Peg-IFN治疗NAs经治HBeAg阴性CHB患者的疗效分析及预测

目的 探讨聚乙二醇干扰素α-2b(Peg-IFNα-2b)联合核苷(酸)类似物(NAs)治疗NAs经治的乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阴性慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者的疗效及其影响因素,以及白细胞介素(IL)-28B和程序性死亡受体-1(PD-1)的单核苷酸多态性与干扰素治疗应答的相关性。 方法 回顾性收集2020年1月—2022年12月就诊于中南大学湘雅医院HBeAg阴性的CHB患者,以Peg-IFNα-2b联合NAs治疗为研究组,NAs单药继续治疗为对照组,分析两组患者在治疗的第12、24、48周的临床疗效,以及第72周患者持续应答及复发情况,并采用PD-1及IL-28B单核苷酸多态性评估HBeAg阴性CHB患者对干扰素治疗应答的价值。 结果 在治疗的第48周,研究组HBeAg阴性CHB患者应答率[52.05%(38/73)]高于对照组[1.64%(1/61),P＜0.05];研究组HBeAg阴性CHB患者中基线HBsAg＜100 IU/mL相较于HBsAg≥1 000 IU/mL、HBsAg＜1 000 IU/mL相较于HBsAg≥1 000 IU/mL的患者治疗第48周应答率均更高(均P＜0.05);单因素和多因素分析显示,研究组HBeAg阴性CHB患者中HBsAg基线水平(OR=1.004, 95%CI: 1.001~1.006)和治疗第24周HBsAg下降幅度(OR=0.111,95%CI：0.034~0.362)是干扰素联合NAs治疗应答的影响因素(均P＜0.05);单核苷酸多态性分析结果显示,研究组HBeAg阴性CHB患者中PD-1 rs10204525 C/T杂合突变型在应答人群占比更高(66.67% VS 16.67%,P＜0.05),而IL-28B无明显差异(P＞0.05)。 结论 NAs经治的HBeAg阴性CHB患者联合Peg-IFNa-2b治疗可达到更高的HBsAg清除率和血清学转换率,治疗第24周HBsAg下降幅度可较好地预测治疗第48周的应答。低HBsAg基线水平患者及携带PD-1 rs10204525C/T杂合突变基因的患者接受Peg-IFNa-2b的疗效更佳。     

2例TTV感染者中TTV DNA的基因变异分析

目的探讨TTV的基因变异情况。方法PCR扩增BD与CSH血清中的TTV DNA后进行分子克隆,每例挑选10个不同TTV DNA克隆进行测序。不同克隆之间及其与G1 a亚型TA278之间进行序列比较并进行进化树分析。结果BD存在2种不同的TTV病毒株,都为G1 a亚型。CSH中存在7种不同的TTV病毒株,分别属于G1 a和G1b亚型。结论CSH中TTV的基因变异比BD中的复杂得多。     

特利加压素治疗肝肾综合征的疗效观察

目的观察特利加压素对肝肾综合征的治疗效果.方法25例病人分治疗和对照二组,在综合治疗基础上治疗组使用特利加压素2 mg/d,对照组使用多巴胺20 mg/d,治疗期间观察患者临床症状、尿量,检测血尿素氮及肌酐浓度.结果疗程结束时,治疗组有8例患者临床症状有不同程度改善.尿量由治疗前的(670±192)ml增加到(1 733±609)ml,较对照组有明显增加(P＜0.05),血尿素氮由治疗前的(23.9±8.6)μmol/L降到(8.7±3.4)μmol/L,肌酐由治疗前(256.3±55.4)μmol/L降至(116.5±30.5)μmol/L,二者与对照组比较有显著差异(P＜0.05).治疗组有3例好转出院,而对照组无一例存活.结论临床观察结果表明,特利加压素对肝肾综合征有一定的疗效,有进一步研究的价值.     

慢性重型肝炎患者侵袭性真菌感染的临床特点 及治疗分析

目的：调查慢性重型肝炎（CSH）患者并发侵袭性真菌感染（IFI）的临床特点及抗真菌药物的疗效,以期提高其诊治水平。方法：对79例慢性重型肝炎并发IFI患者的临床表现、血常规、影像学、真菌学特征、抗真菌治疗方案及疗效进行回顾性分析,比较氟康唑与伏立康唑抗真菌的疗效。结果：13例（16.5%）患者较长时间使用糖皮质激素或其他免疫抑制剂,40例（50.6%）患者有侵入性操作史,61例 (77.2 %)使用过1~6种广谱抗生素。73例(92.4%)患者有发热,96.2%的患者白细胞及中性粒细胞增高,感染部位以肺部（31.6%）、肠道（26.2%）和口腔（14%）多见。70.9％患者可查到真菌,以白色念珠菌（40.9％）和曲霉菌（21.1％）为主。40%真菌性肺炎患者肺部CT可表现相对特异性的晕轮征和新月征。伏立康唑治疗IFI有效率明显高于氟康唑（71.4％ vs. 39.0％,P＜0.05）。伏立康唑治疗肺部曲霉菌感染12例,有效8例,死亡4例,有效率66.7％。结论：大多数CSH患者并发IFI有高危因素。感染部位以肺部和肠道常见,菌种以白色念珠菌和曲霉菌最为常见。伏立康唑的疗效好于氟康唑,可提高慢性重型肝炎并发IFI患者的生存率。     

褪黑素、莫达非尼对小鼠试验性急性肝衰竭的影响

目的 研究褪黑素、莫达非尼对小鼠试验性急性肝衰竭的影响.方法 雄性昆明小鼠,给予D-半乳糖胺（D-Gal N）和脂多糖（LPS）同时腹腔注射,制备小鼠急性肝衰竭模型;并于造模前2h,治疗组分别给予相应药物灌胃,对照组给予蒸馏水灌胃.比较各组小鼠的24h存活率,血清转氨酶水平,肝脏组织病理学改变,血清中TNF-α、IL-1的水平,肝脏组织中SOD、MDA、GR、GSH、NO、NOS的水平.结果 D-Gal N/LPS可以导致小鼠急性肝衰竭;褪黑素可以提高小鼠存活率,减轻肝脏病变程度,降低血清转氨酶活性及TNF-α、IL-1的浓度,增加肝脏组织中SOD、GR的活性,降低NOS的活性及MDA、NO的浓度.莫达非尼可加重肝脏病变程度,升高血清转氨酶的活性及TNF-α、IL-1的浓度,降低肝脏组织中SOD、GR的活性及升高MDA的浓度.结论 褪黑素可减轻D-Gal N/LPS所致的急性肝衰竭,提高小鼠的存活率,莫达非尼可加重小鼠的肝损伤.其作用机制可能与两药影响睡眠从而影响炎性细胞因子（如TNF-α、IL-1）的释放和机体氧化能力的改变有关.     

HBx基因缺失型突变体HBx-d382与HBx-d431原核表达载体的构建和鉴定

目的为探讨HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431在临床上应用的价值,构建HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431原核表达载体。方法以pGM-T/HBx-d382和pGM-T/HBx-d431质粒为模板,PCR扩增含EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的HBx基因片段。HBx基因PCR扩增产物与载体pET-28a(+)经双酶切、连接,形成重组DNA后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经卡那霉素筛选、酶切鉴定和DNA序列测定,筛选出重组HBx基因缺失型突变体原核表达载体。结果成功构建了重组pET-28a(+)/HBx-d382和pET-28a(+)HBx-d431原核表达载体,重组前后HBx基因片段序列一致。结论pET-28a(+)/HBx-d382和pET-28a(+)/HBx-d431原核表达载体构建成功,为HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431蛋白的免疫原性和临床应用的研究奠定了基础。     

HBsAg阳性少见血清学模式HBV感染者基因型分析

目的分析HBsAg阳性少见血清学模式HBV感染者基因型。方法采用型特异性引物PCR法对深圳地区304例常见血清学模式与136例少见血清学模式HBV感染者基因型进行检测。结果常见与少见血清学模式HBV感染者基因型为B型、C型和混合型B＋C,以B型和C型为主。常见血清学模式之间和少见血清学模式之间基因型构成比无显著差异（P〉0.05）。结论深圳地区少见血清学模式HBV感染者基因型以B型和C型为主,其次为混合型B＋C。     

脱氧野尻霉素衍生物抗乙型肝炎病毒的体外试验研究

目的:观察脱氧野尻霉素(DNJ)衍生物N—苄基—1—脱氧野尻霉素(P-DNJ)与N—壬基—1—脱氧野尻霉素(NN-DNJ)的体外抗乙型肝炎病毒(HBV)作用。方法:以HBVDNA转染的人肝癌细胞株HepG22,2,15细胞为靶细胞,以不同浓度的试验药物培养细胞,在第6天、第10天时应用时间分辨免疫荧光分析法和荧光实时定量聚合酶链反应法检测培养基上清液中HBsAg、HBeAg和HBVDNA,同时应用MTT法检测药物对细胞的毒性。结果:P-DNJ、NN-DNJ在试验浓度(5~125μg.mL-1)内未见细胞毒性作用,在浓度为125μg.mL-1时能显著减少细胞培养基上清液中HBsAg、HBeAg、HBVDNA的分泌。结论:P-DNJ、NN-DNJ在体外细胞培养试验中发现有抗HBV作用。     

2例输血传播病毒感染者DNA序列分析

为探讨输血传播病毒(TTV)的基因变异及其与致病性的关系，对两例TTV感染者的不同TTV克隆DNA序列进行了分析。     

HBx基因缺失突变体HBx-d382对L02细胞增殖及非锚定依赖生长能力的影响

目的:建立稳定表达HBx基因缺失突变体(HBx-d382)的L02肝细胞株,并探讨其对L02细胞增殖的影响.方法:含HBx-d382重组质粒(pCDNA3.0/HBx-d382)经过PCR扩增、双酶切及测序鉴定后,通过脂质体转染和G418筛选获得稳定表达HBx-d382的L02肝细胞株.PCR鉴定基因组中HBx-d382基因整合.RT-PCR和Western blot鉴定其表达,进一步通过MTT法,软琼脂克隆形成实验检测HBx-d382对L02细胞增殖及非锚定依赖生长能力的影响.用流式细胞仪检测其对细胞周期的影响.结果:经PCR扩增、双酶切及测序鉴定HBx-d382重组质粒构建正确.稳定转染该质粒的L02细胞基因组存在HBx-d382整合.RT-PCI汲Western blot表明在RNA水平和蛋白水平存在HBx-d382表达,稳定表达HBx-d382的L02细胞其增殖能力和非锚定生长能力增强,S+G2期细胞比例升高.结论:成功构建了HBx缺失突变体的真核表达模型,证实HBx缺失突变体能影响细胞增殖,这种效应可能与其影响细胞周期调控相关.