抗人膀胱癌单克隆抗体重,轻链可变区基因体外扩增,克隆及序列分析

应用人工合成的两套引物，从分泌抗人膀胱癌特异性单抗的杂交瘤细胞ＢＤＩ－１中提取总ＤＮＡ。以之作模板，经ＰＣＲ法扩增出重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入ＰＵＣ１９质粒，筛选出阳性克隆，用链终止法进行ＤＮＡ序列测定。结果表明：重链可变区基因全长３６６ｂｐ，编码１２２个氨基酸，属于小鼠重链可变区的ＳｕｂｇｒｏｕｐＩＩ，由种系基因中的ＶＨ与Ｄ基因的Ｄｓｐ２．２及ＪＨ４基因重排而成；轻链可变区基因全长３２４ｂｐ，编码１０８个氨基酸，属于小鼠轻链可变区的ＳｕｂｇｒｏｕｐＩＶ，由种系基因中的Ｖκ与Ｊκ４基因重排而成。与已发表的抗体可变区基因序列比较，证明它们是功能性的可变区基因     

白细胞介素-6与肾癌细胞生长关系的实验研究

目的　研究白细胞介素 6 (IL 6 )在肾癌细胞系GRC 1中的表达及其意义。方法　运用ELISA方法检测GRC 1培养上清中IL 6的浓度 ,运用免疫细胞化学和反转录聚合酶链反应 (RT PCR)在翻译和转录水平上检测IL 6及其受体系统的表达 ;观察重组人IL 6和IL 6中和抗体对GRC 1生长的影响 ;用表达IL 6反义RNA的质粒转染GRC 1,观察其增殖的改变。结果　GRC 1培养上清IL 6浓度为 46 5pg/ml,RT PCR显示IL 6mRNA及IL 6受体mRNA有表达 ;在重组人IL 6和IL 6中和抗体作用下生长无明显改变 ;转染表达IL 6反义RNA的质粒以后 ,GRC 1细胞IL 6分泌下降到 2 5 0pg/ml,但生长未受抑制。结论　尽管肾癌细胞系GRC 1可以表达IL 6 ,但重组人IL 6不能促进GRC 1的增殖 ,中和抗体和反义基因不能抑制细胞增殖 ,提示IL 6可能不是GRC 1的生长因子 ;GRC 1可以表达IL 6受体系统 (IL 6R和gp130 ) ,提示IL 6的信号传导中断可能发生在受体下游。     

新形势下医院思想政治工作的特点与对策

随着社会主义市场经济理论的逐步确立 ,医疗卫生体制改革的深化 ,人们的社会、经济生活发生了巨大的变化。医疗市场的竞争也日趋激烈 ,医院职工的价值观念、利益格局发生了变革 ,竞争意识、进取精神和经济意识明显加强。同时 ,市场经济的负面影响使得一些人产生消极落后的人生价值观 ,“拜金主义”、“享乐主义”和“极端个人主义”的思潮不同程度地渗透到医院 ,部分医务人员工作、思想上随大流 ,生活上图享受 ,出现了收受“红包”、索礼吃请、不负责任和服务态度差等医德问题和行业不正之风 ,影响了医务工作者的圣洁形象。如何改善和加强思…     

共刺激分子B7在泌尿系肿瘤的表达

目的探讨Ｂ７与ＣＤ２８和ＣＴＬＡ４作为共刺激信号在抗肿瘤免疫中的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）和免疫组织化学方法，检测４５例泌尿系肿瘤Ｂ７基因在ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达情况。结果ＲＴＰＣＲ１１例阳性，免疫组化６例阳性，ＲＴＰＣＲ与免疫组化的检测结果有所不同。病理切片观察Ｂ７阳性肿瘤有明显的淋巴细胞浸润，肿瘤内有坏死。结论某些肿瘤细胞表达Ｂ７基因，肿瘤内有抗肿瘤免疫反应，提示Ｂ７基因表达可能与预后有关     

肾细胞癌的微卫星不稳定性研究

目的　探讨微卫星不稳定性在肾细胞癌发生发展中的作用及其与临床病理指标的关系。　方法　应用ＰＣＲ 方法检测了３４ 例新鲜肾细胞癌标本中不同染色体上的１５ 个微卫星位点。　结果　３４ 例肾癌中有１５ 例（４４％ ）表现为微卫星不稳定性，并多见于晚期肿瘤（Ⅲ～Ⅳ期） 。　结论　微卫星不稳定性较广泛地存在于肾细胞癌中，可能与肿瘤发展相关。     

阵发性心房颤动的三维电解剖标测指导左心房线性消融治疗

目的探讨三维电解剖标测指导左心房线性消融治疗阵发性心房颤动(房颤)的有效性和安全性。方法对29例入选的阵发性房颤患者使用Carto系统建立左心房三维电解剖图,结合肺静脉造影确定肺静脉开口,围绕左、右上、下肺静脉口完成环肺静脉线性消融。预设温度43℃,最大功率30W,每点消融时间大于20s。局部电位振幅降低50%以上再移动靶点,逐点完成预定消融线。结果本组患者平均操作时间180±18min,透视时间80±20min。平均放电次数120±15次。术后随访6个月。24例无房颤再发;3例在术后3个月内再发房颤,但次数较前明显减少,6个月后无房颤再发;1例偶有房颤发作;1例复发。所有患者均无肺静脉狭窄发生。结论三维电解剖标测指导左心房线性消融治疗阵发性房颤,在成功率及安全性上具有明显的优势。     

肌卫星细胞自我更新

骨骼肌纤维由于运动、外伤等可能发生损伤、凋亡及坏死,同时不断修复和再生.早期的假说认为新的肌纤维来源于原有肌纤维的出芽生殖[1].后来的研究表明,骨骼肌的修复和再生是通过位于肌纤维浆膜和基膜之间的单个核细胞-肌卫星细胞(muscle satellite cell, MSC)进行的[2].     

辛伐他汀对糖调节受损患者的干预作用

目的探讨辛伐他汀对糖调节受损患者的保护作用。方法选取在本院确诊的糖调节受损患者105例,随机分为对照组50例和辛伐他汀干预组55例,随访2年,观察三酰甘油（Triglyeride,TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、空腹胰岛素（FINS）、糖负荷后2小时胰岛素（2hINS）、β细胞功能指数（HBCI）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）的变化情况。结果辛伐他汀组比对照组更明显的改善患者的代谢状态,减轻患者的高胰岛素血症和胰岛素抵抗,降低2型糖尿病、高血压病、冠心病的新发病率。结论辛伐他汀除了能有效地降低血脂外,还能改善糖调节异常患者的胰岛素抵抗及β细胞功能指数,降低2型糖尿病、高血压病、冠心病的新发病率。     

通过载体DHFR基因的弱化提高抗体在CHO细胞中的表达

目的:提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR-)中表达的产量。方法:对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后,构建不同的嵌合抗体表达载体。用这些载体转染CHO细胞并以递增量的氨甲喋呤(MTX)筛选,用ELISA法测定每个加压水平的各组细胞中抗体的表达水平。结果:通过对表达载体中DHFR基因表达调控序列的突变,使DHFR的基础表达水平产生了不同程度的弱化。转染CHO细胞后,可明显提高MTX加压增加抗体表达的效果,抗体表达水平的增加基本与DHFR基因的弱化程度呈正相关。从弱化程度最高的pWS2-BDI组中,我们筛选得到表达量达55μg/(106细胞·24 h)的高表达细胞株,经锌离子进一步诱导后,表达量可达100μg/(106细胞·24 h)以上。结论:弱化表达载体中DHFR的表达,可提高MTX对工程抗体表达的增加效果。