛,至当地诊所抗生素不规则治疗,发热症状反复。12日出现寒战,即到门诊就诊,患者意识清,精神软,胃纳欠佳,睡眠差,小     

一例由输血引起恶性疟疾的调查

目的对无外出史的恶性疟疾患者进行确诊及发病原因分析。方法对患者及献血者血样采用金标试剂(RDT)、病原学、实时荧光PCR3种方法同时检测。结果从患者和1例赤道几内疟疾流行区回国献血者的血液中均检测到恶性疟抗原阳性、恶性疟原虫及恶性疟原虫核酸阳性。结论对来自高疟疾流行区献血者增加疟疾项目的筛查,预防输血性疟疾的发生。     

登革3型病毒07CHLS001株全基因组序列测定和分析

目的对登革3型病毒浙江分离株07CHLS001进行了全基因组序列测定和分析，为探讨其基因组特征和来源提供依据。方法根据登革3型病毒98TW407株设计22对引物，利用RT-PCR法扩增出07CHLS001株基因组不同区段的eDNA片段，通过序列测定和拼接获得其全基因组序列。结果07CHLS001株基因组全长10707 nt，包含一个开放读码框（95-10 267nt），编码3390个氨基酸。它与登革3型病毒ThD3-1687-98株、98TW407株和80-2株的全基因组序列核苷酸相似性依次为98．7％、98．5％和94．6％。prM／M-E核苷酸序列系统发生树分析表明，07CHLS001与来自泰国的5个株系形成了一个Bootstrap支持率为90％的分枝。结论07CHLS001属于登革3型病毒的亚型Ⅱ。07CHLS001株全序列的测定，对进一步研究该株系的特性有十分重要的意义。     

国内首次在鼬獾中检测到狂犬病毒

目的:调查鼬獾中狂犬病毒的感染情况,为防制该病提供科学依据.方法:用DFA和RT-PCR方法分别检测鼬獾脑组织狂犬病毒特异性抗原及核酸,确定阳性标本.结果:在丽水地区捕获鼬獾23只,检测到狂犬病毒阳性标本1份,阳性率为4.35%.结论:疫区鼬獾中存在狂犬病毒.     

2005-2010年浙江省龙泉市肾综合征出血热监测及病毒分离鉴定

目的探索浙江省龙泉市2005-2010年肾综合征出血热(HFRS)的流行规律,为制定防制策略提供科学依据。方法采用描述流行病学方法分析出血热疫情。开展宿主动物监测,将汉坦病毒阳性鼠肺接种Vero-E6细胞分离病毒,用单克隆抗体直接免疫荧光法(DFA)鉴定毒株及分型,并对S片段进行种系发生分析。结果 2005-2010年龙泉市累计报告HFRS病例278例,年均发病率为16.38/10万,死亡2例,病死率为0.72%.每年5-7月和11月至翌年1月为流行高峰,分别占全年发病总数的31.65%和37.05%。从黑线姬鼠分离到3株汉坦病毒,经DFA鉴定均为汉滩型(Ⅰ型)病毒。结论龙泉市存在以汉滩型病毒为主的HFRS自然疫源地。     

实时荧光定量PCR在手足口病肠道病毒快速检测中的应用

目的建立快速检测手足口病肠道病毒的实时荧光定量PCR法,并作出应用分析。方法采用卫生部《手足口病预防控制指南》(2008年版)推荐的RT-PCR法,对丽水市2008年4～5月间发生的172例临床诊断手足口病患者的324份标本进行人肠道病毒、柯萨奇病毒A组16型和肠道病毒EV71型特异性核酸的检测,同时采用实时荧光定量PCR法进行平行检测,比较两者的实验结果,分析实时荧光定量PCR方法的特异性和灵敏度。结果实时荧光定量PCR检测324份标本,肠道病毒通用核酸阳性70份,柯萨奇A16核酸阳性22份,肠道EV71病毒核酸阳性15份,与RT-PCR结果一致,符合率100%。结论实时荧光定量PCR法具有特异性强、灵敏度高等优点,是一种理想的手足口病肠道病毒的检测方法。     

丽水市结核分枝杆菌耐药基因ropB的检测分析

利福平(RFP)是最重要的一线抗结核药物之一,据报道约90%以上RFP耐药株对异烟肼(INH)也耐药,而单耐RFP的菌株很少,故RFP耐药可作为耐多药结核病的标志[1-2]。本研究对丽水市90株结核菌培养物进行了药敏实验和结核分枝杆菌RFP耐药相关基因(ropB)序列的检测,现简要报告如下。1材料...     

浙江省丽水市首次狂犬病动物宿主感染率调查

目的调查浙江省丽水市狂犬病病毒在动物宿主中的感染率，为防制该病提供科学依据。方法收集丽水市狂犬病疫区犬和猫的脑组织标本，用DFA和RT～PCR方法分别检测狂犬病病毒抗原及核酸，确定阳性标本。结果犬脑组织阳性标本9份，分动物宿主类别时其阳性率为6．72％，不分动物宿主类别时其阳性率为6．16％，猫脑组织中未检出阳性标本。结论首次在丽水市用免疫学和分子生物学方法进行狂犬病病毒的实验室检测，狂犬病病毒在丽水狂犬病疫区的动物宿主（尤其是犬）之间相互传播，犬狂犬病疫情存在扩散的现象。