核因子KB在被动致敏的人气道平滑肌细胞增殖中的信号转导作用

目的　探讨核因子κB(NF κB)是否参与被动致敏的人气道平滑肌细胞 (HASMC)增殖及是否是蛋白激酶C(PKC)激活后的下游途径。方法　用 10 %哮喘患者血清被动致敏HASMC ,以10 %非哮喘者血清为对照 ,并用吡咯烷二硫氨基甲酸 (PDTC)及 12 肉豆蔻酰 13 乙酸佛波酯 (PMA)干预HASMC ,用流式细胞术、MTT法及增殖细胞核抗原 (PCNA)免疫荧光技术检测HASMC增殖 ;NF κBp6 5 免疫荧光技术及电泳迁移率改变分析 (EMSA)检测NF κB活性。结果　 (1)哮喘血清处理的HASMC ,S期细胞比例、吸光度值 (A值 )、PCNA表达阳性率、NF κBp6 5阳性率及EMSA灰度值均较对照血清组增加 (均P <0 0 5 ) ,PDTC预处理后上述指标均下降 (均P <0 0 5 )。 (2 )PMA 哮喘血清处理HASMC后 ,S期细胞比例、A值、PCNA表达阳性率、NF κBp6 5阳性率及EMSA灰度值分别为 (2 5 5 2± 3 38) %、0 5 72± 0 0 5 4、(81 2± 10 2 ) %、(2 6 5± 5 0 ) %和 716 5 4± 12 2 93,PDTC预处理后上述指标均下降 (均P <0 0 5 )。结论　NF κB参与了哮喘血清被动致敏的HASMC增殖 ,在其增殖中存在着PKC/NF κB信号途径。     

香烟烟雾增加支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞的增殖表达

吸烟是影响支气管哮喘（简称哮喘）发生、发展的重要危险因素，它可以增加哮喘发生频率和症状的严重程度；香烟烟雾（CS）可使多种细胞蛋白激酶C（PKC）活化，但机制尚未明确。我们的实验通过CS及PKC激动剂：12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯（PMA）、抑制剂：马来酰亚胺甲磺酸盐（Ro-31-8220）干预哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs），     

共刺激信号与支气管哮喘大鼠γδT细胞活化关系的研究

我们以前的研究表明[1,2 ] ,γδＴ细胞在支气管哮喘 (简称哮喘 )患者支气管肺泡灌洗液 (ＢＡＬＦ)中明显活化 ;γδＴ细胞可能存在Ｔｈ1/Ｔｈ2模式 ,并表现为Ｔｈ2优势应答。为进一步阐明γδＴ细胞活化的细胞和分子机制 ,我们探讨了单核 /巨噬细胞 (Ｍｏｎ/Ｍ)与γδＴ细胞间共刺激分子Ｂ7∶ＣＤ2 8/ＣＴＬＡ 4的改变。材料与方法　 2～ 3月龄雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 2 0只 ,体重(2 0 0± 5 0 )ｇ。随机分为正常组和哮喘组 ,每组各 10只。哮喘模型的建立、鉴定及标本的收集和处理按文献 [1]方法。用补体攻击结合洗淘法进行γδＴ细胞选择…     

Effect of Nitric Oxide on Potassium Channels of Rats A irway Smooth Muscle Cells

Nitric Oxide( NO) ,the major endothelium-derived relaxing factor( EDRF) ,can relax thesmooth muscle of airway,vascular and gastroin-testinal.NO can also suppress the airway hyperre-sponsiveness of the asthmatic patients.But the ac-curate mechanism involved in these effects have notbeen clearly understood.There are several types ofpotassium channels in the membrane of smoothmuscle cells,including large- conductance Ca2 +- ac-tivated K+( BKCa) channels,voltage- gated K+( Kv) channels and A…     

体外转染JWA核酶反转录病毒载体对人肺动脉平滑肌细胞表型及迁移的影响

目的:探讨JWA核酶基因转染对肺动脉平滑肌细胞表型及迁移的影响。方法:实验于2004-08/2005-04在华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸病研究室完成。质粒pLXSN为第三军医大学附属新桥医院呼吸研究所惠赠。人肺动脉平滑肌细胞(C-12521)及平滑肌细胞生长培养基2(C-22162)购自德国PromoCell公司。设计合成JWA核酶基因并构建于反转录病毒载体pLXSN上,转染体外培养的人肺动脉平滑肌细胞,经鉴定证实转染成功后,应用半定量反转录聚合酶链反应法测定细胞内JWAmRNA的表达,改良Boyden小室法测定细胞迁移情况,半定量反转录聚合酶链反应法及免疫细胞化学法检测α-SMactin表达量反映细胞表型变化。结果:转染JWA核酶基因的细胞(P-JWARZ)JWAmRNA表达量较空载体转染细胞(P-pLXSN)及未转染细胞(肺动脉平滑肌细胞)显著降低,细胞迁移率显著增加,α-SMactin表达量显著减少(JWAmRNA:0.5812±0.0455,0.7823±0.0292,0.8169±0.0289;细胞迁移:29.6±4.72,7.2±1.44,6.6±1.92;α-SMactinmRNA:0.4418±0.0202,0.4767±0.0209,0.2661±0.0119;α-SMactin蛋白:0.2211±0.0093,0.3251±0.0085,0.3200±0.0095,P<0.01)。结论:JWA核酶基因转染可抑制人肺动脉平滑肌细胞内JWA基因的表达,使细胞分化为合成表型,促进细胞迁移。     

核因子κB在蛋白激酶C诱导哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的： 探讨核因子κB（NF-κB）在蛋白激酶C（PKC）致哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖中的作用。方法： 16只Wistar大鼠随机分为哮喘组（8只）和对照组（8只）。应用PKC激动剂PMA和NF-κB抑制剂PDTC干预哮喘组和对照组大鼠ASMCs。采用流式细胞术、MTT法及增殖细胞核抗原（PCNA）免疫荧光技术等方法检测ASMCs增殖；免疫荧光技术及电泳迁移率改变分析(EMSA)检测NF-κB活性。 结果： PMA干预哮喘组ASMCs 后S期细胞比例、A值、PCNA表达率、NF-κBp65阳性率及结合带的灰度值均显著高于未干预的哮喘组ASMCs (均P<0.05)，PDTC预处理后再给予PMA上述指标均低于仅用PMA干预及未干预者(均P<0.05)。仅用PDTC处理的哮喘组ASMCs上述指标均低于未干预的ASMCs (均P<0.05)。结论： NF-κB参与哮喘大鼠ASMCs增殖，在其增殖中存在着PKC－NF-κB信号途径。     

哮喘大鼠外周血T淋巴细胞TH1/TH2细胞因子和PKCα的表达及银杏叶制剂对其影响

目的探讨银杏叶制剂对在哮喘免疫学发病机制中起关键作用的T淋巴细胞部分生物学功能的影响.方法 14只SD大鼠随机分成哮喘和正常两组,每组7只.从每只大鼠外周血分离出T淋巴细胞进行分组培养,72 h后用RT-PCR检测各组IL-2、IL-4、IL-5 mRNA的表达量,Westernblot检测各组细胞膜与细胞浆蛋白激酶Cα(protein kinase C α,PKCα)的表达比率.结果 IL-2、IL-4、IL-5mRNA表达量在哮喘组分别为0.58±0.086、1.03±0.12、0.48±0.08,正常组分别为0.45±0.03、0.35±0.08、0.15±0.05,各因子两组间比较差异有统计学意义(P＜0.01);哮喘组T淋巴细胞给予BN-52021干预后IL-2、IL-4、IL-5 mRNA的表达量明显下降(分别为0.49±0.05、0.55±0.09、0.27±0.05,P＜0.05);正常组IL-2/IL-4 mRNA的比值为1.27±0.20,哮喘组为0.60±0.18,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01),其中哮喘组给予BN-52021干预后比值有所增大0.92±0.15,与未干预组比较有明显变化(P＜0.01).哮喘PMA+BN-52021干预组IL-2、IL-4、IL-5 mRNA表达量分别为1.52±0.25、1.99±0.36、0.68±0.21,明显低于哮喘PMA干预组(P＜0.05),而PMA+Ro31-8220组与PMA+Ro31-8220+BN-52021干预组比较差异无统计学意义(P＞0.05).哮喘空白组PKCα在T淋巴细胞胞膜与胞浆的表达量比率为0.629±0.093,显著高于正常对照组(0.056±0.012,P＜0.01),BN-52021干预后哮喘组比率较未干预组明显下降0.395±0.098(P＜0.05),PMA+BN-52021干预组PKCα比率为0.719±0.163,较PMA干预组(1.28±0.28)低(P＜0.05);哮喘各组T淋巴细胞胞膜与胞浆PKCα表达量的比率与IL-4 mRNA表达量的相关性分析(n=42,r=0.845,P＜0.01)显示呈明显正相关.结论银杏叶制剂对体外培养的哮喘大鼠T淋巴细胞因子IL-2、IL-4、IL-5的分泌均具有抑制作用,而对IL-2分泌的抑制作用相对较弱;银杏叶制剂对哮喘大鼠T淋巴细胞胞膜与胞浆PKCα的表达量比率具有明显的下调作用.     

血管内皮生长因子及其受体2与被动致敏的人气道平滑肌细胞增殖相关性研究

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）及其受体2（KDR）在被动致敏的人气道平滑肌细胞（ASNC）中表达变化及其对ASMC增殖的影响。方法培养人ASMC，用支气管哮喘病人血清被动致敏ASMC。用免疫组织化学技术检测ASMC增殖细胞核抗原（POJA）的表达，MTT法检测细胞代谢活性及流式细胞仪分析细胞周期；用RT-PCR及Western blot方法分别检测VEGF和KDR mRNA及蛋白质在不同组人ASMC的表达程度。结果（1）被动致敏组ASMC较对照组和干预组增殖显著增加（P〈0．05）。（2）被动致敏组ASMC的VEGF121、VEGF165和VEGF189的mRNA表达分别较对照组和干预组显著增加（P〈0．05或P〈0．01）。（3）被动致敏组ASMCVEGF及KDR蛋白质的表达较对照组和干预组显著增加（P〈0．05）。直线相关性分析显示，ASMC中PCNA表达与ASMC中VEGF121、165、189及KDRmRNA表达水平呈正相关（r分别为0．73、0．82、0．77、0．70，P〈0．05）；ASMC中PCNA表达与ASMC中VEGF及KDR蛋白质表达水平也呈正相关（r分别为0．69、0．67,P〈0．05）。结论被动致敏的ASMC中VEGF及其受体KDR表达上调。并与ASMC增殖密切相关。该结果提示VEGF及其受体2可能参与了哮喘气道重建中ASMC增殖的过程。     

转染IkBα基因抑制NF-KB活性对A549细胞侵袭行为的影响

背景与目的:近年来的研究显示核因子-KB(nuclear factor-kB, NF-kB)的活化能够调节肿瘤细胞的侵袭和转移.本研究探讨抑制NF-kB的活性对A549细胞侵袭能力的影响及其可能的机制.方法:构建表达NF-kB抑制物a同分异构体(inhibitor of NF-kB, α isoform, IkBα)的真核表达重组质粒pcDNA3.1( )/IkBα.体外培养A549细胞,分为未转染组(不转染质粒)、转染pcDNA3.1( )组、转染pcDNA3.1( )/IkBα组,分别转染相应的质粒.应用RT-PCR、Western blot检测各组细胞IkBα的表达情况,应用凝胶电泳迁移率改变实验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)检测各组细胞NF-kB的活性,应用Transwell侵袭小室检测各组细胞的侵袭能力,应用RT-PCR方法检测各组细胞MMP-2、MMP-9的mRNA水平,应用明胶酶谱法检测各组细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)的活性.结果:酶切鉴定结果显示pcDNA3.1( )/IkBα质粒构建成功.RT-PCR和Western blot检测结果表明构建的pcDNA3.1( )/IkBα质粒能够在A549细胞中表达IkBα.转染pcDNA3.1( )/IkBα组A549细胞NF-kB活性、侵袭细胞数目、MMP-2活性及MMP-9活性均低于未转染组和转染pcDNA3.1( )组(P值均<0.05),而转染pcDNA3.1( )组与未转染组之间的差异均无统计学意义(P值均>0.05).结论:转染IkBα基因能够抑制A549细胞中NF-KB的活性.NF-kB的活性下降能够抑制A549细胞的侵袭能力,其机制可能与MMP-2、MMP-9表达下调有关.     

丹参注射液对哮喘大鼠气道炎症及CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的 观察丹参注射液对支气管哮喘(哮喘)大鼠气道炎症和CD4 CD25 调节性T细胞(CD4 CD25 Tr)的影响,探讨丹参注射液治疗哮喘的新机制.方法 30只Wistar大鼠随机分成正常对照组、哮喘组、丹参治疗组.计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数并分类,应用苏木精一伊红染色行肺组织病理学检查,流式细胞仪检测外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4 CD25 Tr的比例.结果 丹参治疗组BALF细胞总数及淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞(Eos)百分率较哮喘组均明显减少(P<0.05,P<0.01),与正常对照组比较差异无显著性意义(均P>0.05).病理组织学显示:丹参治疗组较哮喘组肺组织炎性细胞浸润明显减少.哮喘组PBMCs中CD4 CD25 Tr的比例较正常对照组明显减少(P<0.05),丹参治疗组CD4 CD25 Tr的比例较哮喘组明显增加(P<0.05).结论 丹参注射液可减轻哮喘大鼠气道炎症反应,其机制可能与促进CD4 CD25 Tr的产生有关.